EGCG對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖抑制作用及對(duì)缺氧反應(yīng)的影響

周 薇戴奇剛鄧 鑫榮孿君王英桂

（1 廣東藥學(xué)院附屬第二醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510300；2 廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院放療科，廣東 廣州 510080；3 廣西中醫(yī)學(xué)院附屬瑞康醫(yī)院科教科，廣西 南寧 530011）

EGCG對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖抑制作用及對(duì)缺氧反應(yīng)的影響

周 薇1戴奇剛2鄧 鑫3榮孿君1王英桂1

（1 廣東藥學(xué)院附屬第二醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510300；2 廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院放療科，廣東 廣州 510080；3 廣西中醫(yī)學(xué)院附屬瑞康醫(yī)院科教科，廣西 南寧 530011）

目的探討表沒食子兒荼素沒食子酸酯(EGCG)對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響以及對(duì)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)缺氧反應(yīng)的相關(guān)作用機(jī)制及其作用。方法用不同濃度的EGCG處理SMMC-7721細(xì)胞，用倒置顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察并拍照記錄；將0，20，50，100，200，400μg/mL的EGCG分別作用于體外培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長期的SMMC-7721細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率；缺氧和EGCG雙因素共同處理SMMC-7721細(xì)胞，Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(即VEGF)蛋白表達(dá)方式；并建立相應(yīng)的裸鼠肝癌移植瘤模型，通過對(duì)其行EGCG試驗(yàn)性治療后，對(duì)移植瘤的生長情況進(jìn)行觀察，Western-blot方法檢測(cè)組織中HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)。結(jié)果SMMC-7721細(xì)胞隨著EGCG處理濃度的增高，細(xì)胞的貼壁能力減弱，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞體積縮小，核的顏色加深；MTT結(jié)果顯示EGCG呈時(shí)間、劑量依賴性抑制SMMC-7721細(xì)胞生長（P＜0.05）；SMMC-7721細(xì)胞在不同濃度EGCG作用下，缺氧培養(yǎng)12h，HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)呈劑量依賴性降低；在200μg/mLEGCG作用下，SMMC-7721細(xì)胞隨缺氧時(shí)間的延長，HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性下降；荷瘤裸鼠在行EGCG腹腔內(nèi)注射試驗(yàn)性治療后，其結(jié)果顯示，高劑量EGCG組裸鼠的腫瘤重量和體積與低劑量組以及對(duì)照組存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，低劑量組裸鼠的腫瘤重量和體積與對(duì)照組存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在本研究中，裸鼠移植瘤的標(biāo)本W(wǎng)estern-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，EGCG可呈劑量依賴性抑制HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)。結(jié)論EGCG能在體內(nèi)外抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖；EGCG能抑制腫瘤缺氧反應(yīng)及血管生長的作用；其機(jī)制可能為降低HIF-1α和VEGF的表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞、肝癌組織的生長及血管生成。

