養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性及皮膚過敏性實驗研究※

李喜香劉效栓張小華禚 君豆金彥劉軍剛高小恒張 堅張芳麗馬 嵐鄭立娟吳 迪

養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性及皮膚過敏性實驗研究※

李喜香1劉效栓1張小華1禚 君1豆金彥1劉軍剛1高小恒1張 堅2張芳麗2馬 嵐2鄭立娟2吳 迪2

目的通過對養(yǎng)陰生肌膜的安全性試驗，為臨床安全用藥提供依據。方法將養(yǎng)陰生肌膜貼于家兔顎黏膜處接觸4h，觀察該膜對顎黏膜有無刺激性，并在光鏡下觀察其組織病理學變化；將養(yǎng)陰生肌散對豚鼠進行致敏和攻擊，觀察其對豚鼠有無皮膚過敏反應發(fā)生。結果養(yǎng)陰生肌膜對兔顎黏膜未引起刺激性反應，對豚鼠皮膚未產生過敏性反應。結論養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性及皮膚過敏性、安全性指標基本符合規(guī)定要求。

養(yǎng)陰生肌膜；黏膜刺激性；皮膚過敏性

養(yǎng)陰生肌膜是將甘肅省中醫(yī)院醫(yī)院制劑養(yǎng)陰生肌散（甘藥制字Z04000835）經劑型改革而得，主要用于治療口腔潰瘍[1-2]。養(yǎng)陰生肌膜為口腔內貼膜，因與口腔黏膜直接接觸，膜內的某些成分有可能會通過口腔黏膜吸收進入血液循環(huán)，為了解其安全性，我院進行了養(yǎng)陰生肌膜的黏膜刺激性及皮膚過敏性試驗。

1 實驗材料

1.1 動物日本大耳白兔，雌雄各半，體重2kg左右，購自蘭州生物制品研究所，實驗動物使用許可證號：SCXK（甘）2012-0001。豚鼠，雌性，體重200～300g，購自中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，實驗動物使用許可證號：SCXK（甘）2010-0001。

1.2 藥物及試劑養(yǎng)陰生肌膜，批號：20111224，由甘肅省中醫(yī)院提供。2,4-二硝基氯苯，批號：97-05-01，上海試劑廠。新潔爾滅消毒液，批號：100901A，山東利爾康消毒科技有限公司。甲醛溶液（分析純），批號：981110，西安化學試劑廠。氯化鈉注射液，批號：020605482，西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司。松香和石蠟，購自蘭州科邁公司。戊巴比妥鈉，批號：F20020915，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司。

1.3 儀器FA1604S型電子天平，上海天平儀器廠產品。

1.4 方法

1.4.1 黏膜刺激性試驗[1-6]取家兔4只，將左側顎黏膜作為空白膜陰性對照組，右側顎黏膜作為養(yǎng)陰生肌膜組。3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射將家兔麻醉，用0.2%新潔爾滅對家兔的口腔內、外進行消毒。將空白膜用蒸餾水浸濕后貼于家兔左側顎黏膜上，將養(yǎng)陰生肌膜用蒸餾水浸濕后貼于家兔右側顎黏膜上，保持2～4h。去掉貼膜，用棉簽蘸取少許生理鹽水清洗貼敷部位，觀察該部位有無充血、水腫等刺激現象，連續(xù)觀察24h。處死動物，剪取敷藥部位及其周邊少許未敷藥部位組織，置于4%甲醛溶液中固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察組織病理學變化。根據局部黏膜刺激性反應分級標準進行評分，然后再根據局部黏膜刺激性評價標準進行強度等級評價。

1.4.2 皮膚過敏性試驗[1-7]取豚鼠30只，隨機分成生理鹽水組、2,4-二硝基氯苯陽性對照組和養(yǎng)陰生肌膜組，每組10只。3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射將豚鼠麻醉，背部皮膚脫毛，脫毛后24h，選無皮損豚鼠進行試驗。取0.2ml生理鹽水滴在陰性對照組豚鼠右側脫毛區(qū)；取1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml滴在陽性對照組豚鼠右側脫毛區(qū)；將養(yǎng)陰生肌膜貼于豚鼠右側脫毛區(qū)，并用無刺激性的膠帶固定。各組持續(xù)致敏6h。分別于首次致敏后第7天和第14天，以同樣方法重復致敏一次。在末次致敏后14d，分別將生理鹽水0.2ml、0.1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml和養(yǎng)陰生肌膜貼（滴）在各組豚鼠左側脫毛區(qū)進行攻擊，6h后去掉受試藥物，即刻開始觀察接觸受試藥物的皮膚有無紅斑、水腫等皮膚過敏現象出現，并于0h、24h、48h連續(xù)進行觀察和記錄。根據皮膚過敏反應評分標準進行皮膚過敏性評分，然后再根據皮膚過敏性試驗致敏率分類表對受試藥物進行皮膚過敏率評定。

