二藤風(fēng)濕藥酒急性毒性研究

郝 婷 亢孝弟 周 偉 陜西省友誼醫(yī)院（西安710068）

二藤風(fēng)濕藥酒是以雷公藤、雞血藤、白芍、血竭等中藥組成，用白酒為溶劑制成的酒劑。具有祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)，消腫止痛之功效，對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫均有抑制作用。用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、Still病等自身免疫性疾病。做為醫(yī)院制劑，累計(jì)已使萬余名自身免疫性疾病患者受益［1－3］。但由于處方中含有的雷公藤，在《中藥大辭典》中記載有大毒［4］，按照醫(yī)院制劑新的注冊(cè)管理辦法的要求，再注冊(cè)過程中需要做急性毒性藥理實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，為此我們做了這方面的研究。

1 材料與方法 1.1 材料 1.1.1 ICR 小鼠，體重20～24g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（陜）2008－008；動(dòng)物使用許可證號(hào)為：SYXK（陜）2012－005。

1.1.2 二藤風(fēng)濕藥酒由西安航天總醫(yī)院制劑室制備（批號(hào)：20101115，規(guī)格每100mL 含生藥41g，批準(zhǔn)文號(hào)：陜藥管制字［2001］第1897號(hào)）

1.1.3 電子天平BL310（德國Sartorius公司）；超聲清洗器（KQ5200B，頻率40KHZ，昆山市超聲儀器有限公司）

1.2 二藤風(fēng)濕藥酒的制備方法 按處方量稱取雷公藤（去皮），切片用白酒作溶劑浸泡30～40d，濾過，濾液加血竭攪拌使之溶解，備用；另取容器，將白芍、雞血藤加水煎煮兩次，濾過，合并濾液，適量濃縮，加冰糖攪拌溶解。將濾液與濃縮液合并，攪拌均勻，靜置24h濾過，補(bǔ)充白酒至處方量。按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行薄層鑒別及用HPLC 法定量測(cè)定雷公藤甲素含量符合規(guī)定后，即可。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 50只小鼠禁食不禁水10h，將小鼠分成4組，每組10～13只，雌雄各半。二藤風(fēng)濕藥酒實(shí)驗(yàn)組按預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索的劑量0.4 mL／10g，24h內(nèi)4次灌胃給藥，對(duì)照組給予生理鹽水，按同劑量，同方法灌胃給藥。給藥后正常顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，自然光照12h，維持動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20～24℃，相對(duì)濕度45%～60%。在給藥后4h內(nèi)詳細(xì)觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況，然后每天上、下午各觀察一次。連續(xù)觀察14 d，重點(diǎn)觀察動(dòng)物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動(dòng)物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。14d后逐只稱重并處死解剖，分別摘取相關(guān)臟器，按臟器指數(shù)＝臟器重量／體重×100進(jìn)行計(jì)算，并組間進(jìn)行t檢驗(yàn)以判斷差異。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.1 給藥二周內(nèi)對(duì)小鼠體重的影響 見表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 小鼠第1 次給藥后有1 只雄鼠，2只雌鼠出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，第2次給藥后雄鼠4只，雌鼠2只出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)。給藥14d后無死亡，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物未發(fā)現(xiàn)胸腔、腹腔積液。結(jié)束逐只稱重后處死解剖，實(shí)驗(yàn)組體重減輕，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用分析天平對(duì)動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊前列腺、睪丸，各器官進(jìn)行稱重，并計(jì)算臟器指數(shù)，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)以判斷差異。結(jié)果雄性給藥組肝指數(shù)、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)降低；雌性給藥組肝指數(shù)、子宮指數(shù)減低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，無顯著差異。實(shí)驗(yàn)組雌性動(dòng)物胸腺指數(shù)明顯降低，與對(duì)照組比較，有顯著性差異。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示，二藤風(fēng)濕藥酒在相當(dāng)于人用藥劑量120倍時(shí)，對(duì)肝功能有影響，用藥后會(huì)使動(dòng)物免疫功能下降，雌性小鼠子宮萎縮，這些在臨床用藥時(shí)應(yīng)引起注意。

表1 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)小鼠體重的影響（±s）

表1 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)小鼠體重的影響（±s）

給藥后（d）組別性別動(dòng)物給藥前3 7 10 14對(duì)照組雄12 16.7±1.93 20.8±2.38 25.8±2.74 26.8±2.23 25.7±4.16 雌11 14.8±1.62 19.32±1.33 23.36±1.51 25.83±1.74 25.87±2.10 合23 15.8±2.00 20.1±2.05 24.6±2.53 26.3±2.03 25.8±3.27實(shí)驗(yàn)組雄12 17.7±2.00 22.6±1.41 26.3±1.75 27.2±1.37 27.6±1.55 雌11 15.9±1.84 19.53±1.42 24.15±1.30 24.29±1.33 22.91±1.31合23 16.8±2.08 21.0±2.08 25.2±1.85 25.7±1.99 25.1±2.75

2.3 給藥2周后對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響 見表2、表3、表4。

表2 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)雄性動(dòng)物臟器指數(shù)的影響（±s）

