冠心病患者焦慮情緒與載脂蛋白E 基因多態(tài)性研究

呂俊

吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病作為冠心病(CHD)主要危險因子已為我們所熟悉［1］，隨著人類對CHD 更深一步的研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白E (ApoE) 基因多態(tài)性和CHD 患者的焦慮情緒也存著很大的關(guān)聯(lián)。ApoE 作為脂蛋白中一種非常重要的成分，研究證明ApoE 基因是目前較為明確的CHD 候選基因，被認(rèn)為是CHD 的遺傳標(biāo)記［2－3］。本研究將對于焦慮情緒與ApoE 基因多態(tài)性之間的聯(lián)系做進(jìn)一步的探討和分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究組 選擇2011 年6 月—2012 年2 月入住本院心血管內(nèi)科病房的CHD 患者90 例，入選標(biāo)準(zhǔn)： (1) 通過心電圖檢查或是符合其他的一些診斷標(biāo)準(zhǔn)被明確診斷為CHD。(2)病情進(jìn)入到一個比較穩(wěn)定的階段。(3) 所有研究對象不伴有其他方面的基礎(chǔ)疾病，并且都來自同一個種族(漢族) ，組員之間無血緣關(guān)系。(4) 已經(jīng)被告知此研究情況并自愿參與。(5) 無其他精神問題。采用漢密爾頓焦慮測量表(HAMA－14) 和焦慮自評測量表(SAS) ，將患者分為伴有焦慮情緒的CHD 組(焦慮組) 和不伴有焦慮情緒的CHD 組 (非焦慮組) ，各45 例。其中焦慮組，女20 例，年齡37 ～73 歲，平均(55.2 ±11.5) 歲； 男25 例，年齡36 ～72 歲，平均(57.4 ±12.1) 歲。非焦慮組，女22 例，年齡37 ～71 歲，平均(54.9±10.5) 歲； 男23 例，年齡39 ～73 歲，平均(56.7 ±10.8)歲。

1.1.2 對照組 入選標(biāo)準(zhǔn)： (1) 無情緒和精神等障礙； (2)臨床和實驗室輔助檢查無能夠診斷為CHD 的證據(jù)； (3) 對本研究的一些具體事情已經(jīng)完全知曉； (4) 種族、文化程度、所在的居住地和所選取的研究對象相接近。選取同期本院符合要求的45 例為對照組，其中男24 例，女21 例； 年齡37 ～73歲，平均(55.8 ±10.1) 歲。

1.2 方法

1.2.1 情緒評定 研究對象在相同的指導(dǎo)語條件下，在無外界干擾的實驗室內(nèi)或是醫(yī)院病房內(nèi)做完HAMA、SAS 的測定。

1.2.2 采集所需的血液標(biāo)本 對研究對象禁食12h 后于第2天早上采集肘靜脈血5.0ml，對所采集的血進(jìn)行抗凝，用離心機(jī)對血樣在2h 內(nèi)進(jìn)行離心，再取離心所得的血漿成分進(jìn)行血脂的測定。將血細(xì)胞儲藏在－70℃的冷凍箱中保存，用來獲取DNA。再將其整合起來分析ApoE 基因的多態(tài)性。

1.2.3 測定血脂 用氧化酶法對所有研究對象的三酰甘油(TG) 和總膽固醇(TC) 進(jìn)行測定； 用均相法來測定高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C) 和低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C) ； 載脂蛋白A1 (ApoA1) 和載脂蛋白B (ApoB) 采用免疫法測定。

1.2.4 提取模版DNA 取受試對象的血細(xì)胞，將其中的白細(xì)胞分離出來，采用Znbenko GS 等方法提取人類基因組DNA。

1.2.5 ApoE 基因具備的聚合酶鏈反應(yīng)－限制性片段長度多態(tài)性(PCR－RFLP) 分析 (1) PCR 擴(kuò)增： 反應(yīng)的體積是45μl，當(dāng)中10 ×Buffer 4.5μl； 4 ×dNTPs3.5μl； MgCl23.5μl；引物1 和引物2 各為2.0μl； DMSO 4.5μl； 模板DNA 5.5μl。放置到熱循環(huán)儀器里95℃預(yù)變性6min 后，再放入Tap DNA 聚合酶2 個單位，之后根據(jù)下面的程序進(jìn)行5 次循環(huán)，即96℃變性10s、64℃退火40s、72℃延伸1.3min，再按以下程序循環(huán)25 次，既95℃變性9s，63℃退火35s、69℃延伸1.3min。最后于71℃再延伸9min。(2) 酶切： PCR 擴(kuò)增所得的產(chǎn)物8.5μl，加入9.5μl Hhal 限制性內(nèi)切酶與1.5μl Buffer，放在37℃恒溫酶切消化過夜，聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳后進(jìn)行銀染［3］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用t 檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 焦慮組和對照組ApoE 基因型比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，見表1) 。

