紫外-可見分光光度法在藥物分析中的應(yīng)用

李蘭英 鄭國(guó)金

（云南楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，云南 楚雄 675005）

紫外-可見分光光度法在藥物分析中的應(yīng)用

李蘭英 鄭國(guó)金

（云南楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，云南 楚雄 675005）

紫外-可見分光光度法是《中國(guó)藥典》中藥物分析常用的分析方法，在藥物分析中主要應(yīng)用于藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定、含量均勻度和溶出度的檢查等方面?！吨袊?guó)藥典》中紫外-可見分光光度法是化學(xué)藥物的原料藥和制劑分析常用的分析方法，同時(shí)也用于中藥、生物制品以及體內(nèi)藥物的分析。

紫外-可見分光光度法；藥物分析；鑒別；雜質(zhì)檢查；含量測(cè)定

紫外-可見分光光度法是通過測(cè)定物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)（200～760nm）產(chǎn)生紫外-可見吸收光譜，根據(jù)吸收光譜的特性，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。紫外-可見分光光度法由紫外分光光度法和可見分光光度法兩種方法構(gòu)成，這兩種方法在測(cè)定的原理、儀器、操作等方面皆相同。因此，統(tǒng)稱為紫外-可見分光光度法，測(cè)定儀器一般采用紫外-可見分光光度儀[1]。

分子結(jié)構(gòu)中含有芳香環(huán)或共軛雙鍵等共軛體系的有機(jī)藥物，在紫外光區(qū)（200～400nm）有特征吸收，可用紫外分光光度法進(jìn)行藥物分析；一些外觀有顏色或加入某試劑能呈色的藥物在可見光區(qū)（400～760nm）有特征吸收，可用可見分光光度法進(jìn)行藥物分析，紫外-可見分光光度法在《中國(guó)藥典》中主要應(yīng)用于藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定、含量均勻度和溶出度的檢查等方面。

1 紫外-可見分光光度法應(yīng)用于藥物鑒別

1. 鑒別的主要依據(jù)

紫外-可見分光光度是通過測(cè)定藥物在紫外可見光區(qū)的吸收光譜特征對(duì)藥物進(jìn)行鑒別?？筛鶕?jù)藥物的吸收光譜特征，如吸收光譜的形狀、最大吸收波長(zhǎng)、吸收峰數(shù)目、各吸收峰的位置、強(qiáng)度和相應(yīng)的吸收系數(shù)等進(jìn)行鑒別，最大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)是鑒別藥物的常用參數(shù)。

1.2 常用的鑒別方法

1.2.2 比較吸光度比值的一致性

有些藥物的吸收光譜中吸收峰較多，各峰對(duì)應(yīng)的吸光度的比值是一定的，可作為鑒別的標(biāo)準(zhǔn)。如《中國(guó)藥典》中硝西泮的鑒別：硝西泮加無水乙醇制成每1mL約含8μg的溶液，在220nm、260nm與310nm波長(zhǎng)處有最大吸收，規(guī)定260nm與310nm波長(zhǎng)處的吸光度的比值應(yīng)為1.45～1.65。

1.2.3 比較吸收光譜特性的一致性

利用藥物具有紫外吸收的特性或利用藥物經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收特性進(jìn)行鑒別。如《中國(guó)藥典》現(xiàn)行版中氟胞嘧啶的鑒別：取氟胞嘧啶適量，加鹽酸溶液（9→100）制成每1mL中約含10μg的溶液，在286nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，吸光度約為0.71。

用紫外-可見分光光度法鑒別藥物時(shí)，對(duì)儀器的準(zhǔn)確度要求很高，必須按要求嚴(yán)格校正合格后方可使用，樣品的純度必須達(dá)到要求才能測(cè)定。

