凝膠劑中脂溶性茶多酚的含量測(cè)定

田永強(qiáng)，張 濤，陸 茜，Stephen Hsu，艾永循

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065； 2.江漢大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430056；

3.江漢大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，湖北 武漢 430056；4.Georgia Health Science University，Augusta GA US 30912-1126）

凝膠劑中脂溶性茶多酚的含量測(cè)定

田永強(qiáng)1，2，張 濤2*，陸 茜3，Stephen Hsu4，艾永循2

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065； 2.江漢大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430056；

3.江漢大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，湖北 武漢 430056；4.Georgia Health Science University，Augusta GA US 30912-1126）

目的：建立凝膠劑中脂溶性茶多酚的含量測(cè)定方法，為制定脂溶性茶多酚凝膠劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：以無(wú)水乙醇為提取溶劑，酒石酸亞鐵為顯色劑，采用比色法，在540 nm處測(cè)定含量。結(jié)果：脂溶性茶多酚在0～250 mg·（100 mL）-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9991），平均回收率為102.80%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.93%（n=9）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)單、精確、重復(fù)性好，可用于凝膠劑中脂溶性茶多酚的含量測(cè)定。

脂溶性茶多酚；凝膠劑；比色法；含量測(cè)定

茶多酚（Green tea polyphenols，GTPs），即水溶性茶多酚，是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)GTPs毒副作用極低［1］，具有抗氧化、抗癌、抗病毒、降血壓、對(duì)皮膚具有保護(hù)與治療作用等多種藥理作用［2-3］。

由于其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，GTPs表現(xiàn)出脂溶性差、透皮吸收與透膜能力弱、易被氧化導(dǎo)致產(chǎn)品不穩(wěn)定等弱點(diǎn)。為了克服GTPs上述弱點(diǎn)以進(jìn)一步擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，人們?cè)诒M量保持其活性的前提下，通過(guò)化學(xué)改性研制出GTPs的酯化物——脂溶性茶多酚（Lipo-soluble tea polyphenols，LTPs），目前主要用作食品抗氧化劑，作為治療性藥物應(yīng)用的報(bào)道較少［4-5］。

筆者在探索LTPs新的藥理作用的研究中，研制出LTPs凝膠劑，制劑中LTPs的含量測(cè)定少見有報(bào)道。為了給制定LTPs凝膠劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，筆者探索了測(cè)定凝膠劑中LTPs含量的比色法，獲得了較滿意的結(jié)果，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外-可見分光光度計(jì)（UV—2401PC型，日本島津）；電子天平（FA1004型，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；離心機(jī)（TDL—40B型，上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋渦混合器（XH—B型，江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）。

1.2 試藥

脂溶性茶多酚（LTPs，為茶多酚硬脂酸酯，余姚市惠德隆生物制品有限公司，批號(hào)20120425）；卡波姆934P（廊坊聚通化工有限公司，批號(hào)120217）；0.5%LTPs凝膠劑（江漢大學(xué)中醫(yī)藥研究所研制，批號(hào)：120615，120621，120625）；空白凝膠劑（除不加LTPs外，按凝膠劑制法制備，江漢大學(xué)中醫(yī)藥研究所制備，批號(hào)：120625）；硫酸亞鐵、酒石酸鉀鈉、三乙醇胺、無(wú)水乙醇等均為分析純；水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試液的制備

2.1.1 三乙醇胺水溶液（1+1） 精密量取三乙醇胺50 mL，置100 mL容量瓶中，加雙蒸水溶解并定容，即得。

2.1.2 酒石酸亞鐵溶液 取硫酸亞鐵1.0 g、酒石酸鉀鈉5.0 g，精密稱定，置1 000 mL容量瓶中，加雙蒸水溶解并定容，即得。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取LTPs于濃硫酸干燥器中干燥48 h，取250 mg，精密稱定，用適量無(wú)水乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，精密量取上述溶液0、2、4、6、8、10 mL分置于10 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，即得每100 mL含LTPs 0、50、100、150、200、250 mg的不同濃度的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取LTPs凝膠劑20 g，精密稱定，置于燒杯中，加適量無(wú)水乙醇，充分?jǐn)嚢?，取混合物于離心機(jī)3 600 r/min離心30 min，分取上清液，重復(fù)提取3次，合并上清液，過(guò)濾，濾液移入100 mL容量瓶，用無(wú)水乙醇定容，即得。

