膠體金法快速篩查HIV抗體的應(yīng)用研究

李 雪 姚 勇 漆兆李 蔣 玲

（大英縣疾病預(yù)防控制中心，四川 大英 629300）

膠體金法快速篩查HIV抗體的應(yīng)用研究

李 雪 姚 勇 漆兆李 蔣 玲

（大英縣疾病預(yù)防控制中心，四川 大英 629300）

目的探討膠體金法快速篩查HIV抗體的可行性和適用性。方法用膠體金法快速篩查測(cè)試對(duì)象口腔黏膜滲出液中HIV抗體，與ELISA法檢測(cè)相同測(cè)試對(duì)象血樣HIV抗體作對(duì)照。結(jié)果本組研究對(duì)象150例，用膠體金法快速篩查其口腔黏膜滲出液樣本的HIV抗體，陰性127例（陰性率84.7%），陽(yáng)性23例（陽(yáng)性率15.3%）；再用ELISA法檢測(cè)研究對(duì)象的血漿標(biāo)本的HIV抗體，陰性129例（陰性率86.0%），陽(yáng)性21例（陽(yáng)性率14.0%），二者結(jié)果無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論用膠體金法檢測(cè)人類口腔黏膜滲出液樣本作為快速篩查HIV抗體是可行的，值得基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用。

ELISA法；膠體金法；HIV抗體；口腔黏膜滲出液

艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合癥，英文名稱Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS，是人類因?yàn)楦腥救祟惷庖呷毕莶《荆℉uman Immunodeficiency Virus，HIV）后導(dǎo)致免疫缺陷，并發(fā)一系列機(jī)會(huì)性感染及腫瘤，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡的綜合征。目前，艾滋病已成為嚴(yán)重威脅世界人民健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。抗HIV病毒抗體檢測(cè)、病毒培養(yǎng)、核酸檢測(cè)和抗原檢測(cè)是作為診斷手段使用的主要檢測(cè)方法[1]，采集測(cè)試對(duì)象的血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清血漿中HIV抗體是最常用的方法。長(zhǎng)期經(jīng)靜脈注射吸毒者因淺表靜脈廣泛堵塞、娛樂(lè)場(chǎng)所女性因怕痛常拒絕抽血、3歲以下的嬰幼兒不配合采血等諸多原因?qū)е虏杉簶?biāo)本相當(dāng)困難，給監(jiān)測(cè)工作帶來(lái)困難，甚至存在監(jiān)測(cè)盲區(qū)。選用唾液和尿液作為初篩檢測(cè)樣本已成為許多學(xué)者探索的課題。作者采用膠體金法檢測(cè)150例測(cè)試對(duì)象口腔黏膜HIV抗體，與ELISA法檢測(cè)血樣標(biāo)本HIV抗體作對(duì)照，兩種檢測(cè)方法的結(jié)果無(wú)顯著差異（P＞0.05），現(xiàn)分析報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

本組選擇我中心管理的HIV確認(rèn)病例20例，轄區(qū)內(nèi)娛樂(lè)場(chǎng)所100名女性工作人員和30名艾滋病自愿咨詢篩查者作為研究對(duì)象。

1.2 檢測(cè)試劑

見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)試劑一覽表

1.3 檢測(cè)儀器

見(jiàn)表2。

表2 使用檢測(cè)儀器一覽表

1.4 方法

采集150例研究對(duì)象口腔黏膜滲出液樣本，用膠體金法作HIV抗體檢測(cè)；對(duì)娛樂(lè)場(chǎng)所100名女性工作人員、30名艾滋病自愿咨詢篩查者再抽血用ELISA法檢測(cè)HIV抗體。對(duì)口腔黏膜滲出液HIV抗體陽(yáng)性者再用ELISA法檢測(cè)血樣；ELISA法檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性者按全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）規(guī)定復(fù)試和送上級(jí)艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

2 結(jié) 果

本組20例已確認(rèn)的艾滋病感染者用膠體金法檢測(cè)口腔黏膜滲出液均呈HIV抗體陽(yáng)性，對(duì)照線和陽(yáng)性檢測(cè)線均清晰明顯可見(jiàn)。娛樂(lè)場(chǎng)所100名女性工作人員和30名自愿咨詢檢測(cè)者用膠體金法檢測(cè)口腔黏膜滲出液檢測(cè)出HIV抗體陽(yáng)性3份，HIV抗體陰性127份；用ELISA法檢測(cè)HIV抗體陰性129份，HIV抗體陽(yáng)性1份；陽(yáng)性病例送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室做艾滋病確認(rèn)，確認(rèn)為HIV-1抗體陽(yáng)性。檢測(cè)結(jié)果及分析詳見(jiàn)表3、表4。