表沒食子兒荼素沒食子酸酯；SMMC-7721細(xì)胞；裸鼠；移植瘤；缺氧誘導(dǎo)因子-1α；血管內(nèi)皮生長因子

茶葉中含有大量的茶多酚類、黃酮類以及黃烷醇等酚類化合物，在這些酚類化合物中，黃烷醇（俗稱兒茶素）的含量最大。在綠茶中，兒茶素的種類主要有表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表沒食子兒荼素沒食子酸酯（EGCG）等，在這些兒茶素中，EGCG的含量高達(dá)80%左右。隨著醫(yī)療事業(yè)的不斷發(fā)展以及人們對(duì)于兒茶素研究的不斷深入，大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體外實(shí)驗(yàn)以及流行病學(xué)的研究成果表明，兒茶素具有抗腫瘤、抗突變、抗病毒、抗炎、清除自由基、抗氧化等藥理效應(yīng)以及生物學(xué)活性，在兒茶素中，發(fā)揮上述效應(yīng)的主要有效成分為EGCG。此外，還有研究結(jié)果表明，EGCG可以通過對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長周期進(jìn)行阻滯，從而達(dá)到對(duì)其生長進(jìn)行抑制的作用，同時(shí)，它還可以對(duì)蛋白酪氨酸激酶的活性進(jìn)行抑制，以此來達(dá)到防止部分酪氨酸蛋白磷酸化，對(duì)細(xì)胞的生長進(jìn)行抑制。尿激酶作為腫瘤生長過程中所需的關(guān)鍵酶，腫瘤細(xì)胞要想進(jìn)行轉(zhuǎn)移、侵襲活動(dòng)就必須借助于尿激酶等蛋白水解酶的相關(guān)作用。EGCG可以通過與尿激酶進(jìn)行結(jié)合，來對(duì)其與底物之間的結(jié)合進(jìn)行干擾，最終達(dá)到抑制尿激酶活性的目的。EGCG還可以通過對(duì)體內(nèi)某些與癌變有關(guān)的酶，例如超氧化物岐化酶（SOD）、鳥氨酸脫羧酶（ODC）等的活性進(jìn)行抑制，阻止癌基因的表達(dá)。

為探討表沒食子兒荼素沒食子酸酯（EGCG）對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響以及EGCG對(duì)腫瘤細(xì)胞缺氧反應(yīng)的作用及作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721購自武漢大學(xué)生物保藏中心，用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基（含青霉素100μg/mL、鏈霉素100μg/ mL）在37℃、飽和濕度和5%二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。選取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)

4周齡BALB/C裸鼠，21只，體質(zhì)量14～16g，購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證明編號(hào)：0066310，SPF級(jí)屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)。

1.3 藥物和試劑

表沒食子兒茶素沒食子酸脂（EGCG，美國Sigma公司，純度95%）將其溶于PBS中，過濾除菌后于4℃保存?zhèn)溆?。噻唑藍(lán) （MTT）、二甲基亞砜（DMSO）均購自Sigma公司；酶標(biāo)儀（Metertech Inc）；缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）抗體購自Santa Cruz公司。

1.4 形態(tài)學(xué)觀察

取對(duì)數(shù)生長期SMMC-7721細(xì)胞按每孔2×103個(gè)細(xì)胞接種于24孔板內(nèi)，加入不同劑量的EGCG，使各孔終濃度分別為0，20，50，100，200，400μg/mL，培養(yǎng)48h后倒置相差顯微鏡拍照。

1.5 SMMC-7721細(xì)胞培養(yǎng)、干預(yù)及測(cè)細(xì)胞生長抑制率

將SMMC-7721細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)消化、計(jì)數(shù)、傳代。將對(duì)數(shù)生長期SMMC-7721細(xì)胞制成5×104/mL細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入100μL，37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。觀察組分別加入終質(zhì)量濃度為0，20，50，100，200，400μg/mL的EGCG（同時(shí)用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋），每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，每孔加100μL。設(shè)不加EGCG的細(xì)胞為對(duì)照組，并設(shè)只加培養(yǎng)液不接種細(xì)胞的空白調(diào)零孔。細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72h。每孔加 MTT（5mg/mL）20μL，培養(yǎng)4h，吸棄培養(yǎng)液，每孔加DMSO150μL。充分振蕩10min，于酶標(biāo)儀上檢測(cè)570nm處吸光度值（A值），以空白對(duì)照孔調(diào)零，求平均值。細(xì)胞生長抑制率（%）=（1-觀察組A值/對(duì)照組A值）×100%。

