雞球蟲病免疫預(yù)防研究現(xiàn)狀

王秋悅，鄭梅竹，楊 鵬，任鐵燕，倪 靜，師清博

(1河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北秦皇島，066600;2長(zhǎng)春師范學(xué)院;3吉林省琿春市牧業(yè)管理局)

雞球蟲病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的一種細(xì)胞內(nèi)寄生蟲病。幾乎可以說，凡養(yǎng)雞的地方，就有雞球蟲。而集約化養(yǎng)雞場(chǎng)則更是球蟲病爆發(fā)的適宜場(chǎng)所。一直以來，雞球蟲病主要依靠藥物來進(jìn)行防治。近年來藥物在球蟲病控制中的作用越來越受到限制，因而用免疫方法控制雞球蟲病逐漸受到重視，并有望成為主要的技術(shù)手段。近年來隨著分子生物學(xué)和現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，雞球蟲疫苗以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)顯示出在未來球蟲病控制中的誘人前景，并可能成為雞球蟲病防治的主要手段。為了全面控制雞球蟲病，人們對(duì)雞球蟲病的保護(hù)性免疫機(jī)制進(jìn)行了研究，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了疫苗的研制。利用球蟲疫苗防治雞球蟲病，不僅能徹底解決雞球蟲耐藥性的問題，而且對(duì)于生產(chǎn)綠色食品、保證人類健康是一必不可少的前提。自從1965年Coccivac疫苗問世及1985年Immucox疫苗研制成功以來，抗雞球蟲病疫苗已經(jīng)在養(yǎng)禽中得到應(yīng)用。球蟲疫苗的研究經(jīng)歷了活苗、亞單位苗和基因工程苗這幾個(gè)研究階段。

1 球蟲活苗

早期人們就注意到了雞體在感染1次球蟲后，能夠?qū)υ俅吻蛳x的侵襲產(chǎn)生某種程度的抵抗力，反復(fù)感染后能使雞產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力。為此，研究者設(shè)計(jì)了先用小劑量的卵囊或致弱的卵囊免疫雞，并且已經(jīng)研究出許多實(shí)用的疫苗。球蟲活苗是目前唯一在實(shí)際生產(chǎn)中投入使用的球蟲疫苗，主要包括強(qiáng)毒活苗和弱毒活苗［1］。

1.1 強(qiáng)毒苗的研制

雞球蟲免疫預(yù)防的研究最早采用強(qiáng)毒蟲活苗。強(qiáng)毒苗的蟲株是直接從自然界發(fā)生球蟲病的病雞體內(nèi)或糞便中分離出來的，然后采用單卵囊分離法分離并增殖各種艾美耳球蟲卵囊，再按一定比例混合配以適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，即組成強(qiáng)毒活苗。到目前為止，商業(yè)化野生型蟲株活疫苗在集約化雞場(chǎng)已經(jīng)使用了近50年，廣泛應(yīng)用于主要禽類生產(chǎn)國(guó)(美國(guó)、加拿大、巴西、南美的一些國(guó)家，歐洲和亞洲的許多國(guó)家)，僅Coccivac和Immucox 2001～2004年就銷售了25億份［2］。

1.2 弱毒苗的研制

弱毒活苗是從雞的糞便中通過飽和鹽水漂浮法收集到卵囊后，采用單卵囊擴(kuò)增法來純化卵囊，然后通過減弱蟲株的致病性得到致弱蟲株，這樣可以減低對(duì)宿主的危害性，并且能夠產(chǎn)生足夠的免疫力［3］。目前使用的早熟株球蟲疫苗有Paracox(含有柔嫩、巨型、堆型艾美耳球蟲等7種早熟株)和Livacox(含有堆型和巨型艾美耳球蟲的早熟株)，可應(yīng)用于各種雞，尤其是種雞。國(guó)內(nèi)也有許多地方推出了球蟲弱毒苗，如北京、河北、上海、廣東培育出雞胚傳代、早熟選育雞球蟲混合弱毒苗。這類疫苗為防治雞球蟲病起到了一定的作用。