2 結果

與貼膜前比較，貼膜后家兔顎黏膜無明顯紅斑和水腫。與空白膜組比較，養(yǎng)陰生肌膜組家兔顎黏膜未出現明顯紅斑和水腫。結果見表1～3。

表1 局部黏膜刺激性反應分級標準

表2 局部黏膜刺激性評價標準

表3 養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性試驗

病理切片顯示，家兔1空白膜組和養(yǎng)陰生肌膜組黏膜上皮為角質的復層鱗狀上皮，固有層為致密的結締組織組成，其下黏膜下層為疏松結締組織，內含小唾液腺（見一團漿液性腺體，系主為黏液性腺體）、較大的血管、淋巴管、神經及脂肪組織，并見多量橫紋肌組織，以上各層組織均未見改變，形態(tài)如常，家兔1空白膜組與養(yǎng)陰生肌膜組之間未見差別。家兔2空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組；家兔3空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組；家兔4空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組病理切片情況與家兔1空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組相同（見圖1～4）。

圖1 家兔1與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖2 家兔2與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖3 家兔3與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖4 家兔4與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

生理鹽水組豚鼠均未出現皮膚過敏反應，致敏率為0%；2,4-二硝基氯苯組豚鼠皮膚均出現明顯的紅斑和水腫，隨著時間的推移，紅斑逐漸加深，而水腫則緩慢消退，表明該組豚鼠出現了明顯的皮膚過敏反應，致敏率為100%，反應強度為極度致敏性；養(yǎng)陰生肌膜組除9號豚鼠皮膚出現勉強可見的紅斑外，其余均未出現皮膚過敏反應，致敏率為10%。參照皮膚過敏性試驗致敏率分類表（表6），致敏率在0%～10%范圍內，致敏強度為無致敏性，因此可以認為養(yǎng)陰生肌膜對皮膚未出現過敏反應（結果見表4～7）。

表4 皮膚過敏反應評分標準

表5 皮膚過敏性試驗致敏率分類表(%)

表6 養(yǎng)陰生肌膜皮膚過敏反應強度評價

表7 養(yǎng)陰生肌膜皮膚過敏試驗(n,%)

3 討論

黏膜刺激性試驗的目的是觀察受試藥物一次或多次接觸黏膜后所產生的刺激性反應情況，考察黏膜在接觸受試藥物后是否出現充血、滲出、變性或壞死等局部反應，是藥物安全性評價的重要指標之一。經試驗，養(yǎng)陰生肌膜組對家兔顎黏膜未引起紅斑、水腫等刺激癥狀，表明養(yǎng)陰生肌膜對黏膜無刺激性。皮膚過敏試驗是一種對受試藥物產生免疫學傳遞的皮膚反應，主要觀察受試藥物多次接觸皮膚后，機體免疫系統(tǒng)在皮膚上的表現，即有無過敏癥狀、強度如何。皮膚過敏試驗是貼膜制劑安全性評價所必需的指標。經試驗，養(yǎng)陰生肌膜對豚鼠皮膚進行致敏和攻擊后，未出現紅斑、水腫等皮膚過敏癥狀，而陽性對照組2,4-二硝基氯苯則出現了強烈的皮膚過敏癥狀，表現為豚鼠背部與藥物接觸部位均出現不同程度的紅斑和水腫，說明養(yǎng)陰生肌膜對皮膚無過敏性。

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R965

A

1673-5846(2013)08-0034-03

1甘肅省中醫(yī)院藥學部，甘肅蘭州 730050

2蘭州大學基礎醫(yī)學院藥理學研究所，甘肅蘭州 730050

甘肅省重點中醫(yī)藥科研項目，編號：（GZK-2010-Z13）