1.6 EGCG與缺氧雙因素處理SMMC-7721細(xì)胞及Western-blot法檢測(cè)HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)

取對(duì)數(shù)生長期的SMMC-7721細(xì)胞，將不同培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液的EGCG終濃度調(diào)節(jié)為20，50，100，200，400μg/mL，缺氧條件下培養(yǎng)12h后終止培養(yǎng)；取對(duì)數(shù)生長期的SMMC-7721細(xì)胞，培養(yǎng)液中EGCG濃度為100μg/mL，分別缺氧處理3h，6h，12h，24h，48h后終止培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中細(xì)胞消化后，TBS/KCL Buffer（pH7.4）重新懸浮后4000rpm離心30sec，棄去上清，加入10mmol/L的Hepes（MgCl21.5 mmol/L、KCL10 mmol/L、DTT1mmol/L）100μL懸浮后冰上放置15min，加入10%Triton x-1004μL，充分振蕩后4℃下13000rpm離心lmin，抽提上清為胞漿蛋白；沉渣加入20mmol/L的Hepes（MgCl2 1.5mmol/L、NaCl 0.42mmol/L、DTT 1mmol/L、甘油25%、EDTA 0.2mmol/L）50μL后，冰上放置30min，4℃下13000rpm離心10min，抽提上清為核蛋白?？捡R斯亮蘭蛋白定量。10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后，380v電轉(zhuǎn)移30min，蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶粉封閉過夜，去離子水漂洗硝酸纖維素濾膜，加入一抗，37℃孵育2h，PBS漂洗，在封閉液中稀釋堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗，37℃孵育1h，PBS漂洗3次。濾膜放在新鮮配制的NBT/BCIP底物溶液中顯色20min。

1.7 建立動(dòng)物模型及Western-blot法檢測(cè)HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)

實(shí)驗(yàn)裸鼠共21只，用無菌PBS調(diào)整SMMC-7721細(xì)胞濃度為1.5×l07個(gè)/mL，在裸鼠背部皮下接種SMMC-7721細(xì)胞懸液0.2mL，用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤最長徑（L）和最短徑（W），按公式V=L×W2×0.52計(jì)算瘤體積。待腫瘤體積達(dá)100mm3左右時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為3組，每組7只。分別為生理鹽水組即A組，EGCG低劑量組（10mg/kg）即B組，EGCG高劑量組（50mg/kg）即C組。隔日腹腔注射給藥，0.1mL/10g體質(zhì)量，連續(xù)給藥10次，給藥期間隔日測(cè)量鼠體質(zhì)量及移植瘤體積。末次給藥48h后用頸椎脫臼法處死裸鼠，切取移植瘤，記錄瘤重。于-80℃冰箱中稱取移植瘤組織0.2g，以預(yù)冷的PBS洗滌3次并用眼科剪將組織剪碎于EP管中，將組織轉(zhuǎn)入勻漿器，再加入組織裂解液于4℃研磨，裂解30min，離心，吸出上清液，考馬斯亮蘭蛋白定量。10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后，380v電轉(zhuǎn)移30min，蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶粉封閉過夜，去離子水漂洗硝酸纖維素濾膜，加入一抗，37℃孵育2h，PBS漂洗，在封閉液中稀釋堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗，37℃孵育1h，PBS漂洗3次。濾膜放在新鮮配制的NBT/BCIP底物溶液中顯色20min。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS12.0軟件對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，計(jì)數(shù)資料的對(duì)比應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，而計(jì)量資料的對(duì)比應(yīng)用t檢驗(yàn)，P＜0.05說明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 倒置顯微鏡觀察不同濃度的EGCG處理SMMC-7721細(xì)胞的形態(tài)變化

20，50，100，200，400μg/mL，在對(duì)SMMC-7721細(xì)胞采用不同濃度的EGCG進(jìn)行處理時(shí)，隨著其處理濃度的不斷提高，肝癌腫瘤細(xì)胞的貼壁能力減弱，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞核的顏色也在逐漸加深，其折光性也在不斷增強(qiáng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的不斷增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞的脫落情況也就越明顯，并能見到許多細(xì)胞碎片的產(chǎn)生。而對(duì)照組小鼠的肝癌細(xì)胞貼壁生長良好，基本上沒有脫落的情況出現(xiàn)，相鄰細(xì)胞之間生長致密。

2.2 MTT法測(cè)不同濃度EGCG處理的SMMC-7721細(xì)胞的生長抑制率：見表1。

表1 不同濃度的EGCG對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長抑制的效果(n=3，χ—±s)

