高血壓患者血清肌球蛋白重鏈14、干擾素調節(jié)因子－4、熱休克蛋白70 及熱休克蛋白22 mRNA 的表達及阿托伐他汀干預研究

沙 莎，陳月云，鐘 民，李 勁，王安才，王 星

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是引起各種心臟血管疾病的主要危險因素之一。炎癥因子是一類由免疫細胞及非免疫細胞分泌，參與細胞的生長、分化、修復和免疫過程。希臘ATTICA 研究顯示，與正常血壓組相比較，高血壓前期組患者血液中C 反應蛋白 (CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF－α)、同型半胱氨酸等與動脈粥樣硬化相關的一些氧化應激標志物和炎癥標志物水平顯著增高［1］。他汀類藥物能夠降低血脂水平，具有快速增強內皮細胞功能，穩(wěn)定動脈粥樣斑塊的作用，然而對高血壓患者心臟重構的影響及作用機制尚不明確。本研究通過觀察高血壓患者血清球蛋白重鏈14(MHC14)、干擾素調節(jié)因子－4 (IRF －4)、熱休克蛋白70(HSP70)、熱休克蛋白22 (HSP22)mRNA 表達及左室結構與功能的變化，旨在探討EH 的發(fā)病機制及阿托伐他汀的調脂外作用。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇我院門診2011 年首次就診的高血壓患者60 例，均符合《中國高血壓防治指南2010》［2］診斷標準，并排除繼發(fā)性高血壓，肝、腎、內分泌疾病及感染性疾病。選擇同期來我院體檢的健康志愿者22 例。本試驗通過皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院倫理委員會批準。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 分組 將符合條件的高血壓患者作為高血壓組(n =60);再將高血壓組隨機分為:常規(guī)降壓組(n =30):給予常規(guī)降壓(根據(jù)患者血壓水平及檢查指標選擇適合降壓藥);常規(guī)降壓+他汀組(n =30):除根據(jù)同樣原則選擇降壓藥外，每晚睡前口服阿托伐他汀(商品名:立普妥，輝瑞制藥有限公司生產)20mg，療程均為24 周;將健康體檢者作為對照組(n=22)。

1.2.2 反轉錄聚合酶鏈反應(RT－PCR) 取由臨床采集患者肝素抗凝血樣2ml，采用Trizol 一步法提取總RNA，反轉錄成cDNA。取2μg 總RNA 作為模板，oligo (dT)作引物，反轉錄酶為AMV，反應體系為50 μl。PCR 反應條件(見表1)。各反應條件均經過優(yōu)化，使5 個指標的循環(huán)次數(shù)均處于線性期內。配制1%瓊脂糖凝膠，加入終濃度為0.5 μg/ml 的溴化乙錠(EB);取5μl PCR 終產物及DNA marker，以1 ×TAE 為緩沖液，電壓80V，電泳20min，采用Tanon 凝膠成像與分析系統(tǒng)ImageSystem Ver 4.0 測定擴增產物條帶平均光密度值。結果以目的基因mRNA 與3 磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)mRNA的比值表示，進行半定量比較。引物均由上海生工合成，RT－PCR試劑購自上海申能博彩生物科技有限公司。

表1 PCR 反應條件Table 1 PCR reaction conditions

1.3 監(jiān)測指標 監(jiān)測用藥前及用藥后8 周、16 周、24 周兩組肝功能、腎功能及肌酸激酶的變化(以明確用藥后有無明顯的肝腎損害及肌病等不良反應)。使用iE33 彩色多普勒超聲診斷儀分別測定兩組治療前后左室內徑(LV)、左室后壁厚度(LVPW)、左室射血分數(shù)(LVEF)、左房室瓣舒張期血流頻譜(E/A)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以(±s)表示，組間比較采用t 檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關性研究采用直線相關分析，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組基本資料比較 常規(guī)降壓組和常規(guī)降壓+他汀組性別、年齡、體質指數(shù)(BMI)、高血壓病程、吸煙、飲酒、血壓、血脂及治療期間使用降壓藥種類比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P ＜0.05，見表2)。

2.2 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結構功能指標比較 治療前兩組患者血壓、血脂及心臟結構功能指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義 (P ＞0.05)。治療24 周后，兩組三酰甘油、LVPW、LVEF 比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05);而血壓、LV、E/A 比較。差異均無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05，見表3)。

表2 兩組基本資料比較Table 2 Comparison of basic information between two groups

表3 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結構功能指標比較(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

表3 兩組治療前后血壓、血脂及心臟結構功能指標比較(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

注:LV:左室內徑;LVPW:左室后壁厚度;LVEF:左室射血分數(shù);E/A:左房室瓣舒張期血流頻譜

組別 例數(shù) 收縮壓(mmHg)治療前治療后常規(guī)降壓組 30 155±13 132±7 96±12 75±7 2.5±0.5 2.4±0.8 48.3±4.1 47.6±4.1 8.9±1.3 8.8±1.4 57.0±4.3 58.0治療后舒張壓(mmHg)治療前治療后三酰甘油(mmol/L)治療前治療后LV(mm)治療前治療后LVPW(mm)治療前治療后LVEF(%)治療前治療后E/A治療前±4.3 0.52±0.15 0.58±0.11常規(guī)降壓+他汀組 30 156±13 129±6 96±12 72±7 2.4±0.6 2.0±0.7 47.2±4.1 46.3±4.1 8.7±1.3 8.0±1.3 55.0±4.4 61.0±4.3 0.56±0.16 0.63±0.14

