胃黏膜活檢組織中幽門螺桿菌檢測方法的改進

陳瓊霞，李 艷，陳 瑩，高友晶，劉麗江*

（1.江漢大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室，湖北 武漢 430056；2.江大病理診斷所，湖北 武漢 430056）

胃黏膜活檢組織中幽門螺桿菌檢測方法的改進

陳瓊霞1，李 艷2，陳 瑩1，高友晶1，劉麗江2*

（1.江漢大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室，湖北 武漢 430056；2.江大病理診斷所，湖北 武漢 430056）

目的：探索可用于臨床的簡單易行的幽門螺桿菌染色方法。方法：采用改良的亞甲藍染色方法，通過對胃黏膜活檢組織的染色，明確幽門螺桿菌的感染。結(jié)果：亞甲藍染色可將幽門螺桿菌著色，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰且無背景干擾。結(jié)論：經(jīng)過改良的亞甲藍染色檢查HP的技術(shù)方法，可在臨床推廣應(yīng)用。

幽門螺桿菌；亞甲基藍染色；胃黏膜活檢

幽門螺桿菌（H.pylori，HP）是迄今為止人類發(fā)現(xiàn)的胃內(nèi)最重要的細菌。大量臨床資料提示，HP可增加胃癌發(fā)生的危險性，特別是與腸型胃癌以及胃的B細胞性淋巴瘤的發(fā)生有關(guān)。在十二指腸潰瘍、胃癌和慢性胃炎中HP的陽性率可能存在顯著差異。來自實驗研究的數(shù)據(jù)顯示，HP可誘發(fā)動物的胃癌形成，動物感染HP后，出現(xiàn)嚴重的活動性慢性胃炎、潰瘍及腸上皮化生等病變，并發(fā)現(xiàn)腺癌與腸上皮化生區(qū)密切相關(guān)［1］。因此，對于臨床胃鏡活檢樣本進行HP的檢測，不僅有助于觀察HP與胃疾病的關(guān)系，同時也是臨床治療以及根除HP感染的客觀指標，現(xiàn)已經(jīng)納入了中國慢性胃炎臨床治療指南［2］。

胃黏膜HP感染的診斷標準原則上要求可靠、簡單，以便于實施和推廣。在胃黏膜活檢中進行HP檢測是目前明確HP感染的金標準之一［2］。染色法是最常用的經(jīng)典的方法，主要有兩大類，即特殊染色法和免疫組化染色法，其中特殊染色法包括：硝酸銀染色、中性紅染色、革蘭氏染色、瑞氏染色以及姬姆薩染色等等［3］。

經(jīng)過多年的探索，筆者運用亞甲藍快速染色法鑒定胃黏膜活檢組織中的HP，其染色方法簡單、容易掌握，同時具有經(jīng)濟和快速的優(yōu)勢，適合推廣，經(jīng)過總結(jié)介紹如下。

1 亞甲藍快速染色法鑒定胃黏膜法檢組織中的HP

1.1 亞甲藍染色液的配制

試劑：硼酸0.5 g，亞甲藍1 g，蒸餾水100 mL。配制方法：①將硼酸加入蒸餾水中充分溶解，配制成0.5%的硼酸液備用；②將1 g亞甲藍加入0.5%的硼酸液中攪拌，靜置后再攪拌使之充分溶解，配制成1%的亞甲藍硼酸液備用。

1.2 染色步驟

胃鏡活檢標本經(jīng)常規(guī)制片后，脫蠟水化后進行HP染色。①將切片放入0.5%的硼酸液中媒染1 min（該步驟有助于后續(xù)亞甲藍的著色）；②取出切片直接放入1%亞甲藍硼酸染液中染色1 min；③流水沖洗（洗去粘附在玻片上多余的染液）；④蒸餾水洗；⑤自然干片后常規(guī)封片。上述染色過程應(yīng)在室溫下（20～24℃）進行。

1.3 觀察

感染的HP多位于胃黏膜表層細胞與黏液之間，在黏液層下方靠近黏膜細胞的表面容易找到。HP形態(tài)為短梭形、短S形（圖1、圖2）。經(jīng)過抗HP治療后的胃黏膜活檢組織，其HP的形態(tài)可發(fā)生變化，變?yōu)樾A球形，但是經(jīng)過仔細認真的觀察，仍舊可以找到殘存的具有典型形態(tài)的HP。

