果凍中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸同時檢測方法

羅成玉 / 上海市浦東新區(qū)計量質量檢測所

0 引言

果凍是一種用海藻為原料制成的膠凍休閑食品，為人們尤其是小朋友所喜愛。廠家在生產的過程中為了降低成本、增加口味、延長保質期，經常加入如安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸等添加劑[1-2]。由于這些添加劑對人體有一定的毒害副作用，在我國食品添加劑使用衛(wèi)生標準中對這些添加劑的使用范圍和最大使用限量均有嚴格的規(guī)定。

目前，大多數分析方法只能測定上述物質中的一種或者少數幾種[3-9]；另外，與其他食品不同，果凍一般是由含0.5%左右的瓊脂凝固成的半固體，通常很難通過超聲、振蕩等措施將這些添加劑目標物提取出來。因此為方便測定，提高檢測效率，建立一種能夠同時測定果凍中多種添加劑的方法十分重要。本文探索了同時測定安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的實驗條件，建立了同時檢測上述5種物質的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200 高效液相色譜儀系統(tǒng)（配有二極管陣列檢測器、自動進樣器、色譜工作站）。

甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

安賽蜜溶液標準物質（中國計量科學研究院，100 μg/mL）、苯甲酸溶液標準物質（中國計量科學研究院，1.00 mg/mL）、山梨酸溶液標準物質（中國計量科學研究院，1.00 mg/mL）、糖精鈉溶液標準物質（中國計量科學研究院，1.00 mg/mL）、脫氫乙酸（sigma，99.5%）。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱：4.6 mm×150 mm，5 μm；柱溫：30℃；流動相：甲醇（色譜純）：乙酸銨（0.02 mol/L）=10∶90；流速：1.0 mL/min；波長：230 nm；進樣量：20 μL。

1.3 標準曲線的繪制

脫氫乙酸標準儲備液：稱取脫氫乙酸0.100 0 g，用5 mL碳酸氫鈉溶液（5%）溶解后，轉移至100 mL容量瓶，用去離子水定容至刻度，搖勻，即1.0 mg/mL的脫氫乙酸標準儲備液。

混標使用溶液：取上述各種標準物質和標準儲備液適量混合，用去離子水稀釋成5種不同濃度（0.001、0.005、0.010、0.030、0.050）mg/mL 的標準系列，經0.45 μm濾膜過濾。

1.4 樣品前處理方法

1.4.1 振蕩提取

取樣品5.00 g，加水適量，調pH=7.0，定容至50.0 mL。置振蕩器上分別勻速振蕩10 min、20 min、30 min后，過0.45 μm濾膜，濾液待測。

1.4.2 超聲提取

取樣品5.00 g，加水適量，調pH=7.0，定容至50.0 mL。置超聲清洗器上分別超聲10 min、20 min、30 min后，過0.45μm濾膜，濾液待測。

1.4.3 加熱提取

取樣品5.00 g，加水適量，調pH=7.0，定容至50.0mL。置70℃恒溫水分別浴鍋10 min、20 min、30 min后，過0.45 μm濾膜，濾液待測。

1.5 加標樣品的制作方法

向大燒杯中倒入適量果凍樣品，置70 ℃恒溫水浴鍋20 min，搖勻后，分別稱取5.0 g樣品測本底值；另稱取5.0 g樣品若干，向其中分別加入一定量的安賽蜜等5種添加劑混合標準溶液，加標后置70℃恒溫水浴鍋20 min，搖勻后放4℃冰箱60 min，使其凝固即為加標樣品。

2 結果與討論

2.1 波長選擇

實驗中對安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸5種添加劑進行波長掃描，發(fā)現(xiàn)最大吸收波長分別在225.4 nm、219.2 nm、228.7 nm、255.0 nm、310.8 nm處（其中脫氫乙酸的最大吸收波長310.8 nm處有干擾，而次級波長為230.2 nm），綜合考慮各組分的靈敏度，本實驗選擇的實驗波長為230 nm。

