SLE患者外周血單個核細胞中信號轉導子及轉錄激活因子4 mRNA的表達及其與血清IFN-γ水平之間的相關性

胡秋俠，李博，鐘貴芳，何偉珍，孔衛(wèi)紅，黃進賢

（1.深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院門診，廣東深圳518040；2.深圳市第四人民醫(yī)院香蜜湖風濕病分院風濕科，廣東深圳518040；3.深圳市第四人民醫(yī)院急診科，廣東深圳518040)

SLE患者外周血單個核細胞中信號轉導子及轉錄激活因子4 mRNA的表達及其與血清IFN-γ水平之間的相關性

胡秋俠1，李博2，鐘貴芳3，何偉珍2，孔衛(wèi)紅2，黃進賢2

（1.深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院門診，廣東深圳518040；2.深圳市第四人民醫(yī)院香蜜湖風濕病分院風濕科，廣東深圳518040；3.深圳市第四人民醫(yī)院急診科，廣東深圳518040)

目的探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）外周血單個核細胞(PBMC)中信號轉導子及轉錄激活因子4 (STAT4)mRNA表達及其與血清干擾素(IFN-γ)水平之間的相關性。方法用TaqMan實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測60例SLE患者及30例正常對照者PBMC中STAT4 mRNA表達水平，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測SLE患者血清中IFN-γ的水平，并分析兩者之間的相關性。結果PBMC中STAT4 mRNA表達水平在SLE患者組中要顯著高于正常對照組(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活動組中顯著高于病情非活動組(P＜0.05)。SLE患者血清中IFN-γ水平檢測結果為(12.71±5.68)ng/ml，并與患者PBMC中STAT4 mRNA表達呈正相關(r=0.769，P＜0.05)。結論SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表達水平高于正常，并與病情活動性及患者血清中IFN-γ水平相關。

信號轉導和轉錄激活因子4；mRNA表達；γ干擾素

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是最常見的自身免疫性疾病之一，臨床表現(xiàn)十分復雜。SLE患者最顯著的特征之一是血清中存在以抗核抗體(ANA)為代表的多種自身抗體。許多研究結果顯示信號轉導和轉錄激活因子4(STAT4)的基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)在多個種族SLE患者中均為SLE的易感基因，可能與SLE的發(fā)病相關[1-6]。但有關STAT4 mRNA表達及其臨床意義的研究國內外報道尚不多見。本研究旨在探討廣東省SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表達及其與血清IFN-γ水平之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料所有入選的60例(女50例，男10例)SLE患者均來自本院風濕科2006年9月至2012年5月間的門診及住院患者，所有患者均符合美國風濕病學會(ACR)1997年修訂的SLE分類標準。入選患者的年齡最小為18歲，最大為67歲，中位數(shù)為40歲。所有同時合并有類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、多發(fā)性肌炎及其他彌漫性結締組織病的患者均被排除。所有同時合并有結節(jié)病、移植物抗宿主病、獲得性免疫缺陷綜合征及淋巴瘤的患者亦被排除。入選的30例正常對照者為在本院體檢的正常人，其中女性25例，男性5例，年齡最小為19歲，最大為63歲，中位數(shù)為39歲，性別組成與年齡分布與SLE患者組相比差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 方法

1.2.1 STAT4 mRNA表達水平的檢測采集以上研究對象EDTA抗凝靜脈血12 ml，用Ficoll密度梯度離心法分離PBMC細胞。總RNA的抽提采用Trizol試劑，操作完全按照其說明。STAT4 mRNA表達水平的檢測采用TaqMan實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應試劑盒(美國ABI公司)。引物及TaqMan探針的序列分別如下：正向引物序列為5'-CTACACA TACGCCACCCTGACC-3'，反應體系完全按照試劑盒說明。反應條件如下：60℃逆轉錄30 min，接著95℃10 min以激活Taq酶，然后95℃20 s、55℃30 s、72℃1 min進行35個循環(huán)。

1.2.2 IFN-γ的檢測所有受試者均晨起空腹采集靜脈血3 ml，離心10 min，分離出血清分裝于EP管，置于-20℃冰箱保存待測。IFN-γ的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，試劑盒購自美國R&D公司，檢測時嚴格按試劑盒說明書操作。

1.2.3 SLE臨床資料的收集記錄入選SLE患者的臨床及輔助檢查資料?；颊叩膶嶒炇覚z查主要包括全血細胞計數(shù)、尿常規(guī)、腎功能、肝功能、紅細胞沉降率(ESR)、ANA(間接免疫熒光法)抗心磷脂抗體(aCL)、抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)、抗ds-DNA抗體及抗ENA抗體等。其中aCL、ANCA、抗anti-dsDNA抗體及抗ENA抗體的檢測使用ELISA法。類風濕因子(RF)、血清補體(C3、C4)及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)的檢測使用免疫比濁法，SLE患者的病情活動性采用SLEDAI進行評分，SLEDAI評分＞9定義為病情活動。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。兩組間計量資料的比較采用獨立t檢驗，組間率的比較采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman's相關分析法，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 SLE患者與正常對照者PBMC中STAT4 mRNA表達水平的比較SLE患者與正常對照者PBMC中STAT4 mRNA表達水平的檢測結果詳見表1。統(tǒng)計分析后顯示PBMC中STAT4 mRNA表達水平在SLE患者組中要顯著高于正常對照組(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活動組中顯著高于病情非活動組(P＜0.05)。