圖1 胃黏膜活檢組織，在黏膜上皮和黏液層之間可見幽門螺桿菌，呈短梭形及S形，HE染色（400×）

圖2 胃黏膜活檢組織，在黏膜上皮和黏液層之間可見大量幽門螺桿菌，形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，容易辨認（上述2張切片來自同一個病例），亞甲藍染色（400×）

2 討論

診斷幽門螺桿菌感染的方法有多種，可用于臨床的實驗室診斷方法包括：HP直接培養(yǎng)、尿素酶依賴性試驗（RUT，13C或14C-UBT）、血清學(xué)試驗（ELISA或免疫印跡試驗等）、特異性的PCR檢測以及形態(tài)學(xué)觀察等。由于幽門螺桿菌對生長環(huán)境要求高，對氧氣的需要比較特殊，HP直接培養(yǎng)法不適宜用于常規(guī)的臨床檢驗。尿素酶依賴性試驗，操作簡單，檢驗速度快，是確認幽門螺桿菌感染的常規(guī)檢驗方法之一，但該試驗不可避免地存在一定程度的假陽性和假陰性，尤其是尿素酶陰性的幽門螺桿菌感染時，該實驗就很難檢出。血清學(xué)檢查HP感染，由于不能直接定位，還存在著一定問題，也不是臨床應(yīng)用的主要方案。特異性的HP-PCR檢查，比血清學(xué)檢查具有更高的靈敏度和更好的特異性，但是對于技術(shù)條件和操作人員有比較高的要求，同樣也面臨著假陽性的問題，不易推廣應(yīng)用。形態(tài)學(xué)觀察檢測HP是最客觀簡便的方法之一，有經(jīng)驗的臨床病理醫(yī)師在一張制作良好的常規(guī)HE染色的切片上，就能判斷有無HP的存在。筆者應(yīng)用改良的亞甲藍染色，在胃鏡活檢樣本上對有無HP的感染做出判斷，技術(shù)方法非常簡單，操作簡單快捷，染色的試劑成本很低，而且可以提高常規(guī)HE染色的檢查敏感度。因此，經(jīng)過改良的亞甲藍快速染色檢查HP的技術(shù)方法，不失為可在臨床推廣應(yīng)用的良好的方法之一。

［1］ 陳清波，王洪波，徐明壺，等.慢性胃病伴腸上皮化生、胃癌與幽門螺桿菌感染的關(guān)系［J］.實用癌癥雜志，2010，25（2）：169-171.

［2］ 中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會.中國慢性胃炎共識意見（全國第二屆慢性胃炎共識會議2006年）［J］.胃腸病學(xué)，2006，11（11）：674-684.

［3］ 凌亞偉，崔英，陳英杰.姬姆薩染色改良法在胃幽門螺桿菌檢查中的應(yīng)用及其價值［J］.昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007（2）：125.

Improved Detecting Methods of Helicobacter Pylori in Gastric Mucosal Biopsy

CHEN Qiong-xia1，LI Yan2，CHEN Ying1，GAO You-jing1，LIU Li-jiang2
（1.School of Medicine，Jianghan University，Wuhan 430056，Hubei，China；2.Jiangda Institute of Pathology，Wuhan 430056，Hubei，China）

Objective：Expoles simple staining method for helicobacter pylori which can be used in clinic.Methods：Adopts improved methylene blue staining method，through the staining to gastric mucosal biopsy tissue，makes clear the infection of helicobacter pylori.Results：The methy?lene blue can stain the helicobacter pylori，the structure is clear without background interference. Conclusion：The improved methylene blue staining method for detecting helicobacter pylori can be used in clinical practice.

helicobacter pylori；methylene blue staining；gastric mucosal biopsy

R361.2-33

：A

：1673-0143（2013）01-0091-02

（責(zé)任編輯：范建鳳）

2012－12－24

陳瓊霞（1967—），女，實驗師，研究方向：臨床病理診斷技術(shù)。

*通信作者：劉麗江（1955—），女，教授，博士，研究方向：胃腸道腫瘤病理。E-mail：liulijiang@163.com