次高溫?zé)崆蚰壹袄鋬銮蚰已艹尚涡g(shù)的初步研究

王燕，李志偉，段峰，王茂強(qiáng)

血管狹窄、阻塞性疾病嚴(yán)重危害人類健康，原因多數(shù)繼發(fā)于動脈硬化，其余見于大動脈炎、旁路移植術(shù)后人工血管再狹窄、醫(yī)源性血管狹窄等。與傳統(tǒng)外科手術(shù)治療相比，介入治療開通血管阻塞具有一定的優(yōu)勢，表現(xiàn)在創(chuàng)傷小、技術(shù)成功率較高、住院時(shí)間短、并發(fā)癥發(fā)生率低、療效優(yōu)良、可重復(fù)應(yīng)用及不影響其他治療方法等。但是，目前存在的主要問題是術(shù)后管腔再狹窄，金屬支架植入的療效優(yōu)于單純經(jīng)皮經(jīng)腔血管球囊成形術(shù)（PTA），但仍然有20%～50%患者術(shù)后最終發(fā)生有重要臨床意義的再狹窄、肢體缺血或阻塞癥狀復(fù)發(fā)，影響中-遠(yuǎn)期療效［1］。PTA和支架植入術(shù)后局部血管平滑肌細(xì)胞過度增殖、移行、分泌大量基質(zhì)是造成再狹窄的最主要原因。近年研究發(fā)現(xiàn)用淺低溫/次高溫處理血管狹窄段內(nèi)膜可降低再狹窄發(fā)生率，直接抑制/滅活局部平滑肌細(xì)胞（SMC），從源頭上阻斷內(nèi)膜增生的發(fā)生，以期獲得預(yù)防或降低血管腔再狹窄率的效果，同時(shí)最大限度地減少對非靶部位血管壁的影響。但在何種參數(shù)（溫度范圍、作用時(shí)長等）下可以取得最佳療效尚不明確，我科應(yīng)用次高溫?zé)崆蚰壹袄鋬銮蚰覕U(kuò)張狹窄血管模型，得出初步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及模型建立

10頭實(shí)驗(yàn)用長白豬（SCXK（京）2009-0012）由解放軍總醫(yī)院（301醫(yī)院）實(shí)驗(yàn)動物中心提供，雌雄不限，體重60～75 kg。采用血管內(nèi)膜熱空氣損傷法對豬的髂內(nèi)動脈造成特定條件的損傷，然后以高脂飼料喂養(yǎng)2個(gè)月，通過血管造影及病理學(xué)檢查證實(shí)動脈粥樣硬化性狹窄形成（圖1a），成功建立血管狹窄模型6頭。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法動物術(shù)前1天禁食水，按每25 kg體重肌內(nèi)注射鹽酸氯胺酮注射液（20 ml∶1 g）及1支咪達(dá)唑侖注射液（1.5 ml）麻醉。麻醉后氣管插管，觀察動物角膜反射、疼痛刺激反應(yīng)、心率、血壓及呼吸等生命體征。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)用精確數(shù)字化制導(dǎo)技術(shù)，在實(shí)時(shí)高分辨率影像和高靈敏腔內(nèi)溫度測量儀監(jiān)測下，以微小球囊和攜溫度介質(zhì)向?qū)嶒?yàn)動物的“靶”血管導(dǎo)入“次高溫”或“淺低溫”（圖1b）。造模成功后，鹽酸戊巴比妥25 mg/kg肌內(nèi)注射麻醉后，以仰臥位固定于血管造影床上，氣管插管，耳緣靜脈處開通靜脈通路，葡萄糖氯化鈉注射液維持靜脈通路，右側(cè)腹股溝區(qū)備皮，碘伏消毒，鋪無菌孔巾，在腹股溝搏動最明顯處作一與動脈走向一致的4.0～5.0 cm的皮膚切口，鈍性分離皮下組織及肌肉，充分暴露股動脈，采用改良Seldinger技術(shù)穿刺股總動脈，導(dǎo)入4 F血管鞘，經(jīng)血管鞘插入肝動脈導(dǎo)管至對側(cè)髂內(nèi)動脈行血管造影，優(yōu)維顯370對比劑用量為3 ml/s，總量9 ml，壓力300 psi，用普通肝素1 250 u。導(dǎo)入4 F動脈鞘，采用V18微導(dǎo)管系統(tǒng)通過閉塞段，導(dǎo)入（4～10 F）球囊導(dǎo)管。在球囊導(dǎo)管導(dǎo)絲腔內(nèi)導(dǎo)入熱敏導(dǎo)絲，熱敏導(dǎo)絲另一端連接射頻治療儀實(shí)時(shí)監(jiān)測溫度；在球囊導(dǎo)管球囊腔內(nèi)注入熱介質(zhì)（熱水與對比劑混合液，溫度62～65℃），此時(shí)實(shí)時(shí)溫度監(jiān)測顯示球囊內(nèi)壁溫度為42～45℃。反復(fù)擴(kuò)張2～3 min，抽空原熱介質(zhì)后重新注入新的熱介質(zhì)以維持溫度恒定，總時(shí)間10 min、20 min（溫度每下降5℃，需要20 s）。同樣，采用改良Seldinger技術(shù)穿刺股動脈，導(dǎo)入8 F導(dǎo)管鞘（規(guī)格2.67 mm）應(yīng)用PolarCath外周擴(kuò)張系統(tǒng)（PolarCath系統(tǒng)）由一次性導(dǎo)管、一氧化二氮盒和PolarCath膨脹裝置以及可重復(fù)使用的PolarCath電源模塊系統(tǒng)。應(yīng)用一次性球囊導(dǎo)管（規(guī)格：外徑/球囊長度/導(dǎo)管長度8.0 mm×40 mm×120 mm）及導(dǎo)絲（0.035英寸）通過閉塞段，插到病變目標(biāo)，連接PolarCath膨脹裝置至導(dǎo)管和PolarCath電池座，插入一氧化二氮盒，使用氧化亞氮?dú)怏w擴(kuò)張非順應(yīng)性球囊至8 atm，同時(shí)將球囊冷卻至-10℃，維持20 s，連接電腦控溫系統(tǒng)和液氮罐后按冷凍球囊導(dǎo)管標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行擴(kuò)張。反復(fù)擴(kuò)張，總時(shí)間2 min。

