止咳平喘糖漿中麻黃堿的含量測(cè)定方法研究

馮 旭 覃潔萍 梁臣艷 牛晉英 郭 蕊 王 卉

廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

止咳平喘糖漿是由麻黃、石膏、苦杏仁等十一味中藥制成的一個(gè)成方制劑，收載于國(guó)家中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)4部，具有清熱宣肺，止咳平喘等功效，用于風(fēng)熱感冒引起的咳喘，氣粗痰多，周身不適，咽痛。止咳平喘糖漿的君藥為麻黃，原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。麻黃藥材中主要含麻黃堿等生物堿類化合物［1］。目前麻黃堿的含量測(cè)定應(yīng)用較廣泛的是高效液相色譜法。其藥材及制劑含量測(cè)定時(shí)供試品的處理方法主要有萃取法［2－4］和蒸餾法［5－7］。萃取法操作復(fù)雜，所用的萃取液乙醚為麻醉藥品，易發(fā)生中毒且污染環(huán)境;蒸餾法則方便簡(jiǎn)單，易于操作，提取效率高，但不同文獻(xiàn)報(bào)道的蒸餾條件不一。為了優(yōu)化止咳平喘糖漿中麻黃堿含量測(cè)定的供試品溶液制備方法，本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法，考察了不同氫氧化鈉濃度、氫氧化鈉用量、氯化鈉用量及蒸餾液接收量對(duì)止咳平喘糖漿中麻黃堿含量測(cè)定結(jié)果的影響，建立了制劑中麻黃堿的含量測(cè)定方法，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent 1100 Series高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣器 (G1313A)，柱溫箱，可變波長(zhǎng)檢測(cè)器 (VWD)。

超純水系統(tǒng) (MILLIPORE)。

乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。

麻黃堿對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào):171241－200303)。

止咳平喘糖漿樣品及陰性樣品由廣西三金藥業(yè)生物制品有限公司提供。

陰性樣品為按處方比例及制劑工藝制備的缺麻黃的空白對(duì)照樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 麻黃堿測(cè)定條件

2.1.1 色譜條件 美國(guó)Phenomenex公司Luna 5μ C18(2)柱 (4.6mmID×250mm);

流動(dòng)相:乙腈:0.1%磷酸 (含0.1%三乙胺) (3:97)，流速:1ml/min，柱溫:30℃，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm。進(jìn)樣量:20μl。理論板數(shù)以麻黃堿峰計(jì)不低于6000。

按上述色譜條件分別對(duì)對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)行分析，分離效果較好，在與對(duì)照品出峰相應(yīng)的保留時(shí)間未出現(xiàn)雜質(zhì)峰，可見(jiàn)其它成分對(duì)主成分測(cè)定無(wú)干擾，說(shuō)明本法具有專屬性。

2.1.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品12.3mg，加入流動(dòng)相制成每1ml含0.123mg的溶液即得。

2.1.3 供試品及陰性樣品溶液的制備 精密量取本品50ml，加入氯化鈉15g，3mol/l氫氧化鈉溶液100ml，蒸餾，用預(yù)先盛有0.1mol/l鹽酸溶液10ml的100ml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.1.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.50、1.25、2.50、5.00、7.50ml，置 10ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液并稀釋至刻度，即得濃度分別為6.15、15.38、30.75、61.50、92.25μg/ml的對(duì)照品溶液。分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定麻黃堿峰面積。以峰面積 (A)為縱坐標(biāo)，以含量 (C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為 A=38.924C+3.167，γ=0.9999(n=5)，線性范圍為 6.15 ～92.25μg/ml。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述濃度為15.375μg/ml的對(duì)照品溶液20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定麻黃堿峰面積，得平均峰面積為590.8，RSD為0.18%(n=6)，說(shuō)明本法精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一瓶供試品溶液20μl，注入色譜儀，在12小時(shí)內(nèi)測(cè)定麻黃堿的峰面積，共測(cè)6次，得平均峰面積為595.6，RSD為0.81%(n=6)，表明樣品在12個(gè)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法平行制備供試品溶液6份，在同等色譜條件下測(cè)定麻黃堿峰面積，計(jì)算其含量，RSD為0.69% (n=6)，說(shuō)明本法重現(xiàn)性良好。

2.1.8 回收率試驗(yàn) 精密量取同批已知濃度止咳平喘糖漿25.00ml(麻黃堿含量為30.85μg/ml)，置圓底燒瓶中，再精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液10.00ml(濃度61.5mg/ml)，以下按供試品制備項(xiàng)下的方法制備，進(jìn)樣20μl，同法測(cè)定 (n=6)。結(jié)果見(jiàn)表1，說(shuō)明本法準(zhǔn)確度良好。

