DC－CIK細(xì)胞用于治療急性髓系白血病MRD的研究

西安市中心醫(yī)院血液病研究所（西安710003） 王 漪 張 曦 李罡燦 宋艷萍 郭 亮

白血病微小殘留病（Minimal residual disease，MRD）的克隆性增殖［1，2］是AL復(fù)發(fā)的根源，MRD的監(jiān)測(cè)與治療直接關(guān)系到AL的預(yù)后，最大限度地殺滅MRD是白血病患者長(zhǎng)期無病生存的關(guān)鍵，但清除MRD是AL治療的難點(diǎn)。強(qiáng)化治療與異基因造血干細(xì)胞移植均因其相關(guān)缺陷限制了臨床應(yīng)用。過繼免疫細(xì)胞治療（Adoptive cellular immunotherapy），尤其是樹突狀細(xì)胞（DC）與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）共培養(yǎng)細(xì)胞（DC－CIK）過繼療法以其強(qiáng)大的抗腫瘤效應(yīng)越來越受到人們的關(guān)注。我們回顧用FCM監(jiān)測(cè)MRD持續(xù)陽性的11例急性髓系白血病患者化療聯(lián)合自體共培養(yǎng)DC－CIK過繼免疫細(xì)胞治療的情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 研究對(duì)象 本組11例急性髓細(xì)胞白血病患者均為我院2007年1月至2010年12月收治的初診患者，依據(jù)《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》明確診斷［3］，其中M23例，M33例，M44例，M51例，男性7例，女性4例，中位年齡48歲（17～62歲）。以上患者明確診斷后進(jìn)行常規(guī)化療1～2個(gè)療程達(dá)到血液學(xué)完全緩解后再鞏固或強(qiáng)化2～3個(gè)療程，多次FCM檢測(cè)MRD持續(xù)陽性。11例患者共接受25例次DC－CIK細(xì)胞過繼免疫治療，其中過繼免疫治療與鞏固、強(qiáng)化治療方案交替。MRD陽性定義：正常表達(dá)抗原強(qiáng)度改變（包括增強(qiáng)或者減弱）和（或）丟失、異常表達(dá)其他系別的標(biāo)志、早期和晚期抗原同時(shí)表達(dá)、幼稚細(xì)胞比例明顯增多且均質(zhì)性表達(dá)，以這些殘存的細(xì)胞占骨髓單個(gè)核細(xì)胞總數(shù)的比例作為MRD的數(shù)值，其比例﹥0．1%定義為MRD陽性。

2 DC－CIK細(xì)胞的制備及回輸 在患者化療后骨髓造血功能完全恢復(fù)階段采血。培養(yǎng)擴(kuò)增［4］后的DC－CIK細(xì)胞經(jīng)質(zhì)檢合格后分2次（間隔24h）靜脈回輸給患者。間隔3個(gè)月后可酌情行下一個(gè)療程過繼免疫治療［5，6］。

3 不良反應(yīng)觀察 所有患者DC－CIK細(xì)胞治療中及治療后監(jiān)測(cè)生命體征變化，觀察患者有無發(fā)熱、寒戰(zhàn)、皮疹、惡心、嘔吐、喘憋、休克等情況，并于治療中及治療后進(jìn)行血常規(guī)、肝腎功電解質(zhì)血糖、心電圖等檢查。回輸后3個(gè)月及隨訪、治療中監(jiān)測(cè)感染性疾病、自身免疫疾病及第二腫瘤等的發(fā)生情況。

4 療效觀察 采集患者細(xì)胞治療前、治療后3個(gè)月及每次隨訪、治療時(shí)的骨髓標(biāo)本行多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病細(xì)胞異常免疫表型，即MRD檢測(cè)。

結(jié) 果

1 DC－CIK細(xì)胞治療的安全性 11例患者應(yīng)用DC－CIK細(xì)胞治療1～3療程，共輸注25次，培養(yǎng)及回輸過程均較順利，無1例培養(yǎng)后檢出病原菌。輸注過程順利，患者均無明顯不適。3例次在輸注后24h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)熱，最高體溫均低于38℃，給予物理降溫后體溫恢復(fù)正常。2例次出現(xiàn)輸注后乏力、肌肉酸痛等不適，24h內(nèi)自行消退。無1例出現(xiàn)寒戰(zhàn)、過敏，患者的血常規(guī)、肝腎功電解質(zhì)血糖及心電圖在治療前后無明顯變化。所有患者均未出現(xiàn)嚴(yán)重感染性疾病、第二腫瘤及自身免疫性疾病等。