2.4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取對(duì)照品溶液［200 mg·（100 mL）-1］、凝膠劑供試品溶液（取凝膠劑40 g，按2.3項(xiàng)下方法制備）、空白凝膠劑供試品溶液（取空白凝膠劑40 g，按2.3項(xiàng)下方法制備）、無(wú)水乙醇各1 mL，分別置于25 mL比色管中，室溫下各加入三乙醇胺水溶液1 mL混勻、加入酒石酸亞鐵溶液5 mL混勻、加雙蒸水定容至25 mL［6］，依次編號(hào)為1～4號(hào)顯色液，在400～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，編號(hào)1、2的顯色液掃描結(jié)果見圖1，編號(hào)3、4的顯色液掃描結(jié)果見圖2。

圖1 編號(hào)1、2的顯色液可見光區(qū)掃描圖

圖2 編號(hào)3、4的顯色液可見光區(qū)掃描圖

由圖1、圖2可見，對(duì)照品溶液與凝膠劑供試品溶液二者的顯色液均在540 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而空白凝膠劑供試品溶液與無(wú)水乙醇二者的顯色液在該波長(zhǎng)處無(wú)吸收，對(duì)本法測(cè)定無(wú)干擾；故選擇540 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.5 測(cè)定方法

精密量取供試品溶液1 mL于25 mL比色管中，室溫下加入三乙醇胺水溶液1 mL混勻，加入酒石酸亞鐵溶液5 mL混勻，加雙蒸水定容至25 mL；以空白試劑溶液做參比，在540 nm波長(zhǎng)處用1 cm比色杯比色，測(cè)定吸光度［6］。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線

取2.2項(xiàng)下不同濃度的對(duì)照品溶液，按照2.5項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度。以濃度C［mg·（100 mL）-1］為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=0.0968X，線性系數(shù)R2=0.9997，LTPs在濃度0～250 mg·（100 mL）-1范圍內(nèi)，符合朗伯比爾定律，線性關(guān)系良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下濃度為250 mg·（100 mL）-1的對(duì)照品溶液，按照2.5項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算 LTPs相對(duì)百分含量，平均值為102.57%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.095%（n=6），重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下濃度為250 mg·（100 mL）-1的溶液，按2.5項(xiàng)下方法分別于0、0.5、1、1.5、2、2.5 h測(cè)定吸光度，顯色液吸光度在1.5 h內(nèi)變化較小，表明顯色液在1.5 h內(nèi)基本穩(wěn)定；1.5 h后隨著時(shí)間推移吸光度有所升高。

2.9 回收率試驗(yàn)

取LTPs 160，200，240 mg，精密稱定，分別用適量無(wú)水乙醇溶解，加入適量的空白凝膠劑中，使每份總重量為20 g，攪拌均勻，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以空白凝膠劑供試品溶液為參比，按2.5項(xiàng)下方法測(cè)定，每份樣品測(cè)定3次，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為102.80%，RSD為0.93%（n=9）。

2.10 樣品含量測(cè)定

取 0.5%LTPs凝膠劑（批號(hào)：120615，120621，120625）20 g，每批號(hào)取樣3份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以空白凝膠劑供試品溶液為參比，按2.5項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算凝膠劑中LTPs百分含量，結(jié)果見表1。

凝膠劑中脂溶性茶多酚含量（%）=

式中A為測(cè)得的吸光度值，W樣為被測(cè)凝膠劑的實(shí)際取樣量。

表1 凝膠劑中LTPs含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

目前市場(chǎng)上流通的LTPs是以GTPs為原料、分別采用氧?；蛱减；炔煌孽セ椒ǐ@得的產(chǎn)品，每種LTPs產(chǎn)品組分均較為復(fù)雜。本研究采用的LTPs為氧?；ㄉa(chǎn)的茶多酚硬脂酸酯，在沒(méi)有合適標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的情況下，采用原料藥為對(duì)照物質(zhì)，測(cè)定結(jié)果更能反映凝膠劑中LTPs的實(shí)際含量；本方法簡(jiǎn)單、精確、重復(fù)性好，可用于凝膠劑中LTPs的含量測(cè)定。