2.3 各組患者血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表達 高血壓組血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表達與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)。24 周后，常規(guī)降壓+他汀組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達與常規(guī)降壓組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05，見圖1、2)。

2.4 血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA 表達與心臟結構和功能相關性分析 24 周后，常規(guī)降壓+他汀組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達與LVPW 呈正相關(r 分別為0.386、0.429、0.571、0.607，P ＜0.05)，與LVEF 呈 負 相 關 (r 分 別 為－ 0.415、 － 0.393、 － 0.528、－0.497，P ＜0.05，見圖3)。

圖1 mRNA 表達電泳圖譜Figure 1 The electrophoresis of mRNA expression

圖2 各組(MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDHFigure 2 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH in each group

圖3 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH 與LVPW、LVEF的相關性分析Figure 3 The correlation analysis of (MHC14，IRF － 4，HSP70，HSP22)/GAPDH and LVPW，LVEF

3 討論

相關研究表明，EH 是一種低度全身性炎性反應狀態(tài)(low－grand systemic imflammation condition)，表現(xiàn)為炎性細胞因子產生異常和炎性信號通路的激活［3］。已證實超敏C 反應蛋白(hs－CRP)、白介素1 (IL －1)、TNF －α 等炎性因子可通過細胞毒作用，破壞血管內皮細胞結構和功能的完整性，導致血管重構阻力增加，引起血壓增高。Trytko 等［4］發(fā)現(xiàn)CRP 水平增高與左心室質量指數(shù)(left ventricular mass index，LVMI)增高密切相關，檢測患者CRP 水平有助于評估左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)。EH 患 者hs － CRP、IL－1、TNF－α 水平與動脈血管僵硬度、冠狀動脈舒張功能障礙、LVH 及尿微量清蛋白呈正相關［5－8］。

MHC 是將儲存在ATP 中的化學能轉化為機械能的分子馬達，與信號傳導、肌肉收縮、趨化性遷移和細胞形狀的改變等有關［9］。老年人單核細胞肌球蛋白減少，可能影響到免疫細胞的許多功能［10］。

IRF 是一類多功能的轉錄因子，在干擾素轉錄調控，病原體免疫反應，細胞因子信號轉導，細胞增殖調控以及造血干細胞的發(fā)育、淋巴細胞的分化，先天性免疫和適應性免疫調控等方面都起著重要的作用。IRF －4 結合蛋白(IRF －4 binding protein，IBP)是一個新發(fā)現(xiàn)的與Th 活化及Th2 極性分化相關的分子，為自身免疫調控性疾病的研究提供了新的線索。

HSP 分為很多亞組，在心血管組織中高度表達，通過穩(wěn)定細胞內變性的蛋白質、減輕細胞內的離子紊亂、保護血管內皮細胞的功能、干擾應激所啟動的細胞凋亡程序等方面來發(fā)揮作用，作為一重要的抗原被免疫系統(tǒng)識別，觸發(fā)自身免疫反應，參與EH 的發(fā)生和發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)高血壓組與對照組相比，血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達均有不同程度升高，推測這可能與免疫炎性損傷參與高血壓的發(fā)生發(fā)展相關，因此積極控制血壓亦是對自身免疫反應的保護性調控。

他汀類作為調脂藥物，其調脂以外的心血管保護作用近年來日益受到重視。人們從大量的臨床和動物實驗中發(fā)現(xiàn)，使用他汀類藥物治療有利于血壓的控制［11］，使收縮壓及舒張壓均明顯下降［12］。李凌等［13］研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀可部分預防EH左心室重構，其機制可能與誘導心肌細胞凋亡、抑制心肌結締組織生長因子(CTGF)蛋白表達有關。張雪娟等［14］研究表明阿托伐他汀可以防止壓力負荷增大導致的心肌肥厚，這種保護作用可能與抑制白介素18 (IL－18)，心肌營養(yǎng)素1 (CT－1)等炎性因子的表達有關，其抗心肌肥厚作用可能是通過抑制炎癥反應實現(xiàn)的，因此使用他汀類藥物對高血壓早期干預，可望減輕高血壓LVH 和對心功能改善起一定作用。

本研究結果發(fā)現(xiàn)，治療24 周后與常規(guī)治療組相比，他汀治療組血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表達均有不同程度降低，且與LVPW 呈正相關，與LVEF 呈負相關。這與上述阿托伐他汀通過抑制免疫炎癥損傷，改善高血壓患者心室重構及功能結論一致。

目前炎癥過程導致EH 的病因仍不清楚，更多炎癥因子與EH 之間的關系也需要進一步的探討。更好地認識EH 的炎癥機制，有助于研究與制定更好的治療策略，以減少EH 的發(fā)病率、病死率，并且預防以及延緩EH 患者的靶器官損害。監(jiān)測血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 等相關炎性指標對高血壓進行積極干預，可能為血壓控制、靶器官保護以及心臟結構及功能的改善提供理論依據(jù)。

申明:本研究與藥品提供公司無利害關系。

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