2.3 EGCG與缺氧雙因素處理SMMC-7721細(xì)胞及Western-blot法檢測(cè)HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)

SMMC-7721細(xì)胞在不同濃度EGCG （400、200、100、50、20μg/mL）的處理下，缺氧培養(yǎng)12h后，HIF-1α的蛋白灰度值分別為（9.23±1.05）、（11.56±1.33）、（15.42±1.24）、（17.64± 1.41）、（20.75±1.56），對(duì)照組灰度值為（ 23.17±1.82），400、200、100、50μg/mL與對(duì)照組相比，差異有顯著性（P＜0.01）；VEGF的蛋白灰度值分別（11.29±1.36）、（13.56±1.74）、（14.86 ±1.66）、（16.47±1.86）、（21.42±1.70），對(duì)照組灰度值為（24.09±1.53），400、200、100、50、20μg/mL與對(duì)照組相比，差異有顯著性（P＜0.01）。Western Blot分析灰度掃描顯示：隨著EGCG濃度的不斷提高，VEGF以及HIF-1α的蛋白表達(dá)受到移植的程度也就表現(xiàn)得更加明顯，且表現(xiàn)出較強(qiáng)的劑量依賴性。這就說明EGCG可以對(duì)缺氧反應(yīng)中的HIF-1-VEGF通路的作用進(jìn)行有效地抑制。

在100μg/mLEGCG作用下，SMMC-7721細(xì)胞經(jīng)過不同時(shí)間的缺氧刺激（3h，6h，12h，24h，48h），HIF-1α的蛋白灰度值分別為（12.29±1.36）、（16.08±1.74）、（23.07±3.01）、（27.66± 2.34）、（34.85±1.96），對(duì)照組灰度值為（43.08±3.02），400、200、100、50、20μg/mL與對(duì)照組相比，差異有顯著性（P＜0.01）；VEGF的蛋白灰度值分別（10.54±1.02）、（19.96±1.85）、（30.14± 2.07）、（32.79±2.36）、（41.36±2.06），對(duì)照組灰度值為（44.17± 3.06），400、200、100、50、20μg/mL與對(duì)照組相比，差異有顯著性（P＜0.01）。Western Blot分析灰度掃描顯示：HIF-1α蛋白表達(dá)、VEGF的蛋白水平均隨EGCG作用時(shí)間延長不斷降低，時(shí)間依賴性明顯。

2.4 EGCG對(duì)裸鼠移植腫癌的生長抑制作用及對(duì)HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響

在完成肝癌裸鼠模型的建立后，通過對(duì)其腹腔給予一定量的EGCG溶液注射，其結(jié)果表明，隨著時(shí)間的推移，對(duì)照組裸鼠體內(nèi)的腫瘤體積出現(xiàn)了明顯增加的趨勢(shì)，而經(jīng)過EGCG治療的高劑量以及低劑量實(shí)驗(yàn)組的小鼠，其體內(nèi)的腫瘤生長情況得到了明顯的抑制，且隨著EGCG劑量的不斷增加，腫瘤生長受到抑制的情況也變得更加明顯。實(shí)驗(yàn)完成后，高劑量組小鼠的腫瘤重量以及體積與低劑量組、對(duì)照組相比，存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），低劑量組的腫瘤體積和重量于對(duì)照組之間存在差異（0.01＜P＜0.05）（圖1）。利用頸椎脫臼法來將裸鼠處死，解剖后并未發(fā)現(xiàn)其腹腔以及肺部有腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤組織的病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，高劑量組中，3例存在壞死灶，而低劑量組中只見到1例，對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)腫瘤出現(xiàn)壞死的情況。分別抽提各組裸鼠移植瘤標(biāo)本的胞漿、胞核蛋白后，高劑量（50mg/ kg）組、低劑量（10mg/kg）組 HIF-1α的蛋白灰度值分別為（10.03 ±1.01）、（13.76±1.85），對(duì)照組灰度值為（19.54±1.81），高劑量（50mg/kg）組與對(duì)照組相比，差異有顯著性（P＜0.01）；高劑量（50mg/kg）組、低劑量（10mg/kg）組VEGF的蛋白灰度值分別（16.33±1.72）、（23.04±1.35），對(duì)照組灰度值為（31.88± 2.01），高劑量（50mg/kg）組、低劑量（10mg/kg）組與對(duì)照組相比，差異均有顯著性（P＜0.01）。Western Blot分析結(jié)果顯示：在體內(nèi)EGCG同樣具有抑制HIF-1-VEGF的作用，它還可以通過對(duì)缺氧環(huán)境下腫瘤新生血管的發(fā)生以及發(fā)展進(jìn)行抑制，以此來導(dǎo)致腫瘤內(nèi)部區(qū)域出現(xiàn)大面積的壞死區(qū)域。

