四數(shù)九里香水提液對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位的影響

金 曼 肖 陽 楊劉英姿 宋 強(qiáng) 劉 丹 林 歡 李旭偉 胥正敏

1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，四川 南充 637000;2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系，四川 南充 637000;3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000

四數(shù)九里香 (Murraya tetramera Huang)又稱千里香、滿山香、過山香、千只眼等，為蕓香科九里香屬植物，是一種落葉喬木，產(chǎn)于廣西的百色、德保和云南的硯山、富寧、文山、西疇，常見于石灰?guī)r山頂陽光充足的地方，以根和葉入藥，性辛、苦、微寒。具有行氣止痛、活血化瘀、祛風(fēng)除濕、麻醉鎮(zhèn)驚等功效［1］。早期曾有報(bào)道，九里香在臨床上可用于局部麻醉、抗生育作用、治療流行性乙型腦炎、破傷風(fēng)、急慢性腎炎等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，九里香具有抗生育和終止妊娠、抗菌、抗甲狀腺腫大、降血糖、麻醉鎮(zhèn)靜及增強(qiáng)免疫功能等作用［2］。相關(guān)研究表明，九里香在醋酸致痛小鼠扭體試驗(yàn) (Nakainur的方法)及熱板試驗(yàn) (Eddy的方法)中均表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用，說明其具有一定的外周鎮(zhèn)痛及中樞鎮(zhèn)痛作用［3］。本研究從電生理學(xué)的角度，觀察不同濃度四數(shù)九里香溶液對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位的影響，以進(jìn)一步探討九里香鎮(zhèn)痛作用的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑 任氏液 (NaC1 6.5g，KC1 0.14g，CaCl20.12g;NaHCO30.20g;NaH2PO40.01g加蒸餾水至1000 ml，所用試劑均為化學(xué)純，購自成都科龍化工試劑廠);四數(shù)九里香水提液:四數(shù)九里香購自廣西地道藥材鋪，取260g陰干四數(shù)九里香枝葉，粉碎，加任氏液梯度超聲浸泡法，過濾制成3.75L水提液，濃度為0.069g/ml原生藥濃度，取200ml用任氏液稀釋為 0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 BL－420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) (四川成都泰盟科技有限公司);神經(jīng)屏蔽盒 (四川成都泰盟科技有限公司);電子天平Model:ES6000－1(沈陽龍騰電子有限公司生產(chǎn))。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 中華大蟾蜍24只，雌雄兼用，體重80～100g，由川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為6組 (任氏液組，0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/ml四數(shù)九里香溶液組)，每組6只。

1.4 坐骨神經(jīng)標(biāo)本制備 將蟾蜍進(jìn)行稱重，搗毀腦和脊髓，分離坐骨神經(jīng)3～5cm，盡量將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈，神經(jīng)干脊柱端和足端用棉線結(jié)扎，置于任氏液中浸泡孵育10分鐘以穩(wěn)定其興奮性。

1.5 動(dòng)作電位引導(dǎo)并記錄 將孵育后的神經(jīng)干慢慢沿培養(yǎng)皿壁取出，瀝干其水分，搭到神經(jīng)屏蔽盒的電極上，測定動(dòng)作電位振幅和傳導(dǎo)速度。再將神經(jīng)干取出屏蔽盒，放入不同濃度四數(shù)九里香溶液中浸泡2分鐘，沿管壁輕輕取出，瀝干其水分并防止刮傷神經(jīng)。將該神經(jīng)干依照之前的位置搭在電極上，在位于刺激電極與引導(dǎo)電極的神經(jīng)干上分別放置浸濕藥液 (0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/ml四數(shù)九里香溶液)的小棉條，用BL－420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)每隔5分鐘檢測動(dòng)作電位相關(guān)值。動(dòng)作電位速度測定需要測量兩個(gè)電極之間距離。單個(gè)動(dòng)作電位及傳遞速度測定儀器設(shè)置值:方式，單刺激;延時(shí)，5.00ms;波寬，0.05ms;強(qiáng)度，1.00v;頻率，10KHz;采樣率，1.25ms/div。

1.6 數(shù)據(jù)處理 記錄各組給藥前與浸泡后坐骨神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位的振幅與傳導(dǎo)速度，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s描述，采用配對t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 四數(shù)九里香溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位振幅的影響 隨著藥物作用時(shí)間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的振幅逐漸變小，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。藥物濃度越大，動(dòng)作電位振幅的變化越大(見表1)。

表1 四數(shù)九里香溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位振幅的影響

表2 四數(shù)九里香溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的影響

2.2 四數(shù)九里香溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的影響 隨著藥物作用時(shí)間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的傳導(dǎo)速度逐漸變小，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。藥物濃度越大，動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的變化越大，神經(jīng)傳導(dǎo)速度的改變與神經(jīng)動(dòng)作電位振幅的改變基本同步 (見表2)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過離體實(shí)驗(yàn)方法，觀察了四數(shù)九里香水提液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位傳導(dǎo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四數(shù)九里香水提液對坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位的傳導(dǎo)具有明顯阻滯的作用，提示阻滯神經(jīng)動(dòng)作電位的傳導(dǎo)是四數(shù)九里香鎮(zhèn)痛的作用可能的機(jī)制之一。

有關(guān)四數(shù)九里香的化學(xué)成分，牙啟康等從四數(shù)九里香非水提物部分分離并鑒定出補(bǔ)骨脂素、槲皮素3－0－B－D－吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、正三十一烷、正三十四烷醇等化合物;陳家源等從四數(shù)九里香揮發(fā)油中分離出38個(gè)組分，確認(rèn)了其中的37種，主要成分為薄荷酮、異薄荷酮、檸檬烯和胡椒酮等［4］。

四數(shù)九里香的鎮(zhèn)痛藥理機(jī)制及現(xiàn)代中藥藥學(xué)開發(fā)探索，可提取揮發(fā)油有待進(jìn)一步研究。

［1］吳龍火、劉昭文、許瑞安．九里香葉的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究［J］．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(21):4436－4437．

［2］張宗禹、韋松、陳安蘭等．九里香糖蛋白成分終止孕兔妊娠及其機(jī)理［J］．中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1989，20(5):283－286．

［3］黃蓓，毛長智，庾志斌．四數(shù)九里香水提液抗炎及鎮(zhèn)痛作用研究［J］．中國民族民間醫(yī)藥，2011，20(14):32－33．

［4］陳家源，牙啟康，盧文杰，等．GC－MS分析四數(shù)九里香的揮發(fā)油成分［J］．華西藥學(xué)雜志，2009，24(6):671－672．