2 亞單位疫苗

目前處于研究階段的疫苗還有亞單位疫苗，即利用單抗和DNA重組技術(shù)生產(chǎn)出可產(chǎn)生保護(hù)作用的球蟲蛋白質(zhì)抗原，并制成疫苗進(jìn)行免疫控制。Jenkins等［4］用E.acervuLina重組p240/p160子孢子表面抗原和p250免疫原性裂殖子抗原免疫雞，發(fā)現(xiàn)能誘導(dǎo)很好的抗原特異性T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，顯示出這些重組疫苗能誘導(dǎo)CMI反應(yīng)。利用配子體抗原進(jìn)行母源免疫也具有很好的免疫保護(hù)效果。Belli SI等［5］采用親和柱純化的56，82，250 kU配子體抗原加入弗氏佐劑免疫產(chǎn)蛋雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)后代雞群對(duì)E.maxima感染具有明顯保護(hù)作用，免疫后卵囊排出量下降49.2%，且三者具有共同的抗原表位?，F(xiàn)在，已經(jīng)商品化的配子體抗原疫苗COXABIC在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用表明，球蟲卵囊排出量下降50%～80%，可用于控制生產(chǎn)中的球蟲病。Talebi等［6］用來自E.tenella和E.acervuLina抗原序列合成的一個(gè)多肽，加弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑免疫雞，結(jié)果顯示合成肽疫苗誘導(dǎo)了高水平的抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)，對(duì)E.tenella或E.acervuLina能提供部分交叉保護(hù)性。

3 重組苗

目前，球蟲病研究的焦點(diǎn)仍主要集中在運(yùn)用雜交瘤單克隆抗體技術(shù)、分子克隆技術(shù)、免疫標(biāo)記技術(shù)等來鑒定出蟲種各階段的重要抗原，以篩選更多的保護(hù)性抗原，制成基因工程多價(jià)苗。一些免疫效果較為顯著的E.tenella重組疫苗候選抗原如下:

3.1 5401 基因

重組抗原5401是最早報(bào)道的雞球蟲抗原表達(dá)產(chǎn)物，是Danforth等用抗球蟲抗體從cDNA文庫(kù)中篩選出的一個(gè)基因片段，分子量大小為31 kU。Du等［7］將從E.tenella浙江株分離出來的5401基因插入到pET－30a表達(dá)載體中，在大腸桿菌中誘導(dǎo)高效表達(dá)后，將pET－30a－5401融合蛋白、融合蛋白+佐劑以及融合蛋白+人參皂角免疫雛雞進(jìn)行免疫保護(hù)性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5401融合蛋白免疫雛雞后能使淋巴細(xì)胞的增殖水平和血清抗體水平得到顯著增強(qiáng)，具有良好的免疫原性，同時(shí)人參皂角和弗氏佐劑均能顯著提高機(jī)體對(duì)5401融合蛋白免疫應(yīng)答水平。2005年Du等［8］又構(gòu)建了ZJ111/pcDNA3－5401DNA疫苗，并將其分別以不同劑量口服免疫雛雞，結(jié)果顯示淋巴細(xì)胞增殖水平明顯高于陰性對(duì)照組，其中108和109CFU劑量的免疫保護(hù)率分別為55%和57.5%。

3.2 λMzp5-7 基因

λMzp5-7是目前研究較多的表面抗原。它既是球蟲裂殖子表面抗原，也是子孢子時(shí)期的表面抗原。Binger用λMzp5-7基因與痘苗病毒重組構(gòu)建的重組病毒免疫雛雞，1周后能在血清中檢測(cè)到抗λMzp5-7的抗體，且自然感染球蟲恢復(fù)期獲得的血清，能與λMzp5-7重組抗原起免疫反應(yīng)。2003年秦睿玲等［9］克隆了E.tenella廣州株子孢子表面抗原λMzp5-7，全長(zhǎng)為936 bp，與Binger等報(bào)道的國(guó)外株的同源性為98%。然后又構(gòu)建了λMzp5-7真核表達(dá)載體并在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行成功表達(dá)，并將pVAX1－λMzp5-7重組質(zhì)粒通過滴鼻和肌注方式免疫雛雞進(jìn)行了免疫保護(hù)效果的研究。結(jié)果顯示含有λMzp5-7抗原的重組質(zhì)粒能誘導(dǎo)有效的細(xì)胞免疫和體液免疫，而且與對(duì)照組相比，卵囊的排出量和排出時(shí)間明顯縮短，盲腸病變較小，起到了很好的免疫保護(hù)效果。