圖1 球囊導(dǎo)管擴(kuò)張前后靶血管造影表現(xiàn)

1.2.3 采取靶血管標(biāo)本動物在熱球囊及冷凍球囊處理靶血管術(shù)后4周，肌內(nèi)注射鹽酸戊巴比妥25 mg/kg麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺，靜脈推注100 ml空氣處死動物，原造模切開部位切4.0～5.0 cm的皮膚切口，鈍性分離皮下組織及肌肉，充分暴露髂內(nèi)動脈，以造模術(shù)中鈦夾標(biāo)記處尋找處理的靶血管，每份血管標(biāo)本取前、中、后3段的病理切片各3張行蘇木精-伊紅（HE）染色。

1.2.4 標(biāo)本的制作及病理形態(tài)學(xué)分析取髂內(nèi)動脈鈦夾標(biāo)記處靶血管前、中、后段血管組織置于4%中性甲醛中固定24 h，經(jīng)梯度乙醇脫水后石蠟包埋，制成3μm切片，進(jìn)行HE染色鏡檢。將病理切片圖像輸入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用光學(xué)顯微鏡和CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)觀察血管管腔、內(nèi)膜、中膜及內(nèi)外彈力板的形態(tài)學(xué)變化，測量血管管腔橫斷面積、內(nèi)膜及中膜面積，計(jì)算內(nèi)膜／中膜（I/M）比值，內(nèi)膜增生指數(shù)及管腔狹窄指數(shù)，觀察不同溫度處理后血管內(nèi)膜增生程度等變化。

1.3 觀察指標(biāo)

飼養(yǎng)期間觀察動物反應(yīng)（精神、飲食等）、動物肢體活動以及創(chuàng)面愈合情況。

光鏡下觀察測量內(nèi)膜及中膜橫斷面積，分別測量血管內(nèi)膜和中膜橫斷面的面積，以內(nèi)彈力膜區(qū)別內(nèi)膜和中膜，計(jì)算I/M比值，表示內(nèi)膜增生程度。

應(yīng)用光學(xué)顯微鏡和CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量增生內(nèi)膜面積及中膜橫斷面的面積，增生內(nèi)膜中每高倍鏡視野SMC的數(shù)目，以內(nèi)膜面積/（內(nèi)膜面積+中膜面積）為內(nèi)膜增生指數(shù)（正常組為0），管腔面積/（內(nèi)膜面積+管腔面積）為管腔狹窄指數(shù)（正常組為1）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用CHISS統(tǒng)計(jì)軟件（2004）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布及方差齊性，采用Bartlett方差齊性檢驗(yàn)。完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析（ANOVA）即F檢驗(yàn)。采用SNK-q檢驗(yàn)法進(jìn)行組間比較，如不滿足正態(tài)分布或雖滿足正態(tài)分布，但方差不齊，用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

