乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗體的研究

鄒 莉（湖北省谷城縣人民醫(yī)院檢驗科 441700）

乙型肝炎（簡稱乙肝）是我國的常見病、多發(fā)病，急性感染后還可發(fā)展為慢性，甚至轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不?、肝癌，危害十分嚴重。國?nèi)外學(xué)者近年來發(fā)現(xiàn)乙肝病毒（HBV）感染存在各種自身免疫現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為血清中檢測出多種自身抗體，主要包括血清抗核抗體（ANA）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）等［1－2］。自身免疫在病毒性肝炎發(fā)病機制中的作用越來越受到人們的重視，由此表明病毒感染可能與許多自身免疫性疾病的發(fā)生有十分密切的關(guān)聯(lián)［3］。為進一步了解自身抗體在乙肝中的檢出率及在病情轉(zhuǎn)歸中的作用，本文檢測了376例慢性乙肝（CHB）、乙肝后肝硬化（LC）、肝癌（HCC）患者血清中的ANA水平，并進一步分析其特征，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年4月至2012年4月來本院就診的門診及住院HBV感染者共376例，分為3組：（1）CHB組276例，其中男214例，女62例，平均年齡（37.5±12.4）歲；（2）LC組52例，其中男37例，女15例，平均年齡（50.0±9.5）歲；（3）HCC組48例，其中男40例，女8例，平均年齡（57.90±12.35）歲。乙肝和肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，HCC診斷主要根據(jù)甲胎蛋白（AFP）陽性和影像學(xué)檢查有肝占位性病變?yōu)樵\斷標(biāo)準(zhǔn)。健康對照組為本院健康體檢者66例，其中男38例，女28例，平均年齡（34±8）歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)本 采集空腹靜脈血，分離血清后待測。

1.2.2 HBV血清標(biāo)志物檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清 HBV標(biāo)志物，HBV表面抗原（HBsAg）、HBV表面抗體（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗體（抗－HBe）、HBV核心抗體（抗－HBc），試劑盒為北京金豪制藥有限公司產(chǎn)品，嚴格按照說明書操作。

1.2.3 ANA測定 采用ELISA檢測ANA，待測血清用稀釋液1/10、1/100、1/320、1/1 000稀釋，血清稀釋大于1/100為有臨床意義，即為陽性。試劑購于德國歐蒙公司，操作及結(jié)果判斷嚴格按說明書執(zhí)行。

1.2.4 ANA譜的檢測 ANA譜檢測試劑盒購于德國歐蒙公司，采用印跡法檢測如下7種抗原的抗體：抗核糖核酸蛋白抗體（抗nRNP/Sm）、Sm抗原、抗干燥綜合征抗體（抗SS－A）、抗SS－B、Jo－1抗原、Sol－70抗原、抗雙鏈DNA抗體（抗ds－DNA）。1.2.5 生化指標(biāo)檢測及HBV－DNA定量測定 全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）等；HBV－DNA定量采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測，檢測范圍1.0×10～5.0×10copy/mL。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行資料分析，各組間陽性率比較采用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 376例HBV感染者血清ANA檢測結(jié)果

2.1.1 ANA檢測結(jié)果 376例HBV患者中ANA陽性者99例，占總?cè)藬?shù)26.3%，其中CHB組58例，占21.0%（58/276），LC組20例，占38.5%（20/52），HCC組21例，占43.7%（21/48）。66例健康對照組ANA陽性2例，占3.0%（2/66）。LC組和HCC組ANA陽性率顯著高于CHB組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；3組ANA陽性率均高于健康對照組；LC組與HCC組ANA陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.1.2 其他自身抗體檢測結(jié)果 在對本研究HBV患者的7種自身抗體分析中發(fā)現(xiàn)，有4種抗體的陽性率高達10.0%以上，其中抗nRNP抗體陽性率11.9%、抗SS－A抗體23.9%、抗SS－B抗體10.1%、抗ds－DNA 14.9%。

2.2 ANA陽性滴度分布情況 見表1。由表1可見，HBV感染者 ANA 以低滴度（1/100）為主，CHB、LC、HCC組的ANA滴度1/100組均高于滴度大于或等于1/320組ANA數(shù)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3 各組ANA滴度與ALT、AST、HBV－DNA比較 見表2。CHB組ANA滴度1/100組和大于或等于1/320組的ALT及AST水平增高不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對3組HBV－DNA定量分析發(fā)現(xiàn)，99例ANA陽性的HBV患者中有72例檢測出 HBV－DNA，陽性率為72.7%；277例ANA陰性的HBV患者中有111例檢測出HBV－DNA，陽性率為40.0%。ANA陰性組和陽性組HBV－DNA檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝6.23，P＜0.05），但3組患者 ANA滴度1/100組和大于或等于1/320組HBV－DNA含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 3組ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA結(jié)果±s）