3 討 論

3.1 原理及方法

本試驗(yàn)是利用側(cè)向流動(dòng)免疫反應(yīng)的原理進(jìn)行的。試劑主要由檢測(cè)試紙條，樣本緩沖液組成。在硝酸纖維膜的檢測(cè)區(qū)包被了HIV-1 gp41和HIV-2 gp36重組抗原，在對(duì)照區(qū)包被了羊抗人IgG F（ab，）2片段多抗。檢測(cè)時(shí)，用口腔拭子擦拭受試者的上、下牙齦線，然后將口腔拭子放入約1000uL樣本緩沖液的試管里，在試管內(nèi)混合均勻，將口腔拭子內(nèi)的液體擠干后，扔掉拭子。將檢測(cè)試紙條檢測(cè)端垂直插入裝有樣本混合液的試管里，試紙上的淡紅色蛋白A-膠體金標(biāo)記物會(huì)溶解，樣本中的IgG同蛋白A/膠體金粒子結(jié)合在一起，形成“IgG-蛋白A-金”復(fù)合物，“IgG-蛋白A-金”復(fù)合物沿著試紙條向上方移動(dòng)，首先到達(dá)包被了HIV抗原的檢測(cè)區(qū)。如果樣本中含有HIV抗體，“IgG-蛋白A-金”復(fù)合物將同抗原結(jié)合，并在檢測(cè)線上滯留下來(lái)，形成一條淡紅色的線，這表示陽(yáng)性結(jié)果。線條顏色的深淺同樣本的抗體數(shù)量沒(méi)有比例關(guān)系。檢測(cè)區(qū)如果沒(méi)有帶顏色的線條表示樣本中不含HIV抗體，游離的“IgG-蛋白A-金”復(fù)合物繼續(xù)向紙條上方移動(dòng)，到達(dá)試紙的對(duì)照區(qū)。對(duì)照區(qū)包被了羊抗人IgGF（ab’）2片段，固定在試紙條的對(duì)照線上?！癐gG-蛋白A-金”復(fù)合物將同羊抗人IgGF（ab’）2片段結(jié)合在一起而富集在對(duì)照線上，形成一條淡紅色的線。對(duì)照線的出現(xiàn)證明試紙條檢測(cè)功能正常。無(wú)論樣本中是否含有HIV-1/2抗體，在有效實(shí)驗(yàn)中，試紙條的對(duì)照區(qū)都應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)淡紅至紫色的對(duì)照線。樣本繼續(xù)移動(dòng)，通過(guò)對(duì)照區(qū)進(jìn)入吸收區(qū)。吸收區(qū)的作用是吸附剩余的“IgG-蛋白A-金”復(fù)合物，使其在試紙條內(nèi)移動(dòng)，并消除本底的顏色[2]。

表3 ELISA法和膠體金法檢測(cè)150例樣本結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表4 膠體金法快速篩查HIV抗體結(jié)果分析表

3.2 優(yōu)勢(shì)及適用性

本品是基于免疫層析技術(shù)通過(guò)手工操作、肉眼讀取結(jié)果、20～45min即可定性得出檢測(cè)結(jié)果的快速診斷試劑。有學(xué)者研究表明：膠體金法采用層析免疫技術(shù)，標(biāo)記物不是酶而是膠體金，同時(shí)檢測(cè)標(biāo)本不需要儀器，因而影響檢測(cè)效果的條件比較少，其敏感性和特異性較高[3-4]。本組資料表明人類免疫缺陷病毒抗體口腔黏膜滲出液診斷試劑（膠體金法）敏感性和特異性分別為：91.3%、98.5%，且在歷次質(zhì)控考核中均未出現(xiàn)過(guò)假陰性結(jié)果。作者認(rèn)為：人類口腔黏膜滲出液檢測(cè)HIV抗體具有：不需要專業(yè)設(shè)備和固定場(chǎng)所；使用方便、快速，敏感性、特異性均高；人群普遍容易接受，既適合大規(guī)模普查，又適合特殊人群篩查，也適合基層醫(yī)院和基層實(shí)驗(yàn)室快速篩查，具有廣闊應(yīng)用前景；對(duì)初篩陽(yáng)性者仍然要取血樣按全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范做復(fù)試和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

[1] 蔣巖,汪寧,李敬云,等.全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)[S].2009:1.

[2] 金玉星.聊城市艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室HIV抗體檢測(cè)資料分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(8):129-130.

[3] 張帥清.膠體金快速檢測(cè)試劑篩查HIV抗體效果觀察[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(5):935,940.

[4] 劉萃紅,朱琳,宋一帆.HIV早期檢測(cè)的應(yīng)用研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2008,46(34):7-8.

The Study of Practical HIV-Antibody for Rapid Screening with Colloidal Gold Method

LI Xue, YAO Yong, QI Zhao-Li, JIANG Ling

(Daying Center for Disease Control and Prevention, Daying 629300, China)

ObjectivesThis article is aimed to study the adaptability and feasibility of HIV-antibody for rapid screening with colloidal gold method.MethodsCompared with the method of ELISA to the blood sample for HIV-antibody, we collected the sample from the exudation of the oral mucosa with colloidal gold method for rapid screening to the HIV-antibody.ResultsAll cases of 150, we had analyzed with the method of ELISA and colloidal gold for the HIV-antibody, which were negative in 127 cases (84.7%) and positive in 23 cases (15.3%) in rapid screening with colloidal gold method for the exudation of oral mucosa while were negative in 129 cases (86.0%) and positive in 21 cases (14.0%) in the method of ELISA for the blood samples, found there is no obvious difference (P＞0.05).ConclusionThe method of rapid screening HIV-antibody with colloidal gold for the exudation of oral mucosa is worth to popularize and is feasibility in the basic medical unit.

The method of ELISA；Colloidal gold method；HIV-antibody；Exudation of oral mucosa

R512.91

B

1671-8194（2013）18-0043-02