冰凍解凍紅細胞的制備、保存及臨床應用

郝晶茹

（吉林市紅十字中心血站，吉林 吉林 132000）

冰凍解凍紅細胞的制備、保存及臨床應用

郝晶茹

（吉林市紅十字中心血站，吉林 吉林 132000）

目的 通過探討10份-65℃以下保存冰凍紅細胞制備解凍紅細胞的方法，并對其影響質(zhì)量的相關(guān)因素進行分析。方法 使用ACP215血液處理機制備冰凍解凍紅細胞。結(jié)果 應用該方法制備的解凍紅細胞經(jīng)檢測，紅細胞回收率、殘留白細胞、殘留血小板、殘留甘油含量、上清游離血紅蛋白量及體外溶血試驗等質(zhì)量因素差異均無顯著性且均達到了國家標準。結(jié)論 該方法適用于臨床上稀有血型患者的輸血需求。操作簡便，高效，冰凍紅細胞保存時間長，質(zhì)量穩(wěn)定，有效提高了臨床用血的安全性。

冰凍紅細胞；解凍紅細胞；制備；安全

人類Rh（D）血型系統(tǒng)是紅細胞血型中僅次于ABO血型的重要血型系統(tǒng)，Rh（D）陰性者約占總?cè)巳簲?shù)的3‰～5‰，而血液常規(guī)保存期為21～35d，為避免Rh（D）陰性血液常因臨床無需要而造成浪費，滿足Rh（D）陰性患者的臨床用血需要，避免延誤臨床急癥搶救時間，我站開展了Rh（D）陰性紅細胞冷凍保存項目。該方法使長期保存紅細胞的一種理想方法，降低或完全停止了紅細胞代謝活動，使保存期長達10年，為稀有血型患者提供了臨床急救血液保障，也填補了吉林地區(qū)供血的空白，血站的實力也上了一個新臺階[1-6]。

過去，Rh（D）陰性血液臨床預約時，招募、體檢、采血、檢驗耗時長?，F(xiàn)在，遇有臨床Rh（D）陰性搶救用血，2h可將解凍的Rh（D）陰性解凍紅細胞供給臨床，為搶救患者爭取了寶貴時間。目前我站已經(jīng)建立了Rh（D）陰性冰凍紅細胞儲備庫，不僅保證了臨床搶救用血需要，而且使血站的供血實力更上了一個新臺階。

1 冰凍、解凍紅細胞的制備方法

1.1 材料與方法

1.1.1 試劑、耗材及主要設(shè)備

①試劑及耗材：紅細胞懸液或全血1袋、 復方甘油溶液（北京博德桑特輸采血器材科技開發(fā)中心）、9%氯化鈉溶液（四川南格爾生物醫(yī)學公司）、800毫升轉(zhuǎn)移袋（四川南格爾生物醫(yī)學公司）、加甘油管路（美國血液技術(shù)公司）、去甘油管路（美國血液技術(shù)公司）、0.9%生理鹽水（山東威高集團）。②主要設(shè)備：ACP215全自動血液處理機（美國血液技術(shù)公司）、超低溫冰箱（-65℃以下，日本三洋公司生產(chǎn)）、CR-7大容量低溫離心機（日立公司）、血液解凍機（長沙儀器儀表有限公司）、全自動無菌接管機（德國費森尤斯公司）、庫爾特血細胞計數(shù)儀。

1.2 制備方法

1.2.1 甘油化方法：將紅細胞懸液或全血離心去上清，將濃縮少白細胞紅細胞移至800mL轉(zhuǎn)移袋中，使用ACP215血液處理機，設(shè)定甘油化程序，使滴速先慢后快，加入復方甘油溶液，邊加邊振蕩，1單位紅細胞加甘油160mL（2單位紅細胞加甘油320mL）。在室溫靜止30min，使甘油充分與紅細胞混合，輕離心去除多余的甘油溶液，排氣并搖勻。將甘油化的紅細胞裝盒，使袋體保持平整，打印冰凍紅細胞標簽粘貼在袋體上做好標識，送-65℃以下低溫冰箱速凍保存。

1.2.2 去甘油：將冰凍紅細胞用血液解凍機在37℃水浴中解凍冰凍紅細胞，不斷搖動使血袋與水充分接觸，加速其融化，完全融化至無冰晶。但不能用力，以避免紅細胞受到機械性損傷，融化后置室溫靜置10min，使用ACP215血液處理機，加入9%NaCl溶液洗滌，平衡再用0.9%NaCl溶液反復洗滌。成品為解凍懸浮紅細胞供臨床應用。