應(yīng)用光學(xué)顯微鏡和CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)對熱球囊及冷凍球囊處理后靶血管的參數(shù)進(jìn)行計(jì)算與分析，見表1、表2。

2.1 PTA后4周行DSA及病理檢查結(jié)果

B組的血管橫斷面積大于A組和C組（P=0.003 7）；B組每高倍鏡視野內(nèi)膜SMC數(shù)目及管腔狹窄指數(shù)均高于A組和C組（P=0.000 1）；中膜面積及內(nèi)膜面積C組均大于A組和B組（P=0.000 1）；B組I/M比值及內(nèi)膜增生指數(shù)均低于A組和C組（P=0.000 1），見表1、表2。

表1 熱球囊及冷凍球囊處理靶血管4周后4項(xiàng)參數(shù)比較（±s）

表1 熱球囊及冷凍球囊處理靶血管4周后4項(xiàng)參數(shù)比較（±s）

注：SMC=平滑肌細(xì)胞

?

表2 熱球囊及冷凍球囊處理靶血管4周后3項(xiàng)參數(shù)比較（±s）

表2 熱球囊及冷凍球囊處理靶血管4周后3項(xiàng)參數(shù)比較（±s）

注：根據(jù)定義內(nèi)膜增生指數(shù)及管腔狹窄指數(shù)正常組為0和1

?

2.3 熱處理及冷處理靶血管標(biāo)本病理形態(tài)學(xué)變化

2.3.1 血管狹窄模型可見動脈管腔狹窄甚至閉塞；內(nèi)膜細(xì)胞明顯減少，體積增大，排列紊亂，部分脫落至管腔；內(nèi)彈力膜局灶性斷裂或消失；中膜明顯增厚，細(xì)胞排列紊亂，彈力纖維明顯增生，與常規(guī)纖維斑塊不同，脂質(zhì)沉積不明顯。見圖2a。

2.3.2 熱球囊組可見管腔不規(guī)則，輕度狹窄；局部內(nèi)膜增厚，內(nèi)皮下結(jié)締組織輕度增生，內(nèi)彈性膜局部斷裂、結(jié)構(gòu)不清；中膜細(xì)胞排列紊亂，彈力纖維輕度增生?；静∽兣c狹窄模型組相似，但病變較之減輕。見圖2b。

2.3.3 冷凍球囊組管腔略不規(guī)則，局部輕度狹窄；內(nèi)膜局部增厚，內(nèi)皮下結(jié)締組織增生，內(nèi)彈力膜局部斷裂、結(jié)構(gòu)不清；中膜細(xì)胞排列紊亂，彈力纖維增生?；静∽兣c狹窄模型組相似，但病變較之減輕，較熱球囊組嚴(yán)重。見圖2c。

圖2 球囊擴(kuò)張前后靶血管狹窄段不同病理表現(xiàn)

3 討論

1964年，Dotter等［2］首次提出經(jīng)皮血管擴(kuò)張術(shù)，1974年Grüntzig等［3］首次開發(fā)了用于擴(kuò)張治療的球囊導(dǎo)管，臨床觀察結(jié)果表明PTA術(shù)后1年血管再狹窄率為10%～40%，3年為30%～50%［4］。PTA術(shù)后血管內(nèi)皮受損，內(nèi)彈力層遭到破壞，中膜斷裂，血小板聚集到損傷部位，形成血栓的同時(shí)可釋放多種血管活性因子及有絲分裂生長因子，進(jìn)而導(dǎo)致血管痙攣及SMC增殖并向內(nèi)膜下遷移，最終導(dǎo)致血管內(nèi)膜增生，管腔再狹窄。為了克服PTA術(shù)后不足，管腔內(nèi)支架問世，實(shí)驗(yàn)研究開始于20世紀(jì)60年代末期，臨床應(yīng)用研究自20世紀(jì)80年代逐步發(fā)展起來［4］。雖然，金屬支架植入的療效優(yōu)于單純PTA，實(shí)現(xiàn)了血運(yùn)重建，患者缺血癥狀改善明顯，但術(shù)后仍會并發(fā)較高的再狹窄率，并且支架植入術(shù)具有一定的局限性，小血管病變相對大血管病變而言，新生內(nèi)膜組織比血管管徑大很多，最終導(dǎo)致較高的再狹窄率，不易植入支架［5-6］。