3.3 TA4 抗原

TA4是Brothers等用兩個(gè)中和性單抗篩選的子孢子抗原，其分子量為25 kU，但在蟲體內(nèi)，其分子量大小為21～28 kU。Brothers等［10］克隆了該基因的全長(zhǎng)cDNA，并且發(fā)現(xiàn)抗TA4蛋白的單克隆抗體能夠抑制子孢子侵入細(xì)胞，這說明TA4蛋白可能與蟲體侵入宿主細(xì)胞有關(guān)。潘曉亮等用E.tenella北京株的pET－TA4重組蛋白和表達(dá)的活菌免疫雛雞，發(fā)現(xiàn)雞的相對(duì)增重率分別為61.47%和94.15%，相對(duì)卵囊排出量為43.95%和78.85%，特別是在感染后5～7 d，糞便中的卵囊排出量明顯低于紅對(duì)照，說明該蛋白具有一定的保護(hù)性［11］。吳紹強(qiáng)等［12］將Et1A與TA4抗原以融合方式插入真核表達(dá)載體pcDNA3.1中，構(gòu)建成核酸疫苗pCTE，免疫雞后攻蟲發(fā)現(xiàn)，50 μg pCTE并聯(lián)合干擾素免疫時(shí)雞的增重效果較為明顯，而且盲腸病變值變小，ACI在160以上，說明對(duì)E.tenella的感染產(chǎn)生了一定的保護(hù)力。

3.4 GX3262 基因

GX3262基因是Miller等［13］用多克隆的高免疫雞血清從E.tenellacDNA文庫(kù)中篩選出來的，它是第一個(gè)報(bào)道的折光體蛋白，其序列全長(zhǎng)957 bp，其蛋白分子質(zhì)量為26 kU。GX3262基因在大腸桿菌中以β－半乳糖苷酶融合蛋白的形式表達(dá)，其表達(dá)產(chǎn)物對(duì)E.tenella，E.ruaxirua，E.acervuLina和E.necatrix都有部分保護(hù)作用。即GX3262有4個(gè)種的交叉性，用天然的或重組GX3262抗原免疫，都能使雞盲腸病變計(jì)分降低 50%［14］。

3.5 CheY－SO7

CheY－SO7的序列涵蓋GX3262的序列，是Marck Sharp實(shí)驗(yàn)室研究人員用pJC264構(gòu)建的含SO7基因的表達(dá)載體CheY－SO7在大腸桿菌中表達(dá)的融合蛋白，用此重組抗原免疫雛雞后可降低E.tenella，E.maxia和E.acenvuLina中等劑量引起的球蟲病變。而且，未經(jīng)CheY－SO7免疫的雞群中，經(jīng)E.tenella攻毒后，85%以上的雞的盲腸病變記分≥2.0(平均2.90)，而經(jīng)CheY－SO7免疫的雞群，85%以上的雞的病變記分≤2.0(平均1.72)，說明 CheY－SO7 是有部分保護(hù)力的［15］。

3.6 微線蛋白MIC

微線是頂復(fù)器門原蟲一個(gè)最小的特殊的分泌細(xì)胞器，分泌可溶性蛋白和跨膜蛋白，并將其分泌的蛋白運(yùn)送至與宿主細(xì)胞配體相互作用的蟲體表面。這些蛋白在蟲體運(yùn)動(dòng)和入侵宿主細(xì)胞時(shí)起重要作用，特別是介導(dǎo)蟲體與宿主細(xì)胞表面的黏附和傳播由寄生蟲細(xì)胞骨架產(chǎn)生的動(dòng)力。Tomely FM等［16］從子孢子cDNA中克隆出EtMIC2全序列，序列全長(zhǎng)1 209 bp，EtMIC2是球蟲微線體上的一種酸性蛋白，該蛋白只在E.tenella孢子化階段和裂殖生殖階段蟲體的表面表達(dá)。在入侵宿主細(xì)胞過程中，該蛋白集中在蟲體入侵的頂端，侵入宿主細(xì)胞后，迅速散布在整個(gè)感染細(xì)胞的表面。Liillehoj HS［17］用EtMIC2免疫雞胚，誘導(dǎo)出了較高水平的抗體反應(yīng)，而且與對(duì)照組相比，卵囊排出量降低，身體質(zhì)量增加。隨后他又將EtMIC2與雞細(xì)胞因子(IL－8，IL－16，TGF－β和淋巴細(xì)胞趨化因子)聯(lián)合免疫，結(jié)果顯示與EtMIC2免疫相比，聯(lián)合免疫效果更好。