1.3 流程圖

（CPDA-1）全血或紅細胞懸液→離心移出血漿及上清液→濃縮少白細胞紅細胞→加甘油（室溫靜止平衡半小時，離心去除多余甘油保存）→甘油化紅細胞→置-65℃以下冰箱保存→冰凍紅細胞→37℃水浴解凍→加9%NaCl溶液→0.9%NaCl反復洗滌→去甘油化紅細胞→加0.9%NaCl溶液240mL制備成 解凍紅細胞。

1.4 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結(jié)果，見表1。

表1 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結(jié)果()

表1 使用ACP215血液處理機制備的去甘油紅細胞檢測結(jié)果()

觀察指標(n=10)解凍懸浮紅細胞質(zhì)量標準紅細胞回收率86.34±3.54紅細胞回收率≥80%殘留血小板0.79±0.23殘留血小板≤1%殘留白細胞0.73±0.16殘留白細胞≤1%上清血紅蛋白0.94±0.15上清血紅蛋白≤1g/L殘余甘油含量4.36±0.57殘余甘油含量≤10g/L體外溶血實驗6.49±0.38體外溶血實驗≤50%細菌培養(yǎng)陰性陰性

2 制備冰凍、解凍紅細胞的注意事項

2.1 保養(yǎng)液為CPDA-1的血液制劑在6d內(nèi)制備冰凍，這是保持冰凍紅細胞活性的基礎(chǔ)。在加入甘油時一定要使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態(tài)，讓甘油緩慢均勻的和紅細胞混合。甘油加完畢后一定要靜止30min。另外，加甘油前和加完甘油都要排盡血袋內(nèi)空氣，如果血袋內(nèi)氣泡太多形成大的氣泡的過程中，小氣泡不斷破裂，這樣對紅細胞是一個損害。血袋內(nèi)有空氣，在冰凍的過程中也易損壞血袋。甘油化是細胞外環(huán)境有低滲到高滲的過程，若加入甘油速度過快，可造成紅細胞內(nèi)外滲透壓來不及轉(zhuǎn)換，造成紅細胞內(nèi)滲透壓驟降而水腫，最終導致溶血。

2.2 將冰凍的紅細胞制備成解凍甘油紅細胞關(guān)鍵的第一步是在-65℃以下冰箱取出紅細胞后要迅速浸入37～40℃水浴中，水浴箱的水一定要浸沒血袋，要不斷搖動，使血袋與水充分接觸，加速其融化，但不能用力去擠壓血袋。減少紅細胞在溶化過程中的機械損傷，溶化好的血袋要在室溫靜止10min，讓紅細胞得到充分休息，增強紅細胞的抗破壞能力。解凍紅細胞經(jīng)復溫、洗滌后應在24h盡快輸注。

3 適應證

解凍紅細胞主要應用于突發(fā)事件下的血液供應、腫瘤放化療，患者自體血的回輸，稀有血型患者、從事輻射工作人員、戰(zhàn)備貯存等。

4 討 論

經(jīng)過解凍洗滌的紅細胞由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血反應（發(fā)熱反應、HLA同種免疫反應等）。對于血液病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、腎功能異常以及心功能不全的患者輸用很有益處。輸入人體后氧的釋放能力比常規(guī)方法保存的血液要好。另外，解凍紅細胞由于去除了細胞代謝產(chǎn)物，抗凝劑，即使大量輸注也可避免以及減少肝炎等傳染病的傳播。解凍紅細胞質(zhì)量穩(wěn)定，但制備方法簡便高效，在臨床應用中意義重大。

[1] 楊冬燕,段恒英,王娟娟,等.全自動細胞處理系統(tǒng)制備冰凍紅細胞的關(guān)鍵控制點及效果評價[J].重慶醫(yī)學,2009,38(9):1078-1079.

[2] 馬慶,陸瑤,徐雪瑾,等.紅細胞深低溫長期保存效果的探討[J].中國輸血雜志,2007,20(1):45-47.

[3] 王惟.冰凍紅細胞的特點和制備、保存及臨床應用[J].中外醫(yī)療,2012,31(23):37.

[4] 孫迪,楊建,吳曉黎,等.紅細胞在-65℃保存過程中代謝及體外功能變化的探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2011,8(3):312-314.

[5] 中華人民共和國國家標準《全血與成分血質(zhì)量標準》[S].GB 18469-2001.

[6] 沈莉,李建民,梁曉虎,等.過濾后血液制備冰凍紅細胞的質(zhì)量探討[J].河北醫(yī)藥,2008,30(12):2001-2002.

R331.1+41

B

1671-8194（2013）28-0057-02