HPLC法測(cè)定黃連單煎液中小檗堿的含量

徐丹丹

哈爾濱商業(yè)大學(xué)09級(jí)制藥工程中外二班 150076

黃連為毛茛科的多年生草本植物，祖國(guó)中醫(yī)常將其干燥根莖入藥，性寒，味極苦，入心肝、腎、胃及大腸經(jīng)，有顯著清熱燥濕與瀉火解毒之功效，同時(shí)還具光譜抗生素、抗癌、抗放射以及促進(jìn)細(xì)胞代謝的作用。特別是在近些年，黃連的藥理及臨床研究又表現(xiàn)有不同的突破與進(jìn)展，其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)大［1］。然而在這些運(yùn)用中急需出臺(tái)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以供綜合評(píng)價(jià)其品質(zhì)提供參考，基于此，筆者選擇黃連單煎液作為本研究既定品種，并以其主要有效成分生物堿～小檗堿作為含量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)［2］，采用HPLC法進(jìn)行考察，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

儀器:島津LC～10A高效液相色譜儀，Sartorius分析天平，SPD－6AV紫外分光光度計(jì)，SB3200型超聲溶解儀。

試藥:小檗堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供，純度99.9%;黃連單煎液為筆者在實(shí)習(xí)單位自制;甲醇與乙腈均為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

方法與結(jié)果

色譜條件:色譜柱:Kromasil C18 柱(200mm ×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈～0.05%磷酸二氫鉀(35:65，以磷酸將PH調(diào)節(jié)到3.0);柱溫:30℃;流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):345nm(采用對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外分光光度檢測(cè)，于345nm處有最大吸收峰);理論塔板數(shù)按小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2800。對(duì)照品溶液制備:對(duì)照品溶液:精密稱定小檗堿對(duì)照品5mg，以甲醇充分溶解后定容至5ml并搖勻，取此液1ml置于5ml量瓶，再次定容至刻度搖勻即得對(duì)照品溶液，其濃度約為0.2mg/ml。供試品溶液:精密量取自制黃連單煎液30ml并置于帶塞的50ml錐形瓶中，加甲醇后超聲半小時(shí)，再以甲醇定容至刻度后搖勻即得供試品溶液。陰性對(duì)照溶液:剔除黃連后以原方按供試品溶液的制備方法制的陰性對(duì)照溶液。取以上3種溶液各10μl分別在上述色譜條件下進(jìn)樣后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，小檗堿峰能與陰性對(duì)照溶液的所有色譜峰分離良好，故可排除實(shí)驗(yàn)干擾，見(jiàn)圖1。

表3 黃連單煎液含量測(cè)定穩(wěn)定性試驗(yàn)

圖1 黃連單煎液干擾性實(shí)驗(yàn)色譜圖

線性實(shí)驗(yàn):精密量取對(duì)照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別于10ml量瓶中定容后各自取10μl進(jìn)樣，對(duì)濃度值(C)與峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果顯示小檗堿在20～100μg/ml的濃度范圍內(nèi)具良好線性關(guān)系，見(jiàn)表1。

表1 黃連單煎液含量測(cè)定線性試驗(yàn)

精密度試驗(yàn):精密量取對(duì)照品溶液3.0ml，置于10ml量瓶中定容后分別取10μl連續(xù)進(jìn)樣5次，均測(cè)量各自峰面積并計(jì)算平均值與RSD，結(jié)果顯示精密度試驗(yàn)結(jié)果良好，見(jiàn)表2。

表2 黃連單煎液含量測(cè)定精密度試驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn):試驗(yàn)進(jìn)樣液與量同精密度試驗(yàn)，但進(jìn)樣時(shí)間分別選取在制得溶液后的0h，2h，6h，12h，24h等5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)比較各時(shí)間點(diǎn)峰面積的變化情況及計(jì)算RSD，結(jié)果顯示在24h內(nèi)小檗堿含量是比較穩(wěn)定的，見(jiàn)表3。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一次自制的黃連單煎液5份，并按供試品溶液的制備方法制得進(jìn)樣液，對(duì)每份單煎液樣品進(jìn)行含量的測(cè)定并就算RSD值，結(jié)果顯示本方法具有良好的可重復(fù)性，見(jiàn)表4。

表4 黃連單煎液含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)

回收率試驗(yàn):在重復(fù)性試驗(yàn)基礎(chǔ)上，利用其溶液作為回收率試驗(yàn)試液，精密稱取一定質(zhì)量的小檗堿加入到在這些溶液當(dāng)中后再同上法進(jìn)樣，測(cè)定出含量后進(jìn)行回收率的計(jì)算，結(jié)果顯示平均回收率為99.75%，回收率試驗(yàn)表現(xiàn)良好，見(jiàn)表5。

表5 黃連單煎液含量測(cè)定回收率試驗(yàn)

結(jié) 論

綜上所述，黃連單煎液的主要成分為小檗堿生物堿，經(jīng)以上試驗(yàn)可知采用本方法測(cè)定其含量精密可靠，且重復(fù)性好，提示可在此類黃連單煎液中將HPLC法作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下的理想方法。

1 吳佳.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黃連中小檗堿的含量［J］.長(zhǎng)沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，17(2):132 ～134.

2 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.