3.7 Rhomboid 蛋白

Rhomboid蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)參與表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)及表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的調(diào)節(jié)器。近年來已在頂器門原蟲的Cryptosporidium parvum，Eimeria tenella，Plasmodium berghei，Plasmodium falciparum，Theileria annuLata，Toxoplasma gondii中發(fā)現(xiàn)了Rhomboid蛋白(ROMs)［18］，尤其是已發(fā)現(xiàn)Rhomboid與頂器門原蟲的黏附和侵入宿主細(xì)胞有關(guān)。

隨著人們對(duì)弓形蟲和瘧原蟲侵入分子機(jī)制的系統(tǒng)研究以及Rhomboid蛋白水解酶的發(fā)現(xiàn)及其功能的深刻認(rèn)識(shí)，已經(jīng)確立了Rhomboid在頂器門原蟲侵入宿主細(xì)胞過程中水解微線蛋白(MIC)致使蟲體進(jìn)入靶細(xì)胞的重要地位。

2004年李建華等［20］在構(gòu)建E.tenellacDNA表達(dá)文庫(kù)和制備子孢子階段特異性單抗的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲基因的篩選，獲得了E.tenellaF2雜交株rhomboid基因(DQ323509)。該基因開放性閱讀框?yàn)?74 bp，編碼257個(gè)氨基酸殘基。蛋白質(zhì)同源性比較顯示與E.tenella同屬頂器門原蟲的瘧原蟲Rhomboid蛋白的同源性最高。隨后又將E.tenellaRhomboid蛋白在大腸桿菌進(jìn)行了原核表達(dá)，顯示出良好的免疫原性。2005年陳超等研究證明了Rhomboid重組蛋白免疫雛雞后可對(duì)E.tenella卵囊攻擊產(chǎn)生一定保護(hù)力。2008年楊桂連等［21］又將rhomboid基因克隆至雞痘病毒載體pUTA2復(fù)合啟動(dòng)子下游，構(gòu)建了真核表達(dá)重組質(zhì)粒pUTA－Rhomboid，用這一重組雞痘病毒免疫雛雞后，發(fā)現(xiàn)接種雞外周血CD4+及CD8+T淋巴細(xì)胞含量明顯高于非免疫對(duì)照組，而且重組病毒對(duì)雞的質(zhì)量增加效果也較為明顯，顯示了對(duì)E.tenella的攻擊具有一定的保護(hù)效果。2009年王秋悅等構(gòu)建了E.tenella rhomboid基因穿梭表達(dá)載體pMV261－Rho和整合表達(dá)載體pMV361－Rho，并在BCG內(nèi)進(jìn)行了rhomboid基因的誘導(dǎo)表達(dá)和免疫原性分析［22］，動(dòng)物免疫保護(hù)性實(shí)驗(yàn)表明，rBCG疫苗對(duì)E.tenella卵囊的攻擊具有一定的免疫保護(hù)作用，可明顯改善雞的質(zhì)量增加和盲腸病變記分，并誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，rhomboid基因與ChIL－2基因聯(lián)合，構(gòu)建雙價(jià)rBCG，其滴鼻免疫組抗球蟲指數(shù)為184.0;隨后又在此基礎(chǔ)上構(gòu)建EGFP標(biāo)記的rBCG，對(duì)Rhomboid蛋白在雞體內(nèi)各組織器官中的分布及穩(wěn)定性和消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，在雞肝、脾、肺、腎、盲腸各組織器官均檢測(cè)到rhomboid基因表達(dá)，雛雞免疫14 d后基因表達(dá)量達(dá)到最高，隨后開始下降，至28 d后消失［23］。因此，Rhomboid蛋白既是重要的信息傳遞分子又是重要的侵入分子，以上這些信息都為Rhomboid作為疫苗候選基因的研究提供理論依據(jù)和分子基礎(chǔ)。