圖1 EGCG對(duì)裸鼠種植瘤重量增加的抑制作用

3 討 論

隨著醫(yī)療事業(yè)的不斷發(fā)展以及人們對(duì)于兒茶素研究的不斷深入，大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體外實(shí)驗(yàn)以及流行病學(xué)的研究成果表明，兒茶素具有抗腫瘤、抗突變、抗病毒、抗炎、清除自由基、抗氧化等藥理效應(yīng)以及生物學(xué)活性，在兒茶素中，發(fā)揮上述效應(yīng)的主要有效成分為EGCG。

通過形態(tài)學(xué)觀察和MTT實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明EGCG能夠?qū)Ω伟㏒MMC-7721細(xì)胞的生長表現(xiàn)出時(shí)間以及劑量依賴性抑制。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過對(duì)裸鼠的腹腔給予一定量的EGCG溶液注射，可以對(duì)種植瘤的生長進(jìn)行有效地抑制。在本研究中，對(duì)照組、低劑量組（10mg/kg）以及高劑量組（50mg/kg）裸鼠的腫瘤重量分別為（2.43±0.3）、（1.56±0.27）、（1.12±0.08）mg，其體積分別為（3016±627.1）、（1997.52±352）、（1416.17±98.44）mm3，高劑量組的抑制效果明顯優(yōu)于其它兩組，他們之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P＜0.01），且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。利用EGCG來對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的增殖進(jìn)行抑制時(shí)，其抑制機(jī)制非常復(fù)雜，出現(xiàn)池中情況的主要原因可能與調(diào)節(jié)致癌酶活性、誘導(dǎo)凋亡以及阻滯細(xì)胞周期等因素有著十分密切的關(guān)系。

目前的研究結(jié)果表明EGCG抑制腫瘤細(xì)胞生長與以下幾點(diǎn)機(jī)制相關(guān)：①EGCG可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長周期，使腫瘤細(xì)胞停留在某一期。文獻(xiàn)報(bào)道，EGCG可PC-9細(xì)胞和上皮性癌細(xì)胞A43l的生長分別停滯在G2/M期和G0/G1期，且阻滯細(xì)胞的數(shù)量和EGCG的用量濃度成正相劑量關(guān)系；當(dāng)腫瘤細(xì)胞生長阻滯在G1期達(dá)到某一程度和時(shí)間，仍不能解除阻滯，導(dǎo)致細(xì)胞無法進(jìn)入S期和M/G2期時(shí)，細(xì)胞無法將正常分化而死亡[4]。②EGCG同時(shí)可以引起腫瘤細(xì)胞中bcl-2蛋白表達(dá)水平下調(diào)，并呈時(shí)間依賴性關(guān)系。Bcl-2是一種最常見的凋亡抑制基因，其過度表達(dá)可抑制細(xì)胞的凋亡而延長其生存期；EGCG可抑制bcl-2蛋白表達(dá)，最終通過助推腫瘤細(xì)胞的快速凋亡來實(shí)現(xiàn)治療的目標(biāo)[5]。③在腫瘤生長過程中，尿激酶作為其中的關(guān)鍵酶，腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲必須借助于尿激酶等蛋白水解酶的協(xié)助方可完成，通過對(duì)尿激酶的活性進(jìn)行抑制，可以降低小鼠體內(nèi)的荷瘤大小，甚至是將其完全清除。EGCG可以通過與尿激酶進(jìn)行結(jié)合，來對(duì)其與底物之間的結(jié)合進(jìn)行干擾，最終達(dá)到抑制尿激酶活性的目的。EGCG還可以通過對(duì)體內(nèi)某些與癌變有關(guān)的酶，例如超氧化物岐化酶（SOD）、鳥氨酸脫羧酶（ODC）等的活性進(jìn)行抑制，阻止癌基因的表達(dá)。

