中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究方法與思路

★ 蔡慧

（江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004）

經(jīng)過長期醫(yī)療實(shí)踐，為了更好地發(fā)揮中藥的作用和適應(yīng)比較復(fù)雜的病癥，把多味中藥按照一定規(guī)律配合起來用于治療，于是產(chǎn)生了復(fù)方。中藥復(fù)方充分體現(xiàn)了中醫(yī)辨證論治的經(jīng)驗(yàn)，它不但提高了臨床療效，又?jǐn)U大了單味藥的應(yīng)用范圍，是中藥用藥的主要形式和臨床防病治病的有效物質(zhì)。中藥復(fù)方是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，根據(jù)君、臣、佐、使的組方原則，由數(shù)種單味藥配伍構(gòu)成的統(tǒng)一整體。它的發(fā)展已有幾千年的歷史，但一直以來，醫(yī)藥界多以傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)判斷組成中藥復(fù)方的單味中藥，特別是君藥質(zhì)量的真、偽、優(yōu)、劣，缺乏系統(tǒng)、科學(xué)的分析方法。作者認(rèn)為中藥復(fù)方制劑原料質(zhì)量的可控性是完善中藥復(fù)方這個(gè)統(tǒng)一整體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的關(guān)鍵，是滿足中藥現(xiàn)代化要求，使中藥走向國際市場(chǎng)的前提。復(fù)方制劑的鑒別和藥效成分的含量測(cè)定作為單個(gè)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究最重要的兩項(xiàng)，亦為中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的重中之重。

1 中藥復(fù)方的鑒別

中藥復(fù)方是由兩種或兩種以上單味中藥組合的有機(jī)整體。不同于單個(gè)中藥，在對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行鑒別時(shí)，不僅要對(duì)組成該復(fù)方的所有中藥炮制品進(jìn)行鑒別，還要把已經(jīng)成型的中藥復(fù)方制劑作為一個(gè)整體來鑒別。既從宏觀上看，中藥復(fù)方的鑒別是對(duì)組成其各味中藥材的相加；從微觀上看，要把中藥復(fù)方制劑看成一個(gè)整體，并對(duì)該整體進(jìn)行鑒別。所以對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行鑒別時(shí)工作量加大，難度也相對(duì)提高。但是只有首先把好復(fù)方的鑒別這一關(guān)，中藥才能踏入國際市場(chǎng)。

1.1 標(biāo)準(zhǔn)化鑒別中藥復(fù)方制劑原料

中藥復(fù)方制劑原料-中藥材由于來源不穩(wěn)定，產(chǎn)地、加工炮制不規(guī)范，制劑工藝不先進(jìn)，質(zhì)量控制不嚴(yán)格，療效評(píng)估和作用機(jī)制不明確等，不能保證安全、有效、穩(wěn)定、可控，影響了中醫(yī)藥防病治病的效果和中醫(yī)藥走向世界。長期以來，人們通過對(duì)藥材的產(chǎn)地、栽培、采收、加工、炮制等一系列環(huán)節(jié)的監(jiān)控來規(guī)范中藥材質(zhì)量；重視道地藥材的生產(chǎn)，確保從源頭上控制好中藥材的品種、品系、產(chǎn)地、采收時(shí)間季節(jié)、加工和收藏方法等影響中藥復(fù)方制劑原料質(zhì)量的源頭因素[1]。只有控制好中藥復(fù)方制劑原料的質(zhì)量這一前提問題，才能控制好中藥復(fù)方的質(zhì)量，才能為后期的復(fù)方鑒別提供條件并且減低難度。對(duì)于中藥復(fù)方制劑原料的鑒別，要利用中藥復(fù)方中各單味藥材的形態(tài)、組織學(xué)特征及所含化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)特性、化學(xué)反應(yīng)、光譜特性、色譜特性及某些物理化學(xué)常數(shù)，通過性狀鑒別，顯微鑒別和理化鑒別的方法，來確定中藥復(fù)方制劑原料的的真?zhèn)渭按嬖谂c否的分析方法[2]。只有這樣才能使中藥復(fù)方制劑原料質(zhì)量研究標(biāo)準(zhǔn)化，才能使組成中藥復(fù)方的各味中藥材質(zhì)量可控，從而達(dá)到使整個(gè)中藥復(fù)方質(zhì)量可控，走向國際。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)化鑒別中藥復(fù)方整體

