不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對黃皮洋蔥試管苗生長的影響

閆芳 ，張春梅

（1.河西學院生態(tài)與綠洲農業(yè)研究院，甘肅張掖，734000；2.河西學院農業(yè)與生物技術學院）

洋蔥學名Allium cepaL.，別名蔥頭、圓蔥、胡蔥、玉蔥，是百合科蔥屬草本植物，具有極高的營養(yǎng)價值和藥用價值，它不僅能夠改善食物風味，而且具有殺菌、抗腫瘤、降血壓、抗血栓及動脈硬化等生理功能，耐寒，喜溫，適應性強，產量高，易栽培，耐貯運且供應期長，對調節(jié)淡季蔬菜供應具有重要作用[1]。莖尖培養(yǎng)是進行洋蔥脫毒、生產無毒種苗、恢復優(yōu)良種性的有效手段[2，3]。姜璐琰等[4]研究了洋蔥胚狀體的誘導及再生系統(tǒng)的建立。徐啟江等[5]對分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術進行了研究。但對洋蔥鱗莖快繁環(huán)節(jié)中培養(yǎng)基形態(tài)和用量的研究鮮有報道，特進行了此次試驗，以期獲得洋蔥鱗莖的最佳培養(yǎng)體系。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為黃皮洋蔥鱗莖，購自甘肅省張掖市甘州區(qū)某蔬菜超市；50 mL三角瓶。

1.2 試驗處理

設3組試驗，每組試驗設4個處理。第一組MS固體培養(yǎng)基不同用量試驗，處理A1為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)基10 mL，處理B1為15 mL，處理C1為20 mL，處理D1為25 mL。第二組MS液體培養(yǎng)基不同用量試驗，處理A2為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)液10 mL，處理 B2為 15 mL，處理 C2為 20 mL，處理 D2為25 mL。第三組White固體培養(yǎng)基不同用量試驗，處理A3為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)基10 mL，處理B3為 15 mL，處理 C3為 20 mL，處理 D3為 25 mL。

1.3 試驗方法

調整培養(yǎng)基pH值至5.8，消毒滅菌后于無菌條件下用莖盤切割方式切取0.3～0.5 mm洋蔥鱗莖為外植體，接種到MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基（固體或液體）和White+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基（固體）上，鱗莖每一處理接種10瓶，每瓶接種6個切段，然后放置在相同條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)10、20、30 d時分別隨機抽取每處理5瓶30株調查，觀察植株生長發(fā)育動態(tài)，記載葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)、小苗長勢、葉片狀態(tài)、小苗狀態(tài)等。

①無菌材料的獲得、接種 剝去洋蔥蔥皮，用自來水沖洗10 min左右，采用莖盤切割的方式切取外層鱗莖上半部0.3～0.5 mm為外植體，將外植體放入75%酒精消毒滅菌30 s，再放入0.1%HgCl2消毒滅菌10 min，用無菌水認真沖洗4次。在超凈工作臺接種到培養(yǎng)基上，進行無菌培養(yǎng)。

②培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強度2 000～3 000 lx，光照培養(yǎng) 16 h，暗培養(yǎng) 8 h。

2 結果與分析

2.1 MS固體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

由圖1可知，MS固體培養(yǎng)基不同用量對洋蔥試管苗的生長影響比較明顯，鱗莖在MS固體培養(yǎng)基上前期生長無差異，葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都基本一致；后期試管苗差異很大，從10～20 mL范圍內試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都隨培養(yǎng)基用量的增加而增加，20 mL時達到最大值，20 mL以后試管苗生長無明顯變化。表明MS固體培養(yǎng)基用量過多會超過洋蔥試管苗生長所需的營養(yǎng)而造成浪費。由此可見，50 mL三角瓶放入20 mL是MS固體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.2 MS液體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

由圖2可知，隨著培養(yǎng)液用量的增加，洋蔥試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、發(fā)根數(shù)、株高先增大后逐漸減小，至15 mL時洋蔥試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、發(fā)根數(shù)、株高達到最大值；20 mL以上時洋蔥試管苗的各項指標逐漸減小。表明液體培養(yǎng)基用量過多會使接種的切段浸沒于其中，因缺氧而不易發(fā)芽，導致試管苗生長勢弱。因此，50 mL三角瓶放入15 mL是MS液體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.3 White固體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