2 紫外-可見分光光度法應(yīng)用于藥物雜質(zhì)檢查

2.1 一般雜質(zhì)檢查

《中國(guó)藥典》少數(shù)一般雜質(zhì)的限量采用了紫外-可見分光光度法進(jìn)行檢查。如藥物溶液的顏色，“溶液顏色”的檢查是控制藥物在生產(chǎn)過程或貯存過程中產(chǎn)生的有色雜質(zhì)。紫外-可見分光光度法是通過測(cè)定溶液的吸光度檢查藥物中有色雜質(zhì)的限量。如維生素C易受外界條件影響而變色，規(guī)定取本品3.0g，加水15mL，振搖使溶解，溶液經(jīng)4號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過，濾液于420nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過0.03。

另外，對(duì)藥物的一般雜質(zhì)如重金屬、鐵鹽等的檢查，中國(guó)藥典采用目視比色法。目視比色法是在可見光區(qū)用眼睛辨別、比較供試品溶液與對(duì)照品溶液的顏色深淺，以檢查該項(xiàng)雜質(zhì)是否超過限量。

2.2 特殊雜質(zhì)檢查

《中國(guó)藥典》中常用的各類分光光度法對(duì)藥物特殊雜質(zhì)檢查，以紫外-可見分光光度法應(yīng)用較多。

紫外-可見分光光度法檢查藥物中特殊雜質(zhì)限量，通常是采用檢查雜質(zhì)吸光度的方法，選擇在藥品無吸收而雜質(zhì)有吸收的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，規(guī)定測(cè)得的吸光度不得超過某一限值，通過控制雜質(zhì)吸光度的大小，控制雜質(zhì)的限量。如腎上腺素中檢查腎上腺酮，腎上腺酮在310nm處有吸收，而腎上腺素在此波長(zhǎng)處無吸收，《中國(guó)藥典》中規(guī)定，取本品加鹽酸（9→200）制成每1mL中含2.0mg的溶液，在310nm波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過0.05，即控制酮體的限量為0.06%。再如，鹽酸苯海索中檢查哌啶苯丙酮、葡萄糖氯化鈉注射液中檢查5-羥甲基糠醛等特殊雜質(zhì)《中國(guó)藥典》中皆是采用紫外-可見分光光度法進(jìn)行雜質(zhì)檢查。

有的雜質(zhì)的紫外吸收光譜與藥物的紫外吸收光譜在某波長(zhǎng)處有重疊，可以改變藥物在某兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度比值，通過控制供試品溶液的吸光度比值來控制雜質(zhì)的限量，如《中國(guó)藥典》中碘解磷定注射液中分解產(chǎn)物的檢查，就是這種情況。

3 紫外分光光度法應(yīng)用于藥物含量測(cè)定

紫外-可見分光光度法由于靈敏度較高，不僅可用于常量組分的含量測(cè)定，也可用于測(cè)定微量組分、超微量組分以及多組分混合物同時(shí)測(cè)定等，在藥物分析中主要用于原料藥含量測(cè)定、制劑含量測(cè)定、含量均勻度和溶出度的檢查等。

3.1 含量測(cè)定的主要依據(jù)

朗伯-比爾定律是紫外-可見分光光度法含量測(cè)定的依據(jù)。朗伯-比爾定律是指單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量（A）與該物質(zhì)的濃度（C）和液層的厚度（L）成正比，其關(guān)系如下式：

3.2 常用含量測(cè)定的方法

測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用lcm的石英吸收池（紫外光區(qū)）或玻璃吸收池（可見光區(qū)），以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3～0.7的誤差較小。

3.2.1 吸收系數(shù)法

吸收系數(shù)法是利用待測(cè)物質(zhì)的吸收系數(shù)與測(cè)得的一定濃度時(shí)的吸光度比較計(jì)算含量的方法，又稱絕對(duì)法。該法是目前應(yīng)用最多、最普遍的方法。用本法測(cè)定時(shí)，吸收系數(shù)通常應(yīng)＞100，并注意儀器的校正和檢定。

可按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度：

3.2.2 對(duì)照品比較法

對(duì)照品比較法是采用在相同條件下分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的（100±10）%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后，按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度：