2.2 對照組攜帶e4 等位基因的頻率明顯低于非焦慮組(χ2=4.44，P ＜0.05) ； 各組攜帶e2、e3 等位基因的頻率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，見表2) 。

2.3 攜帶e4 等位基因的CHD 患者和不攜帶e4 等位基因的CHD 患者的HAMA、SAS 評分及LDL、TC 水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，見表3) 。

表1 3 組ApoE 基因型的比較〔n (%) 〕Table 1 Comparison of ApoE genotype in the three groups

表2 3 組攜帶ApoE 等位基因情況比較〔n (%) 〕Table Comparison of carrying the ApoE allele status in the three groups

表3 CHD 患者是否攜帶84 等位基因的量表評分和血脂水平比較(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

表3 CHD 患者是否攜帶84 等位基因的量表評分和血脂水平比較(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

組別 例數(shù) HAMA(分) SAS(分) ApoB(g/L) ApoA1(g/L) LDL(mmol/L) TG(mmol/L) TC(mmol/L)±0.9 1.4 ±0.8 5.3 ±0.8未攜帶e4 組 69 8.9 ±6.3 36.9 ±8.1 0.91 ±0.15 1.29 ±0.25 2.9 ±1.0 1.4 ±0.5 4.5 ±1.2 t攜帶e4 組 21 13.1 ±5.1 41.2 ±7.5 0.95 ±0.30 1.37 ±0.32 3.4 3.11 3.12 0.72 0.24 2.08 0.23 2.15 P 值值0.003 0.003 0.421 0.635 0.029 0.811 0.025

3 討論

CHD 是常見的多發(fā)病，是心血管系統(tǒng)疾病常見的死亡原因之一［4］，CHD 不僅是一種生理疾病，同時也屬于心理疾病。已經(jīng)有很多研究報道及調(diào)查顯示，一些社會上存在的對人類心理有影響的因素對CHD 病程的發(fā)生和發(fā)展都起著不可忽視的作用，而且也是引起CHD 惡性冠狀動脈事件、導(dǎo)致猝死的重要危險因素［5］。相當(dāng)一部分的CHD 患者在不同程度上伴有一定程度的焦慮情緒，其所占的比例比無CHD 的健康人高出很多，同時也比患有其他病的人群高出許多。CHD 患者普遍存在焦慮情緒，是比較常見的一種情緒問題。目前，關(guān)于ApoE基因和抑郁之間聯(lián)系的報道已有許多，但是研究ApoE 基因和焦慮情緒的報道卻是罕見。國外只有個別幾個醫(yī)學(xué)方面的專家在實驗動物身上對其進(jìn)行了一些研究，利用1 個簡單化的迷宮對缺失C57BL/6 實驗鼠與野外生存的C57BL/6 小鼠就與焦慮有關(guān)的一些行為進(jìn)行了觀察和分析，研究結(jié)果顯示，前者實驗鼠的焦慮水平遠(yuǎn)低于后者小鼠，說明焦慮的產(chǎn)生和ApoE 基因之間有比較緊密的聯(lián)系［6］。

本研究發(fā)現(xiàn)CHD 患者抑郁與ApoE 基因e3/4 型和e4 等位基因多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)［7－8］，非焦慮組患者的e4/4 基因型和其等位基因的頻率顯然低于焦慮組患者； 非焦慮組和對照組各等位基出現(xiàn)的頻率和其基因型，無顯著差異，說明CHD 患者產(chǎn)生焦慮情緒的原因中，e4/4 基因型和e4 等位基因有可能占有重要的位置，更進(jìn)一步說明了CHD 患者焦慮情緒的產(chǎn)生與ApoE 基因的多態(tài)性之間存有很大的相關(guān)性。因此，對于CHD伴有焦慮情緒患者的相關(guān)臨床表現(xiàn)及病因還需進(jìn)行更深的探討。

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