表2 3組ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA結(jié)果±s）

組別 ANA滴度 ALT（U/L）AST（U/L）HBV－DNA（copy/mL）CHB 1/100 114.2±78.6 86.2±64.3 5.73±1.42≥1/320 154.6±84.4 115.2±72.5 5.94±1.40 LC 1/100 53.3±35.3 76.2±41.6 5.64±1.25≥1/320 65.8±31.7 63.5±37.2 5.71±1.34 HCC 1/100 52.6±37.4 60.8±39.2 5.33±1.36≥1/320 61.6±42.9 64.1±41.2 6.21±1.13

3 討 論

在我國HBV感染是肝炎中感染率最高的一種疾病，據(jù)不完全統(tǒng)計HBV攜帶者占15%～20%，它所導(dǎo)致的慢性肝炎往往會轉(zhuǎn)化為肝硬化、肝癌。目前有研究認為，乙肝患者的肝細胞病變并非是HBV直接對肝細胞的破壞，而是人體對HBV的免疫應(yīng)答所引起的免疫損傷造成肝組織的炎性反應(yīng)壞死，這種免疫應(yīng)答包括自身免疫反應(yīng)。文獻報道及本研究均證實，在HBV感染者血清中檢測出多種自身抗體，包括ANA、抗nRNP/Sm、AMA、SMA、抗肝特異性脂蛋白抗體等，但最常見的自身抗體是器官非特異性的ANA［4－7］。隨著肝炎的病理改變趨向慢性化和惡性化，多種自身抗體的陽性率和水平都有提高的趨勢。因此，自身免疫在乙肝發(fā)病機制、病情發(fā)展及癌變中的作用越來越受到人們的重視。

本研究選取了376例CHB、LC、HCC患者和66例健康對照者血清，用ELISA對其ANA進行了檢測及分析，CHB、LC、HCC患者ANA陽性檢出率分別為26.3%（58/276）、38.5%（20/52）、43.7%（21/48），均高于健康對照組3.0%（2/66）。研究結(jié)果表明，LC、HCC組ANA陽性率顯著高于CHB組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；LC與HCC組陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

本實驗HCC患者的ANA檢出率與以往報道的HCC中ANA檢出率低有所不同［4］，其原因可能是：（1）檢測自身抗體實驗方法、試劑有所不同，其實驗的靈敏度、特異性會有差別；（2）選取的檢測人群數(shù)量有一定的差異，可能也會對結(jié)果產(chǎn)生一定的偏差。但與文獻［5，8］報道的ANA陽性率結(jié)果基本相符。有研究認為，抗SS－A更易在自身免疫性肝臟疾病中出現(xiàn)［9］。本研究中抗SS－A陽性率僅次于ANA，為23.9%，表明抗SS－A可能是機體受到HBV感染而產(chǎn)生的特異性自身抗體。

本研究中HBV感染者ANA滴度以低滴度（1/100）為主，高滴度少見。ANA陽性組HBV－DNA含量明顯高于陰性組，推測HBV感染患者血清中自身抗體的出現(xiàn)可能與HBV在體內(nèi)的活躍復(fù)制有關(guān)。ANA可能的產(chǎn)生機制是：HBV復(fù)制促進HBV抗原與宿主肝細胞表面或內(nèi)部的蛋白質(zhì)分子相互作用，形成含有自身組織蛋白的抗原。此類抗原具有較強的免疫原性，刺激機體產(chǎn)生自身抗體，并引起持續(xù)的自身免疫反應(yīng)。HBV感染者ANA滴度和HBV感染可引發(fā)自身免疫性反應(yīng)，導(dǎo)致機體自身免疫紊亂。本研究發(fā)現(xiàn)，HBV感染引發(fā)的自身免疫反應(yīng)不僅與ANA有關(guān)，而且與HBV病毒復(fù)制水平有關(guān)。

因此，對HBV感染者檢測自身抗體有助于了解機體的免疫狀況，對臨床診斷和指導(dǎo)臨床合理選擇用藥及預(yù)后評估具有重要參考價值。

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