3.8 蛋白激酶

E.tenella細(xì)胞周期依賴性激酶(EtCRK2)與真核生物和其他頂復(fù)器原蟲細(xì)胞周期依賴性激酶(CDKs)非常相似。研究表明CDKs是一類相對(duì)保守的酶家族，通過絲氨酸/蘇氨酸磷酸化調(diào)控底物蛋白的活性，在促進(jìn)有絲核分裂和減數(shù)核分裂周期中是必需的。E.tenellacGMP依賴的蛋白激酶在蟲體滑移運(yùn)動(dòng)和入侵宿主細(xì)胞過程中起重要作用［24］。

E.tenella鈣依賴蛋白激酶(calmoduLin－domain protein kinases，EtCDPK)存在于E.tenella子孢子頂器中，能刺激感染球蟲雞的T淋巴細(xì)胞增殖，一旦子孢子進(jìn)入宿主細(xì)胞，在宿主細(xì)胞膜子孢子侵入處可發(fā)現(xiàn)在子孢子滯留的EtCDPK，提示EtCDPK在子孢子入侵宿主細(xì)胞時(shí)起特殊的作用。

3.9 熱應(yīng)激蛋白

熱應(yīng)激蛋白(HSP)是一大類普遍存在的糖蛋白，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的HSP參與蛋白質(zhì)的生物合成、折疊和分泌;也有一部HSP定位于線粒體中，粘附到新生成的尚未折疊的前體蛋白上，促進(jìn)這些蛋白質(zhì)在基質(zhì)中的移行和再折疊。球蟲在侵入宿主機(jī)體過程中，由于所處環(huán)境迅速改變，HSP的生成量隨之增加，因此HSP的表達(dá)被認(rèn)為有利于蟲體適應(yīng)新的生物環(huán)境。Péroval M等［25］研究發(fā)現(xiàn)，E.tenella熱應(yīng)激蛋白90(EtHSP90)位于帶蟲空泡內(nèi)，在蟲體入侵感染過程中表達(dá)量增加，使用特異性抗體和格爾德霉素(GA)抑制EtHSP90的功能之后，發(fā)現(xiàn)E.tenella入侵宿主細(xì)胞和在宿主細(xì)胞中的生長(zhǎng)發(fā)育受阻。在其它頂復(fù)器原蟲(瘧原蟲、弓形蟲等)中也發(fā)現(xiàn)HSP90有類似的功能。

4 DNA疫苗

DNA疫苗又稱為核酸疫苗，是利用編碼致病菌抗原的基因，加上適當(dāng)?shù)恼{(diào)控元件(啟動(dòng)子，增強(qiáng)子)直接注射宿主，在宿主體內(nèi)表達(dá)天然蛋白，然后提呈給MHCI和MHCII，因此能被宿主的免疫系統(tǒng)識(shí)別。在雞體內(nèi)，通常用來源于巨細(xì)胞病毒(CMV)的早期啟動(dòng)子或來源于勞斯肉瘤病毒(RSV)的長(zhǎng)末端啟動(dòng)子作為DNA疫苗的調(diào)控元件。這些載體能使抗原蛋白短暫地有效表達(dá)，能長(zhǎng)時(shí)間誘導(dǎo)較好的保護(hù)性免疫力。Songa等［26］將E.acervuLina的3－1E基因與含CMV啟動(dòng)子的表達(dá)載體pBK－CMV相連，構(gòu)建DNA疫苗，分別以不同劑量質(zhì)粒通過肌肉或皮下注射免疫雛雞，E.acervuLina攻蟲后，發(fā)現(xiàn)核酸疫苗免疫組的雞群卵囊排出量下降50%，而且脾細(xì)胞中T細(xì)胞亞群和十二指腸的IELs均有明顯變化。Kramer等將E.tenellaS07構(gòu)建的核酸疫苗高劑量(50 ug)免疫雛雞時(shí)，可使球蟲感染雞的卵囊排出量下降75.73%，雞的質(zhì)量增速也較明顯提高，可達(dá)到95.73%。秦睿玲等構(gòu)建了重組質(zhì)粒 pVAX1－Mzp5－7質(zhì)粒，以該質(zhì)粒免疫雛雞后，可有效誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫，動(dòng)物試驗(yàn)表明免疫該質(zhì)粒后，可有效改善盲腸病變。