通過對(duì)EGCG作用下肝癌細(xì)胞的VEGF以及HIF-1α進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，在體內(nèi)試驗(yàn)以及細(xì)胞水平的檢測(cè)過程中，EGCG均可對(duì)VEGF以及HIF-1α的表達(dá)進(jìn)行有效地抑制。并且劑量和時(shí)間依賴關(guān)系明確。

腫瘤在生長過程中，血管的失控以及持續(xù)增長是一種十分普遍的現(xiàn)象，VEGF是其主要的生長誘導(dǎo)因子。而HIF-1α則是腫瘤在缺氧條件下所形成的核轉(zhuǎn)錄因子，它可以對(duì)VEGF等多種靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，它在腫瘤血管的生長過程中有著核心調(diào)控的作用。新腫瘤血管在形成的過程中對(duì)VEGF的表達(dá)具有一定的依賴性，在缺氧環(huán)境下，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的重要途徑就是VEGF以及HIF-1α因子的結(jié)合誘導(dǎo)。Duffy等[8]在其報(bào)道中指出，缺氧環(huán)境下，VEGF信號(hào)在調(diào)節(jié)、傳輸?shù)倪^程中，HIF-1具有中樞紐帶作用，它不僅可以使VEGF mRNA變得更加穩(wěn)定，而且還可以在一定程度上強(qiáng)化VEGF在轉(zhuǎn)錄過程中的活性。

綜上所述，EGCG具有抑制肝細(xì)胞肝癌中腫瘤的缺氧反應(yīng)、增殖以及血管的生長等作用，其機(jī)制可能與降低HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)相關(guān)。EGCG作為肝癌的化學(xué)治療和預(yù)防藥物前景樂觀。

[1] Brown MD.Green tea (Camellia sinensis) extract and its possible role in the prevention of cancer[J].Altern MedRev,1999,4(5):360-370.

[2] Fujiki H,Suganuma M,Mai K,et al.Green tea:cancer preventive beverage and/or drug[J]. Cancer Lett,2002,188(1-2):9-13.

[3] Saha A,Kuzuhara T,Echigo N,et al New role of (-)-epicatechin in enhancing the induction of growth inhibition and apoptosis in human lung cancer cells by curcumin.[J].Cancer Prev Res (Phila),2010,3(8):953-962.

[4] Yang H,Landis-Piwowar K,Chan TH,et al Green tea polyphenols as proteasome inhibitors: implication in chemoprevention[J].Curr Cancer Drug Targets,2011,11(3):296-306.

[5] Singh M,Singh R,Bhui K,et al.Tea polyphenols induce apoptosis through mitochondrial pathway and by inhibiting nuclear factorkappaB and Akt activation in human cervical cancer cells[J]. Oncol Res,2011,19(6):245-257.

[6] Ho YC,Yang SF,Peng CY,et al Epigallocatechin-3-gallate inhibits the invasion of human oral cancer cells and decreases the productions of matrix metalloproteinases and urokinaseplasminogen activator[J].J Oral Pathol Med,2007,36(10):588-593.

[7] Roskoski R Jr.Vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling in tumor progression[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2007, 62(3):179-213.

[8] Duffy JP,Eibl G,Reber HA,et al Influence of hypoxia and neoangiogenesis on the growth of pancreatic cancer[J].Mol Cancer,2003,2(2):12.

R735.7

B

1671-8194（2013）15-0092-04

廣西壯族自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳青年基金資助課題（桂科青0832056）