中藥復(fù)方作為一個(gè)有機(jī)的整體，在中醫(yī)辨證思想的指導(dǎo)下，具有確切的療效，是我國中醫(yī)的特色。在對(duì)復(fù)方制劑整體鑒別之前，控制中藥復(fù)方制劑原料質(zhì)量這一源頭問題，保證組成復(fù)方的各個(gè)中藥材質(zhì)量的穩(wěn)定，可控，是必不可少的，也是鑒別復(fù)方制劑整體的前提和基礎(chǔ)。把復(fù)方制劑作為一個(gè)整體研究的對(duì)象，從其性狀、劑型、物理常數(shù)、理化特征等來鑒別中藥復(fù)方，從盡頭控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量，從而保證中藥復(fù)方制劑質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠、使用安全。

2 中藥復(fù)方的含量測(cè)定

中藥復(fù)方的含量測(cè)定是研究復(fù)方中某種成分的含量高低是否符合規(guī)定來判定該復(fù)方的優(yōu)劣。為了確保臨床用藥的安全有效，用含量測(cè)定來控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量優(yōu)劣顯得越來越重要。但是中藥復(fù)方制劑的含量測(cè)定研究基礎(chǔ)比較薄弱，它與化學(xué)藥品的含量測(cè)定有很大的區(qū)別，化學(xué)成分明確，組成單一，而中藥復(fù)方組成復(fù)雜，不少學(xué)者認(rèn)為中藥復(fù)方是一個(gè)巨大的化學(xué)分子庫，中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不是某個(gè)單一化學(xué)成分的作用結(jié)果，檢測(cè)任何一種活性成分均不能反映它體現(xiàn)的整體療效。但是借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式，測(cè)定復(fù)方中藥效物質(zhì)的定量方法，對(duì)于中藥復(fù)方制劑的生產(chǎn)、研究、優(yōu)化生產(chǎn)工藝、控制中藥復(fù)方的質(zhì)量有著不可替代的作用。下面本文作者就中藥復(fù)方藥效物質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)遇到的困難和復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的方法進(jìn)行分析。

2.1 中藥復(fù)方藥效物質(zhì)的不明確性

根據(jù)單味中藥化學(xué)藥效成分的廣泛研究結(jié)果，依藥效成分的化學(xué)性質(zhì)，采用系統(tǒng)溶劑分離，提取復(fù)方中“藥效物質(zhì)”，研究其藥理藥效的協(xié)同作用[3]，大大提高了藥效物質(zhì)研究的目的性和作用靶點(diǎn)的針對(duì)性，這對(duì)于深入分析復(fù)方中藥物作用生物學(xué)環(huán)節(jié)的配伍關(guān)系，提供了較好的手段[4]。但是中藥復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，它并不是復(fù)方中各個(gè)中藥成分的簡單相加，因此中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)也不是各味中藥的藥效物質(zhì)的簡單混合。中藥復(fù)方諸多中藥在煎煮時(shí)，發(fā)生的物理或化學(xué)反應(yīng)，如如生脈散全方的化學(xué)成分在煎煮后，產(chǎn)生了新成分5-羥甲基-2-糠醛（5-HMF）[5]，進(jìn)一步分析配伍作用發(fā)現(xiàn)，它是麥冬與五味子共煎過程中生成的，并與量的配伍有關(guān)[6]；且生脈散全方及人參與麥冬、麥冬與五味子配伍中人參皂甙的含量也發(fā)生了變化[7]。這對(duì)于確定中藥復(fù)方的作用物質(zhì)基礎(chǔ)帶來很大的困難。并且單純分析某個(gè)藥效物質(zhì)的含量，可能會(huì)帶來片面性。

目前中藥復(fù)方藥效物質(zhì)的研究方法也有很多，比如復(fù)方拆方研究，化學(xué)成分與現(xiàn)代藥理學(xué)結(jié)合研究，中藥血清藥理學(xué)研究等。但是由于復(fù)方作用的多機(jī)制和多靶點(diǎn)性，中藥復(fù)方藥效物質(zhì)研究并未取得突破性進(jìn)展。因此利用現(xiàn)代科學(xué)方法和先進(jìn)的技術(shù)手段闡明中藥復(fù)方治療作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)于中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究具有特別重要的作用，同時(shí)對(duì)于保證中藥復(fù)方質(zhì)量穩(wěn)定，使中藥國際化具有深遠(yuǎn)的意義。

2.2 中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的方法

近年來，國家對(duì)中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究和制定給予了極大的重視，對(duì)某些可行的方法進(jìn)行了全面的研究，提出了更加全面的中藥復(fù)方質(zhì)量研究和控制方法。