表2 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)雄性動(dòng)物臟器指數(shù)的影響（±s）

組別動(dòng)物心指數(shù)肝指數(shù)脾指數(shù)肺指數(shù)腎指數(shù)胸腺指數(shù)腎上腺指數(shù)對(duì)照組雄性 12 18.50±1.19139.79±13.39 8.84±1.54 21.47±2.04 44.19±3.74 11.16±3.90 1.90±4.00實(shí)驗(yàn)組雄性 12 17.60±2.68138.31±15.83 9.81±2.80 22.82±1.91 45.19±5.16 10.41±3.18 0.91±0.40

表3 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)雌性動(dòng)物臟器指數(shù)的影響（±s）

表3 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)雌性動(dòng)物臟器指數(shù)的影響（±s）

組別動(dòng)物心指數(shù)肝指數(shù)脾指數(shù)肺指數(shù)腎指數(shù)胸腺指數(shù)腎上腺指數(shù)對(duì)照組雌性 11 14.95±2.89 127.9119.04 9.93±2.22 21.01±3.35 34.27±3.58 14.45±3.25 1.05±0.45實(shí)驗(yàn)組雌性 11 13.54±1.44 116.01±9.39 11.29±3.66 20.96±2.28 31.73±2.76 11.28±1.78△1.00±0.24

表4 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)動(dòng)物生殖系統(tǒng)臟器指數(shù)的影響（±s）

表4 二藤風(fēng)濕藥酒對(duì)動(dòng)物生殖系統(tǒng)臟器指數(shù)的影響（±s）

組別雄性動(dòng)物睪丸精束前列腺雌性動(dòng)物卵巢子宮對(duì)照組12 45.89±6.81 18.12±8.24 11 20.20±7.08實(shí)驗(yàn)組12 45.73±8.45 13.85±4.52 11 16.50±3.47

3 討 論 二藤風(fēng)濕藥酒是根據(jù)中醫(yī)理論，以雷公藤為君藥，白芍為臣藥，雞血藤為佐藥組成的復(fù)方制劑。方中雷公藤治療自身免疫疾病，療效確切，但有一定的毒副作用，一直以來，人們不斷在尋找增效減毒的較好方法［5］。白芍具有養(yǎng)血、柔肝、斂陰、止汗、緩急止痛的功效，與雷公藤配伍后增效減毒［6］。因二藤風(fēng)濕藥酒中酒精含量在40～60%，如果1日劑量1次灌胃給藥，動(dòng)物昏昏欲睡，步態(tài)不穩(wěn)。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，1 日劑量4次給藥，對(duì)小鼠的正?；顒?dòng)基本沒有影響。小鼠按0.4mL／10g的劑量給藥，相當(dāng)于成人給藥劑量的120倍（成人按60kg體重，1d20mL）。二藤風(fēng)濕藥酒常規(guī)劑量治療，控制病情，緩解期應(yīng)用小劑量間歇療法，穩(wěn)定病情，不失為目前治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎的經(jīng)濟(jì)有效方法。畢竟經(jīng)典甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、來氟米特等療法也有較嚴(yán)重不良反應(yīng)［7］。生物制劑注射用重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體－抗體融合蛋白（益賽普）［8］雖然起效快，但因價(jià)格昂貴及不良反應(yīng)，也不能普及推廣。

二藤風(fēng)濕藥酒動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)肝臟有損害，在臨床應(yīng)用中很少出現(xiàn)這種情況，但對(duì)肝功異常的自身免疫性疾病患者，應(yīng)保肝護(hù)肝。如長期使用，劑量不變，會(huì)引起免疫功能低下。唯獨(dú)對(duì)生殖系統(tǒng)的毒性，到目前還沒有有效防治辦法，在實(shí)際中對(duì)預(yù)生育的自身免疫性疾病患者，禁止使用?？傊诩毙云诓捎?/p>

［1］ 周 偉，閆 娟.抗風(fēng)濕藥酒治療強(qiáng)直性脊柱炎100例臨床觀察［J］.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2006，9：975.

［2］ 周志祥，王漢雄，黃澤彥，等.雷公藤藥酒治療活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎48例［J］.陜西中醫(yī)，2011，32（12）：1596－1598.

［3］ 李振明，楊 雄.雷公藤多甙聯(lián)合潑尼松治療成人紫癜性腎炎30 例療效觀察［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2010，39（11）：1542－1543.

［4］ 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海：上?？茖W(xué)出版社，2004，下冊(cè)2469.

［5］ 竇建衛(wèi)，雷 瑩，王嗣岑.雷公藤毒性的研究現(xiàn)狀［J］.陜西中醫(yī)，2006，27（4）：485－487.

［6］ 李興銳，陳茂紅，王和融.白芍總苷合雷公藤多苷治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎60例［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，30（3）：16－18.

［7］ 姜遠(yuǎn)英.臨床藥物治療學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：333－336.

［8］ 于學(xué)滿，王曉非.益賽普與傳統(tǒng)方法治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎療效分析［J］.中國誤診學(xué)雜志，2008：8（3）：567－568.