式中，XC為供試品溶液的濃度；XA為供試品溶液的吸光度；CR為對(duì)照品溶液的濃度；AR為對(duì)照品溶液的吸光度。

3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法是紫外-可見分光光度法中最經(jīng)典的方法。測(cè)定時(shí)，先取與被測(cè)物質(zhì)含有相同組分的標(biāo)準(zhǔn)品，配成一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同條件下，分別測(cè)定其吸光度。然后以濃度C為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制A-C曲線。在相同條件下，測(cè)出供試品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上便可查出與此吸光度值對(duì)應(yīng)的供試品溶液的濃度。

由于標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)儀器的要求不高，因此是紫外-可見分光光度法中簡(jiǎn)便易行的方法。

3.2.4 比色法

測(cè)定能吸收可見光的有色物質(zhì)、無色但經(jīng)顯色反應(yīng)可以生成有色的物質(zhì)都可以采用本法在適宜的條件下進(jìn)行測(cè)定。比色法通常稱為光電比色法，現(xiàn)代的比色分析采用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，故又稱可見分光光度法。

除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替，對(duì)照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液的吸光度后，按對(duì)照品比較法計(jì)算供試品濃度。如《中國(guó)藥典》中利血平注射液、硫酸阿托品片等一些藥物和制劑的含量采用比色法測(cè)定。

3.3 紫外-可見分光光度法對(duì)原料藥的含量測(cè)定

《中國(guó)藥典》中原料藥的含量用百分含量表示。

3.4 紫外-可見分光光度法對(duì)制劑的含量測(cè)定

制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示。

3.4.1 片劑的含量測(cè)定

由于片劑含量低，且含輔料，若采用原料藥的方法測(cè)定含量則有干擾，當(dāng)片劑中主藥在紫外-可見光區(qū)有特征吸收光譜，則可采用靈敏度更高的紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。如鹽酸氟奮乃靜為有機(jī)堿性藥物，《中國(guó)藥典》中原料藥采用非水溶液滴定法，而片劑含輔料硬脂酸鎂對(duì)非水溶液滴定法有干擾，則采用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。

對(duì)照品比較法：

式中，S為標(biāo)示量（g/片），其他符號(hào)意義同前。如《中國(guó)藥典》中甲氧芐啶片的含量測(cè)定采用此法。

吸收系數(shù)法：

3.4.2 注射劑的含量測(cè)定

若注射劑中主藥在紫外-可見光區(qū)有特征吸收，當(dāng)注射劑中無附加成分或附加成分不干擾，則主藥的含量測(cè)定可直接采用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量；當(dāng)附加成分有干擾，則可采用消除干擾，或利用主藥與附加成分紫外吸收光譜的差異，再進(jìn)行紫外-可見分光光度法測(cè)定主藥含量。

如《中國(guó)藥典》中馬來酸氯苯那敏注射液的含量測(cè)定采用吸收系數(shù)法。

4 含量均勻度和溶出度的檢查

溶出度系指藥物從片劑或膠囊劑等固體制劑在規(guī)定溶劑中溶出的速度和程度。溶出度是固體制劑質(zhì)量控制的一個(gè)重要指標(biāo)。含量均勻度系指小劑量或單劑量的固體制劑、半固體制劑和非均相液體制劑的含量符合標(biāo)示量的程度[2]。

當(dāng)藥物可用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量的，含量均勻度和溶出度的檢查可采用紫外-可見分光光度法。如《中國(guó)藥典》中吡哌酸片溶出度的測(cè)定和馬來酸氯苯那敏片含量均勻度檢查采用的就是紫外-可見分光光度法。

紫外-可見分光光度法含量均勻度檢查的計(jì)算與含量測(cè)定計(jì)算相同，只是結(jié)果判斷方法不相同。

紫外-可見分光光度法不僅是化學(xué)藥物的原料藥和制劑分析常用的分析方法，同時(shí)也用于中藥、生物制品以及體內(nèi)藥物的質(zhì)量分析。

[1] 孫瑩,呂潔.藥物分析[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009.

[2] 李培陽.藥物分析化學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

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1671-8194（2013）30-0295-03