由圖3可知，鱗莖在White固體培養(yǎng)基上生長差異較小，隨著培養(yǎng)基用量的增加，葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都隨著培養(yǎng)基用量的增加而增加，25 mL時達到最大值。White固體培養(yǎng)基為低濃度鹽培養(yǎng)基，其營養(yǎng)元素與前兩組基本相同，pH值和培養(yǎng)條件也相同，至25 mL時洋蔥試管苗的各項指標達最大值，這與營養(yǎng)元素的濃度有關，因此，50 mL三角瓶放入 25 mL是White固體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.4 不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對洋蔥試管苗生長的影響

由圖4可知，B2處理 （MS液體培養(yǎng)基）明顯優(yōu)于C1處理（MS固體培養(yǎng)基）和D3處理（White固體培養(yǎng)基），其表現(xiàn)在葉片數(shù)多、植株高、發(fā)根數(shù)多、莖粗壯、長勢強、苗壯、發(fā)芽生長快。同時處理B2培養(yǎng)成苗（達到4～6片有效葉的植株稱為成苗株）時間要比處理C1和處理D3提早5 d左右。因此50 mL三角瓶放入15 mL MS液體培養(yǎng)液是洋蔥鱗莖快繁的最佳用量及方式。

3 小結與討論

圖1 MS固體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

圖2 MS液體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

Phillips等[6]在 BDS+毒莠定 0.75 mg/L+BA 2 mg/L固體培養(yǎng)基上誘導出愈傷組織和體細胞胚。Fridborg[7]在 MS+NAA 1 mg/L+KT 1.5 mg/L固體培養(yǎng)基上把洋蔥鱗片直接誘導成芽，此試驗與本試驗的MS固體培養(yǎng)基相同，均能獲得小植株；不同之處是培養(yǎng)基激素種類及其配比和外植體不同，表現(xiàn)為對洋蔥試管苗生長的影響效果不同。徐啟江等[5]對分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術進行研究，以洋蔥鱗莖莖尖為外植體，以25 mL MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L固體培養(yǎng)基為起始培養(yǎng)基，培養(yǎng)40 d后獲得試管苗，再誘導獲得微鱗莖，此試驗與本試驗的不同之處在于培養(yǎng)基的形態(tài)和外植體的選取，本試驗選用洋蔥外層鱗莖上半部，可能由于不同形態(tài)培養(yǎng)基對洋蔥試管苗的生長影響不同。本試驗得出液體培養(yǎng)基有利于洋蔥試管苗的生長。

綜上所述，在洋蔥鱗莖快繁階段，MS液體培養(yǎng)基優(yōu)于MS固體培養(yǎng)基，其用量以50 mL三角瓶中放15 mL培養(yǎng)液最佳。但洋蔥鱗莖快繁過程中易產生遺傳性變異，特別是染色體倍性的變化有待進一步研究。

圖3 White固體培養(yǎng)基不同用量對試管苗生長的影響

圖4 不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對洋蔥試管苗生長的影響

[1]郭玉華，李鈺金，殷詩強.洋蔥食品的研究進展[J].中國調味品，2009，34（11）：35-37.

[2]徐啟江，陳典，張云修.分蘗洋蔥莖尖培養(yǎng)脫毒苗技術研究[J].北農林科技大學學報：自然科學版，2002（2）：6-11.

[3]陳典，徐啟江.分蘗洋蔥莖尖愈傷組織誘導及植株再生[J].園藝學報，2001，28（4）：359-360.

[4]姜璐琰，楊建平，張松，等.洋蔥組織培養(yǎng)研究進展[J].山東農業(yè)大學學報：自然科學版，2003，34（2）：299-302.

[5]徐啟江，楊守志，池春玉，等.分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術研究[J].植物學學報，2003，20（1）：80-84.

[6]Phillips G C,Luyten J.Effectsof picloram and other auxious ononion tissue cultures[J].J Amer Soc Hort Sci,1987,108(6):948-950.

[7]Fridborg G.Growth and organogenesis in tissue cultures ofAllium cepavar.proliferum[J].Physiologia Plantarum,1971,25(3):436-440.