曾采用文獻(xiàn)［6］的方法與本文方法同時(shí)測(cè)定同一批號(hào)LTPs原料樣品，結(jié)果文獻(xiàn)方法測(cè)定含量的均值為45.75%，本文方法測(cè)定含量的均值為102.57%，相對(duì)本法而言，文獻(xiàn)方法含量測(cè)定結(jié)果偏低，其原因值得進(jìn)一步研究。

樣品含量測(cè)定中需溶出凝膠劑中LTPs，由于基質(zhì)卡波姆溶脹體積較大，制備樣品溶液時(shí)需要一定時(shí)間，但是隨著操作時(shí)間的延長(zhǎng)，待測(cè)定液的吸光度值有所增加，測(cè)得的LTPs含量會(huì)相應(yīng)增高，是LTPs中酯化基團(tuán)的水解導(dǎo)致還是存在其他原因，有待進(jìn)一步研究。

［1］ 劉冬英，傅穎，梅松，等.茶多酚的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)［J］.毒理學(xué)雜志，2009（1）：87-88.

［2］ 徐芳芳，朱蓓德，姜國(guó)偉，等.茶多酚提取方法與藥理作用研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2012，28（7）：1033-1035.

［3］ 單媛媛，楊銳.皮膚細(xì)胞凋亡及其在化妝品開發(fā)中的應(yīng)用［J］.寧波大學(xué)學(xué)報(bào)：理工版，2007，20（4）：463-467.

［4］ 盧聰聰，邵衛(wèi)梁，杭曉敏，等.兩種茶多酚化學(xué)改性制備的脂溶性茶多酚抗氧化性能研究［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12（3）：201-204.

［5］ 應(yīng)樂(lè)，張士康，王岳飛，等.茶多酚改性及其抗氧化性能研究進(jìn)展［J］.茶葉科學(xué)，2010，30（S1）：511-515.

［6］ 葉鹿鳴.脂溶性茶多酚含量測(cè)定方法的探討［J］.中國(guó)公共衛(wèi)生，2001，17（9）：836.

Determination of Content of Lipo Soluble Tea Polyphenols in Gel

TIAN Yong-qiang1，2，ZHANG Tao2，LU Qian3，Stephen Hsu4，AI Yong-xun2
（1.Hubei University of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430065，Hubei，China；2.School of Medicine，Jianghan University，Wuhan 430056，Hubei，China；3.School of Chemistry and Environmental Engineering，Jianghan University，Wuhan 430056，Hubei，China；4.Georgia Health Science University，Augusta GA US 30912-1126）

Objective：To establish the method of determining the content of lipo soluble tea polyphenols in gel for quality control standard.Methods：A colorimetric method was established for the determination of lipo soluble tea polyphenols in gel at 540 nm with ethanol as the extracting sol?vent and tartaric acid ferrous as the coloring reagent.Results：The linear relationship of lipo soluble tea polyphenols is good in the range of 0 to 250 mg·（100 mL）-1（R2=0.999 1）and the average recov?ery is 102.80%，the relative standard deviation（RSD）is 0.93%（n=9）.Conclusion：This method is simple，accurate，repeatability good and can be used for determining the content of lipo soluble tea polyphenols in gel.

lipo soluble tea polyphenols；gel；colorimetry；content determination

R927.2

：A

：1673-0143（2013）01-0093-03

（責(zé)任編輯：范建鳳）

2013－01－06

武漢市科技局江漢大學(xué)創(chuàng)新基地建設(shè)項(xiàng)目（201250499145-29）

田永強(qiáng)（1986—），男，碩士生，研究方向：中藥及天然產(chǎn)物的化學(xué)與藥理。

*通信作者：張 濤（1963—），男，教授，碩士，研究方向：中藥及天然產(chǎn)物的化學(xué)與藥理。E-mail：aa4633@163.com