2 DC－CIK細(xì)胞治療情況及MRD檢測(cè) 中位隨訪31個(gè)月，經(jīng)FCM檢測(cè)，11例患者中7例（63．6%）MRD轉(zhuǎn)陰，處于持續(xù)完全緩解（Continuous complete remission，CCR）狀態(tài)（圖1，2）。1例患者（M2）經(jīng)DCCIK細(xì)胞過繼免疫治療后曾一度MRD轉(zhuǎn)陰，持續(xù)約8個(gè)月后復(fù)發(fā)；3例患者（2例 M4、1例 M5）分別經(jīng)3療程（M4）、2療程（M4）、2療程（M5）DC－CIK細(xì)胞過繼免疫治療MRD仍持續(xù)陽性，并于初次診斷后11個(gè)月（M4）、17個(gè)月（M4）、9個(gè)月（M5）復(fù)發(fā)。

圖1 M2患者細(xì)胞血液學(xué)完全緩解，MRD陽性

圖2 同一M2患者血液學(xué)完全緩解，MRD陰性

討 論

MRD細(xì)胞負(fù)荷越大，白血病復(fù)發(fā)的可能性越高。MRD的敏感特異性檢測(cè)一直備受關(guān)注。由于臨床上出現(xiàn)基因和染色體異常者不到50%，而FCM適用范圍廣，幾乎可用于所有急性白血病患者的MRD檢測(cè)。已有許多體內(nèi)外研究證實(shí)了DC－CIK的過繼免疫對(duì)白血病細(xì)胞的清除作用［7］為其臨床治療白血病MRD提供了理論基礎(chǔ)。

過繼免疫治療應(yīng)在較大程度減少白血病負(fù)荷的基礎(chǔ)上進(jìn)行，以免造成浪費(fèi)［5］，本研究中，所有患者經(jīng)正規(guī)化療后血液學(xué)達(dá)到完全緩解。在骨髓恢復(fù)期采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞后體外共培養(yǎng)了DC－CIK細(xì)胞，培養(yǎng)前后細(xì)胞計(jì)數(shù)增殖約7倍，3次病原菌檢測(cè)均未陰性，提示細(xì)胞培養(yǎng)過程中的質(zhì)量控制良好。并對(duì)培養(yǎng)后的CIK細(xì)胞做了淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)，結(jié)果顯示符合CIK效應(yīng)細(xì)胞的免疫表型。11例MRD持續(xù)陽性的急性髓系白血病骨髓完全緩解患者，進(jìn)行了25個(gè)療程的DC－CIK細(xì)胞過繼免疫治療，回輸后僅有3例低熱，2例乏力、肌肉酸痛，給予對(duì)癥處理后癥狀迅速消退，余無明顯不適，提示不良反應(yīng)輕微，且對(duì)血常規(guī)、肝腎功電解質(zhì)血糖及心電圖等檢查影響不大，安全性好，隨訪過程中未見明顯并發(fā)癥發(fā)生。中位隨訪31個(gè)月，經(jīng)FCM檢測(cè)，11例患者中7例（63．6%）MRD轉(zhuǎn)陰，處于持續(xù)完全緩解（CCR）狀態(tài)，未見復(fù)發(fā)，初步顯示了免疫治療在清除MRD中的作用，療效滿意。比童春容［8?研究的AML患者M(jìn)RD陽性僅化療維持的CCR率要高，但有可能與我們研究的患者中有3例M3，且隨訪時(shí)間較短有關(guān)。大量臨床研究表明化療聯(lián)合細(xì)胞治療是安全的，無嚴(yán)重不良反應(yīng)，可提高白血病患者CCR率，延長(zhǎng)患者 OS（Overall survival，OS），改善患者生存質(zhì)量。但有研究［9］顯示DC－CIK治療療效與療程有關(guān)。

MRD不僅可以作為判斷預(yù)后的重要指標(biāo)還可指導(dǎo)臨床治療。在化療藥物最大限度地降低瘤負(fù)荷后，用DC－CIK過繼免疫治療MRD，兩者配合可望達(dá)到根除白血病細(xì)胞、減少復(fù)發(fā)的目的。

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