2.2.1 指紋圖譜在中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和控制中的運(yùn)用。（1）中藥復(fù)方指紋圖譜的含義：中藥指紋圖譜是指某種（或某產(chǎn)地）中藥材或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，提取其化學(xué)信息并加以描述，得到的能夠標(biāo)志該中藥材或中成藥特性的共有峰的圖譜。根據(jù)中藥指紋圖譜的含義，中藥復(fù)方指紋圖譜可以定義為：運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)中藥復(fù)方多維化學(xué)及其相關(guān)生物信息以圖形（圖像）的方式進(jìn)行表征并加以描述?，F(xiàn)代分析技術(shù)包括光譜、波譜、色譜、核磁共振等以及各種技術(shù)的聯(lián)用。總之，復(fù)方指紋圖譜反映的不僅是所含藥物本身的信息，也反映了復(fù)方整體是一個(gè)多樣化的天然組合化學(xué)庫[9]。（2）中藥復(fù)方指紋圖譜的研究進(jìn)展：不同于單味中藥，中藥復(fù)方的化學(xué)成分尤為的復(fù)雜多樣，這些多樣的化學(xué)成分也往往是重要復(fù)方發(fā)揮其藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。但是方中任何一種活性成分的作用都不能全面的反映整個(gè)復(fù)方的治病原理，這是中藥復(fù)方與化學(xué)藥在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過程中的根本區(qū)別。因此，從整體上綜合分析中藥復(fù)方是現(xiàn)如今研究復(fù)方的必然趨勢(shì)。中藥復(fù)方指紋圖譜就是這樣一種趨勢(shì)。中藥復(fù)方指紋圖譜的研究尚無統(tǒng)一的定論，由于房中化學(xué)成分復(fù)雜，難于用一張圖譜將復(fù)方中的特征峰集于一張圖譜中表示出來，給中藥復(fù)方指紋圖譜的研究帶來一定的難度。盡管如此，只要分別建立中藥復(fù)方中各位中藥材有效成分的指紋圖譜，組成一個(gè)多元的指紋圖譜，即形成每個(gè)中藥復(fù)方都有一個(gè)多元指紋圖譜與之相對(duì)應(yīng)，這樣就可以對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行科學(xué)的評(píng)價(jià)。如范驍輝等利用高效液相色譜法建立復(fù)方丹參滴丸中丹參酚酸類成分和三七皂苷類成分的HPLC指紋圖譜，組成復(fù)方丹參滴丸多元HPLC指紋圖譜，建立了復(fù)方丹參滴丸產(chǎn)品批次間質(zhì)量穩(wěn)定性評(píng)價(jià)方法[10]。并且隨著現(xiàn)代儀器分析科學(xué)的飛速發(fā)展，為中藥復(fù)方指紋圖譜提供了先進(jìn)的方法學(xué)和大量精密的儀器。例如：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用（CE-MS）、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS／MS）、高 效 液 相 -核 磁 共 振 儀 聯(lián) 用（HPLC-NMR）、毛細(xì)管電泳-核磁共振儀聯(lián)用（CE-NMR）、液相色譜-核磁-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-NMR-MS）等。魏剛等[11-12]采用GC-MS對(duì)加味蒼耳子散、清上去痛膠囊及醒神滴鼻液、醒腦滴鼻液等復(fù)方制劑先后進(jìn)行了鑒別研究，得出GC-MS可應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑的鑒別研究，指紋圖譜中特征成分的相對(duì)含量保持穩(wěn)定更能有效控制復(fù)方制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，但若在制劑工藝時(shí)未對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行收集或揮發(fā)油損失過多，則成品中僅能檢出脂肪酸類揮發(fā)性成分，進(jìn)一步說明了中藥復(fù)方指紋圖譜在控制質(zhì)量過程中的客觀性。當(dāng)前中藥指紋圖譜還在研究中，結(jié)合現(xiàn)代先進(jìn)的分析儀器，指紋圖譜在中藥復(fù)方質(zhì)量的控制中前景廣闊。