表1 SLE患者與正常對照者PBMC中STAT4 mRNA的表達水平

表1 SLE患者與正常對照者PBMC中STAT4 mRNA的表達水平

注：aSLE患者組與正常對照者組比較，b病情活動組與病情非活動組比較。

組別SLE患者病情活動組病情非活動組正常對照者例數(shù)60 32 28 30 mRNA表達水平3.475±0.526 4.918±0.932 3.132±0.263 1.613±0.276 t值1.782 1.817 P值0.000a0.001b

2.2 SLE患者PBMC中STAT4 mRNA表達與患者血清IFN-γ水平之間的相關性SLE患者血清中IFN-γ水平檢測結果為(12.71±5.68)ng/ml，相關分析后發(fā)現(xiàn)SLE患者血清IFN-γ水平與患者PBMC中STAT4 mRNA表達呈正相關(r=0.769，P＜0.05)。

3 討論

STAT4屬于STAT轉錄因子家族中的一員，主要表達在細胞的胞漿，可以調節(jié)基因的轉錄與表達。STAT4基因位于人染色體2q32.2-2q32.3，以前的研究結果提示該區(qū)域的臨近區(qū)域2q33與SLE發(fā)病連鎖[7]。Remmers等[1]報道發(fā)現(xiàn)STAT4基因rs7574865位點的SNP與北美類風濕關節(jié)炎及SLE患者的發(fā)病相關。Kobayashi等[2]在日本患者中、Palomino-Morales等[3]在哥倫比亞患者中及Yang等[4]在中國香港SLE患者中分別對以上研究結果進行了證實。Namjou等[5]后來在不同種族SLE患者中研究發(fā)現(xiàn)包括rs7574865位點在內的多個STAT4基因位點的SNP與SLE發(fā)病相關。Hellquist等[6]在芬蘭患者中還報道發(fā)現(xiàn)STAT4基因rs7582694位點及rs10181656的SNP和正常人相比存在異常。還有兩個不同的研究顯示特定的STAT4基因型與SLE的某些臨床表現(xiàn)相關，例如抗ds-DNA抗體、抗心磷脂抗體的產(chǎn)生、缺血性股骨頭壞死及其他一些較嚴重的臨床表現(xiàn)[8-9]。柏素云等[10]報道發(fā)現(xiàn)STAT4基因rs7574865位點的SNP與山東漢族SLE特定的臨床表現(xiàn)相關，以上研究結果已經(jīng)提示STAT4基因可能是SLE的易感基因，與SLE的發(fā)病相關。

已有的有關STAT4與SLE的研究大多集中在STAT4基因多態(tài)性與表達在SLE中存在異常，有關STST4引起SLE發(fā)病的可能具體機制尚未見有研究報道。既往的動物試驗研究發(fā)現(xiàn)STAT4基因敲除小鼠缺乏許多IL-12誘導的免疫反應，包括IFN-γ的產(chǎn)生及Th1細胞的分化，致使形成Th2優(yōu)勢[11]。另外，眾所周知，Th1/Th2失衡是SLE的一個顯著特征，這種失衡是否與患者體內STAT4的表達存在關系，目前亦不明確。本研究在國內外率先進行了這方面的研究，對中國大陸SLE患者PBMC中STAT4 mRNA表達及患者血清中IFN-γ水平進行了檢測，結果發(fā)現(xiàn)PBMC中STAT4 mRNA表達水平在SLE患者組中要顯著高于正常對照組(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活動組中顯著高于病情非活動組(P＜0.05)。SLE患者血清中IFN-γ水平檢測結果為(12.71±5.68)ng/ml，并與患者PBMC中STAT4 mRNA表達呈正相關(r=0.769，P＜0.05)。迄今為止，國內外尚未見其他有關類似的研究報道。

綜上所述，廣東省SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表達水平增高，并與病情活動性及患者血清中IFN-γ水平相關，提示STAT4參與SLE發(fā)病的可能機制，但此結果尚待進一步的研究證實。

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Correlation of mRNA level of STAT4 in peripheral blood mononuclear cells with IFN-γ level in serum in patients with systemic lupus erythematosus

HU Qiu-xia1,LI Bo2,ZHONG Gui-fang3,HE Wei-zhen2,KONG

Wei-hong2,HUANG Jin-xian2.1.Department of Emergency,Shenzhen Futian TCM Hospital,Shenzhen 518040, Guangdong,CHINA;2.Department of Rheumatology,Xiangmihu Branch of Shenzhen Fourth People's Hospital,Shenzhen 518040,Guangdong,CHINA;3.Department of Emengency,Shenzhen Fourth People's Hospital,Shenzhen 518040, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the correlation of mRNA level of STAT4 in peripheral blood mononuclear cells(PBMC)with IFN-γ level in serum in patients with systemic lupus erythematosus(SLE).MethodsPeripheral blood samples from patients with SLE(n=60,the study group)and healthy individuals(n=30,the control group)wereused to detect STAT4 mRNA level by TaqMan real-time RT-PCR and to evaluate IFN-γ level in serum by ELISA methods.ResultsThe STAT4 mRNA level was significantly higher in the study group than the control group,and was also significantly higher in active SLE patients than in non-active SLE patients(P＜0.05).The IFN-γ level in serum was(12.71±5.68),and was positively associated with STAT4 mRNA level(r=0.769,P＜0.05).ConclusionA significant correlation is found between mRNA level of STAT4 in PBMC and the disease activity or IFN-γ level in serum in patients with SLE.

Signal transducer and activator of transcription 4;mRNAexpression;IFN-γ

R593.24+1

A

1003—6350（2013）05—0627—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0271

2012-10-29)

深圳市醫(yī)學重點學科建設經(jīng)費資助項目（編號：2005C10）；深圳市科技計劃項目（醫(yī)療衛(wèi)生類）（編號：201002145）

李博。E-mail：genefan@163.com