5 佐劑苗

CpG序列(CpG motifs)是指一類以非甲基化的胞嘧啶和鳥嘌呤核苷酸為核心的寡聚脫氧核糖核苷酸(oligodeoxynucleotides，ODN)。CpG DNA可以誘導(dǎo)B細(xì)胞分化，直接激活單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，引起這些細(xì)胞分泌Th1樣為主的細(xì)胞因子，增強(qiáng)天然免疫反應(yīng)和誘導(dǎo)獲得性免疫反應(yīng)。最近研究發(fā)現(xiàn)CpG能激活雞的巨噬細(xì)胞，在體內(nèi)和體外均具有免疫刺激作用。DallouL等將含有未甲基化的合成CpG寡聚脫氧核苷酸(CpG－ODNs)與重組蛋白MIC2同時(shí)使用，用于雞胚免疫，進(jìn)行動(dòng)物攻毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)未甲基化的合成CpG寡聚脫氧核苷酸可有效激發(fā)重組蛋白MIC2產(chǎn)生更強(qiáng)的抗體水平。

有研究報(bào)道人參皂苷對(duì)病毒抗原和細(xì)菌抗原能增強(qiáng)抗體反應(yīng)，為了弄清楚人參皂苷是否能作為雞球蟲疫苗的佐劑，Du等用E.tenella重組抗原5401與人參皂苷(每只雞用量分別為0，0.25，0.50，1.0 mg)免疫3日齡雛雞，14日齡加強(qiáng)免疫1次，并對(duì)隨后的E.tenella攻擊進(jìn)行了免疫保護(hù)性指標(biāo)測(cè)定。結(jié)果含0.5 mg和1.0 mg的人參皂苷的重組抗原能誘導(dǎo)較高的抗體反應(yīng)和淋巴細(xì)胞增殖，卵囊排出量和盲腸病變記分明顯降低，說明人參皂苷可能是一個(gè)很好的球蟲疫苗的候選佐劑。

另外，研究還發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞因子與重組蛋白一起免疫雞后，能增強(qiáng)對(duì)E.tenella攻擊的保護(hù)。許多研究都表明，重組蛋白與細(xì)胞因子聯(lián)合免疫的效果比單獨(dú)免疫重組蛋白的效果好［27］。球蟲DNA疫苗與細(xì)胞因子聯(lián)合免疫后，能增強(qiáng)保護(hù)性免疫反應(yīng)。這些都說明細(xì)胞因子在球蟲感染中有一定作用，是球蟲疫苗佐劑的研究目標(biāo)之一。

目前，雖然人們采用了多種方法來控制雞球蟲病，但是該病的危害仍然非常嚴(yán)重。自從生物技術(shù)用于球蟲研究以來，已鑒定和克隆了許多雞球蟲基因。到目前為止，用重組抗原免疫雞，只能誘發(fā)對(duì)球蟲病的部分保護(hù)，還不足以有效控制田間球蟲病。主要原因是產(chǎn)生這種部分保護(hù)性的重組抗原，只是某一種球蟲的某一階段抗原。而雞球蟲生活史復(fù)雜，基因組龐大，不同發(fā)育階段的免疫原性和抗原構(gòu)成都有差異，各階段都有保護(hù)性抗原，不同種類球蟲的免疫原性也不同。因此，還需深入研究球蟲入侵及免疫逃避機(jī)制，進(jìn)一步篩選保護(hù)性抗原，借助免疫學(xué)和分子生物學(xué)手段，盡可能多地將保護(hù)性抗原或者與免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合應(yīng)用制成多價(jià)疫苗，并選用合適的載體系統(tǒng)來遞呈抗原，設(shè)計(jì)同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的有效免疫應(yīng)答，努力解決抗原表達(dá)、免疫途徑、免疫佐劑等方面的問題，這是當(dāng)前乃至今后較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)球蟲疫苗研究的發(fā)展方向。

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(責(zé)任編輯:石瑞珍)