表1 麻黃堿回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選麻黃堿的提取條件

2.2.1 影響因素考察 參照有關(guān)文獻(xiàn)［7］，在樣品中加入氫氧化鈉 (2mol/L)150ml和20g氯化鈉，加熱蒸餾提取，用裝有10ml 0.1mol/L鹽酸溶液的100ml容量瓶收集蒸餾液約95ml后定容，制成供試品，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定。分別改變不同條件，其余條件按上述條件進(jìn)行提取，對(duì)影響提取效率的因素進(jìn)行考察。從測(cè)量結(jié)果可知，氫氧化鈉的加入體積、氫氧化鈉溶液的濃度、氯化鈉的加入量、蒸餾液接收體積等因素對(duì)測(cè)量結(jié)果均有明顯影響，為考察各因素的綜合影響結(jié)果，以下通過(guò)正交設(shè)計(jì)法來(lái)優(yōu)選麻黃堿的最佳提取條件。

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)方案 考察指標(biāo):測(cè)得的麻黃堿含量。

考察因素:氫氧化鈉的加入體積、氫氧化鈉溶液的濃度、氯化鈉的加入量、蒸餾液接收體積。

采取L9(34)正交試驗(yàn)進(jìn)行考察，取正交設(shè)計(jì)表的1，2，3，4列分別對(duì)應(yīng)于A、B、C、D四個(gè)因素。其因素水平見(jiàn)表2，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 因素水平表

表3 正交實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果

所在列2 3 4實(shí)驗(yàn)1 9 200 3 15 80 66.73均值1 79.513 49.627 63.453 63.447均值2 69.887 71.587 70.387 71.543均值3 54.11 82.297 69.67 68.52極差25.403 32.67 6.934 8.096

2.2.3 結(jié)果分析 由麻黃堿含量的直觀分析可知，四個(gè)因素的極差大小順序?yàn)锽＞A＞D＞C。進(jìn)一步進(jìn)行方差分析(結(jié)果見(jiàn)表4)，B因素和A因素有顯著性，C因素及D因素?zé)o顯著性。因此確定最佳工藝為:A1B3C2D2，即加入3mol/L氫氧化鈉的體積100ml，氯化鈉15g，蒸餾液接至約95ml。

2.2.4 樣品的含量測(cè)定 參照正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用以氫氧化鈉 (3mol/L)100ml和15g氯化鈉加熱蒸餾提取，用裝有10ml 0.1mol/L鹽酸溶液的100ml容量瓶收集蒸餾液約95ml后加水至刻度，制成供試品，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 本試驗(yàn)曾參照文獻(xiàn)用萃取法提取供試品，將制得的供試品溶液注入高效液相色譜儀，同法測(cè)定鹽酸麻黃堿的含量，將測(cè)得的結(jié)果與蒸餾法的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明，蒸餾法較萃取法處理時(shí)間短，提取效率高，方法簡(jiǎn)便，易于操作，準(zhǔn)確性好;并且不需使用有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境影響小，故采用蒸餾法作為提取方法。

3.2 按照正交表中的實(shí)驗(yàn)3蒸餾時(shí)，由于加入氫氧化鈉的體積少，氯化鈉的量較大，造成蒸餾快結(jié)束時(shí)氯化鈉的濃度相對(duì)較高，此時(shí)容易出現(xiàn)爆沸現(xiàn)象，并出現(xiàn)氯化鈉析出晶體。此現(xiàn)象是氯化鈉加入量太大和氫氧化鈉溶液體積太少所致，且氯化鈉加入量的增加對(duì)提取效率影響不大，故最佳提取方法中氯化鈉的加入量為15g。

3.3 正交實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果表明氫氧化鈉的加入體積與提取效率之間并非成正比關(guān)系，造成此結(jié)果的原因可能為由于加入的氫氧化鈉體積增大導(dǎo)致氯化鈉的濃度降低，從而降低了提取效率的緣故。

3.4 氫氧化鈉的濃度越大對(duì)其提取效率越高，但氫氧化鈉的濃度大于3mol/L后對(duì)提取效率的影響不大，且過(guò)高濃度的氫氧化鈉對(duì)玻璃儀器的腐蝕作用很強(qiáng)，因此最佳提取方法中氫氧化鈉的濃度為3mol/L即可。

3.5 試驗(yàn)結(jié)果表明，氫氧化鈉溶液的濃度和體積是影響提取的最關(guān)鍵因素。本結(jié)果為含麻黃堿的中藥及制劑的含量測(cè)定提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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