2.2.2 血清藥效物質(zhì)基礎(chǔ)在中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和控制中的運(yùn)用。（1）血清藥化學(xué)的含義：血清藥化學(xué)概念最早是由如本學(xué)者田代真一提出的。簡而言之，即是以口服中藥后的血清為材料，提取分離中藥有效成分的一種研究方法。它的原意是指將服用中藥方后的血清為研究對(duì)象，提取分離中藥的有效成分，實(shí)則為中藥的體內(nèi)血清中的有效成分。中藥復(fù)方的化學(xué)成分復(fù)雜，傳統(tǒng)的口服給藥決定了只有那些被吸收進(jìn)入體內(nèi)（血液循環(huán)）的化學(xué)成分才有可能成為藥效的真正物質(zhì)基礎(chǔ)。而中藥經(jīng)口服后，多數(shù)成分不能被機(jī)體吸收，真正起作用的是吸收入血的物質(zhì)，即血清中的“移行成分”。這種含有真正有效成分（包括機(jī)體產(chǎn)生的應(yīng)激性成分）血液中分取血清，進(jìn)行藥理和藥物化學(xué)研究的方法，建立了新的復(fù)方質(zhì)量控制研究系統(tǒng)，必然推向中藥復(fù)方研究的飛躍。（2）血清藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究：中藥血清藥理學(xué)是一種很有發(fā)展前景研究復(fù)方的新思路，但由于起步較晚，目前仍處于探索階段，還存在一些問題：血清本身內(nèi)源性成分的復(fù)雜性，給中藥血清藥理學(xué)和血清藥化學(xué)帶來了極大困難；中藥復(fù)方經(jīng)口服后，血清藥物濃度較低，特別是中藥復(fù)方中微量成分及蛋白結(jié)合率較高的成分，給藥物檢測(cè)和藥理實(shí)驗(yàn)提出了難題。因此，開展中藥血清藥理學(xué)研究有待于進(jìn)一步發(fā)展和完善。中藥血清藥物化學(xué)研究認(rèn)為，只有人血的成分才有可能是有效成分（外用藥及直接刺激胃腸道藥物除外）?；谏鲜鲇^點(diǎn)，目前，用植物化學(xué)、中藥血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)相結(jié)合的方法以及生物藥物分析的方法，利用HPLC-UV（DAD）及HPLC-MS-MS技術(shù)，從給藥血清中鑒定復(fù)方成分及其代謝物，研究這些化合物是否具有藥理活性，并取得了令人矚目的進(jìn)展。如賴先榮等[13]通過血清藥物化學(xué)研究三黃方及其單味藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，采用體外抗內(nèi)毒素活性實(shí)驗(yàn)和3T3-L1前脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型試驗(yàn)，以及HPLC血清指紋圖譜等血清藥物化學(xué)研究方法，得出大黃中的大黃素、大黃酚等5種成分，黃芩中的黃芩苷和黃連中的小檗堿等可能是三黃方抗內(nèi)毒素的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；非洲防己堿、表小檗堿和小檗堿可能是黃連炮制品改善抵抗活性的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。王平等[14]采用HPLC-DAD-UV及HPLC-MS／MS的方法研究了當(dāng)歸補(bǔ)血湯的人血成分從口服給藥后的大鼠血清中找到46個(gè)人血成分，鑒定了其中10個(gè)原型成分，并鑒定出21個(gè)可能代謝組分。上述研究為相應(yīng)中藥復(fù)方的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了檢測(cè)指標(biāo)。

2.2.3 現(xiàn)代信息技術(shù)在中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和控制中的運(yùn)用。隨著信息科技的飛速發(fā)展，中藥復(fù)方的研究已開始廣泛的融入現(xiàn)代信息技術(shù)?，F(xiàn)代信息技術(shù)的介入已經(jīng)給中藥復(fù)方的研究注入新的活力，并為之開辟新的道路。目前已有許多醫(yī)藥工作者將信息技術(shù)直接用于中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究和控制中來。其中應(yīng)用于中藥復(fù)方研究的數(shù)據(jù)庫、數(shù)據(jù)挖掘、化學(xué)計(jì)量學(xué)、虛擬篩選和生物信息等幾種信息技術(shù)較為廣泛。信息技術(shù)是建立在中藥傳統(tǒng)理論和組方治病原則相結(jié)合的基礎(chǔ)上，避免中藥研究西化，揭示中藥復(fù)方真正治病的精髓。可以預(yù)見，信息技術(shù)研究中藥復(fù)方勢(shì)必推進(jìn)中藥的國際化。

3 對(duì)中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究展望

中藥作為我們傳統(tǒng)的醫(yī)藥資源，是中華名族的瑰寶，經(jīng)過幾千年的實(shí)踐應(yīng)用，由中藥配伍形成的復(fù)方已成為我們防病治病的重要手段。然而中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究是一項(xiàng)龐大的工程，涉及多學(xué)科的交叉。從2002年非典SARS病毒到近年來的禽流感病毒，中藥復(fù)方在預(yù)防和治療一些西醫(yī)無法解決的疾病中，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用?？梢灶A(yù)見，中藥復(fù)方將一直伴隨著時(shí)代的腳步保護(hù)著人類不斷向前走去。所以，在現(xiàn)代高科技年代，作為獻(xiàn)身醫(yī)藥事業(yè)的我們要不斷深化中藥復(fù)方研究，深化中藥復(fù)方藥效物質(zhì)和作用原理研究，深化中藥復(fù)方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，保證中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量、療效，使得中醫(yī)藥邁出國門，造福整個(gè)世界。

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