2.2 流動相選擇

實驗中采用甲醇與0.02 mol/L乙酸銨水溶液做流動相，流量為1.0 mL/min。實驗結果表明，隨著甲醇在流動相中的比例增大（從5%開始），5種添加劑的保留時間都縮短，當甲醇與0.02 mol/L乙酸銨水溶液比例為10∶90時，各組分分離較好，而且保留時間也適宜。

2.3 標準曲線及最低檢出限

上述不同質量濃度的標準溶液10 μL，按實驗確定的色譜條件進樣，以不同質量濃度下各組分的峰面積為縱坐標，以質量濃度為橫坐標，得到標準色譜圖（圖1）和標準工作曲線（圖2）。圖1中從左到右出峰順序依次為安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸。在該檢測條件下，5種添加劑之間達到很好的分離效果。各組分的線性范圍、線性方程、相關系數見表1。稱樣5.0 g，定容50 mL，進樣量10 μL，按S/N=3確定各添加劑的檢測限濃度見表1?？梢钥闯龈鹘M分在一定線性范圍內，線性關系良好。

圖1 5種添加劑色譜圖

圖2 5種添加劑的標準曲線

2.4 不同前處理方法分析

用振蕩、超聲、加熱法提取分別測得加標樣品5種添加劑的含量，計算回收率結果（如表2所示）。從表中可以看出，通過加熱提取，果凍中的5種添加劑明顯比振蕩、超聲兩種提取方法的回收率高，這主要是因為果凍中的瓊脂在70℃時能完全溶解。還可以得出，即在70℃恒溫水浴鍋20 min是理想的提取時間。

2.5 回收率和精密度

對加標樣品，按實驗方法進行5種添加劑的測定，連續(xù)測定6次，測定結果如表3所示，試驗回收率為98.7%～100.4%，相對標準偏差0.9%～3.0%。

表1 5種添加劑的回歸方程

表2 3種不同提取方法中5種添加劑回收率試驗(%)

表3 5種添加劑精密度和準確度(n = 6)

3 結語

通過試驗比較，發(fā)現(xiàn)果凍樣品先經過稀釋一定倍數，然后在70℃恒溫水浴中提取20 min是比較好的提取方法，回收率、準確度高。這是因為果凍中一般含0.5%左右的瓊脂凝固成的半固體，很難通過振蕩及超聲的方法將其中的內容物完全提取出來，造成了回收率偏低。而瓊脂在70℃恒溫水浴中能完全溶解，經稀釋后瓊脂濃度很低不再形成半固體狀，因此適合過濾后進入儀器測定。

本試驗方法可準確、快速地同時測定果凍中5種添加劑，精密度和準確度高，方法檢出限等能夠滿足實際工作的需要，適用于果凍中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸等5種添加劑的常規(guī)質量檢測。

[1] 戎江瑞. 3種不同前處理方法在HPLC測定果凍中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的實驗比較[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2005, 15(7):885.

[2] 丁芳林, 盧亞玲, 陳波. HPLC-MS 聯(lián)用測定果凍等食品中的3種甜味劑和苯甲酸[J]. 食品與機械, 2008, 24(4):111-114.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB 2760-2011 食品安全國家標準 食品添加劑使用標準[S]. 北京：中國標準出版社, 2011.

[4] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 5009.28-2003 食品中糖精鈉的測定[S]. 北京：中國標準出版社, 2004.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的測定[S]. 北京：中國標準出版社, 2004.

[6] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 5009.140-2003 飲料中乙?；前匪徕浀臏y定[S]. 北京：中國標準出版社, 2004.

[7] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 5009.121-2003 食品中脫氫乙酸的測定[S]. 北京：中國標準出版社, 2004.

[8] 中國標準化研究院. GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定 高效液相色譜法[S]. 北京：中國標準出版社, 2009.

[9] 中國標準化研究院. GB/T 23377-2009 食品中脫氫乙酸的測定 高效液相色譜法[S]. 北京：中國標準出版社, 2009.