研究證實(shí)，血栓、炎癥和平滑肌增生是支架內(nèi)再狹窄的3個(gè)重要階段，其中血管內(nèi)膜增生是再狹窄的最主要機(jī)制。目前，血管內(nèi)膜異常增生被認(rèn)為是造成血管內(nèi)再狹窄的主要原因［5］，此外，血管再狹窄的危險(xiǎn)因素還包括年齡、性別、吸煙史、高血壓及糖尿病等基礎(chǔ)病史，研究發(fā)現(xiàn)男性高齡患者血管再狹窄多見，長期吸煙可能會改變血管壁成分和代謝，影響血管壁對損傷的反應(yīng)或改變血液成分影響再狹窄過程，糖尿病患者血管病變多表現(xiàn)為彌漫性病變，且遠(yuǎn)端血管病變和完全閉塞發(fā)生率較高［7］，針對這種彌漫性病變，我們的經(jīng)驗(yàn)是PTA及支架植入術(shù)均不首選，應(yīng)首先考慮全身用藥，如長期應(yīng)用抗凝藥物治療、激素及改善微循環(huán)等對癥治療。

PTA和血管內(nèi)支架植入術(shù)后再狹窄發(fā)生率較高，治療棘手，臨床患者經(jīng)皮冠狀動脈成形術(shù)（PTCA）后再狹窄發(fā)生時(shí)間主要在3～6個(gè)月，其中發(fā)生在1個(gè)月內(nèi)的占13%，4個(gè)月內(nèi)的占53%，1年后僅占3.4%［8］。這一規(guī)律與在大鼠動物模型上觀察到的內(nèi)膜增生具有相同的趨勢，即內(nèi)膜增生在術(shù)后早期就已達(dá)到高峰，這也提示對于接受PTCA的患者，應(yīng)在早期積極給予抑制內(nèi)膜增生的防治措施［8］。本實(shí)驗(yàn)中，我們?nèi)≡炷３晒蠼槿敫深A(yù)治療4周的病理標(biāo)本，探索不同溫度處理對內(nèi)膜增生的影響。

目前，對血管成形術(shù)后再狹窄的防治研究主要集中在動脈狹窄、阻塞性病變方面，方法有改進(jìn)支架構(gòu)型（改變支架表面電場）、覆膜支架、藥物涂層（洗脫）支架、生物可降解（可吸收）支架、切割球囊、激光成形、放射治療（內(nèi)、外照射）、藥物治療、局部基因治療、熱球囊成形治療、冷凍球囊成形治療等［9-11］。尋求預(yù)防血管成形術(shù)后血管再狹窄已成為當(dāng)前臨床和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的前沿課題，國內(nèi)外有關(guān)該項(xiàng)目的研究包括全身用藥（長期用抗凝藥物、血管緊張素Ⅱ抑制劑、鈣通道阻滯劑、激素等）、局部用藥［（如用球囊導(dǎo)入和支架涂層攜帶抗凝劑［9，12］、抑制炎癥反應(yīng)（激素）劑、刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、抑制SMC增生、特異性抗體、固體乙醇等］、生物技術(shù)（局部導(dǎo)入血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體抗體，阻止血小板凝集，局部導(dǎo)入血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子加速內(nèi)皮化，在受損傷的血管內(nèi)膜表面或金屬支架表面種植人工孵化的內(nèi)皮細(xì)胞，阻止細(xì)胞外基質(zhì)降解，阻止PDGF-β刺激SMC，將對抗病毒劑特別敏感的基因片段導(dǎo)入局部SMC促使其凋亡等）、放射治療（外照射、內(nèi)照射、攜帶放射線支架［13］、放射性液體充盈球囊［14］）、被覆膜支架、轉(zhuǎn)基因支架［15-16］等，取得了一些成就，其中覆膜支架、藥物涂層（洗脫）支架、腔內(nèi)照射等在降低再狹窄發(fā)生率方面有一定成效，但距預(yù)期療效尚有較大差距，同時(shí)也存在一些問題，如發(fā)現(xiàn)藥物洗脫支架植入后有內(nèi)皮化延遲，并認(rèn)為可能是晚期血栓形成的原因。有些研究雖然周期長達(dá)10余年，但目前仍僅限于實(shí)驗(yàn)階段［17-27］。其中，以殺滅或抑制局部SMC的放射治療、局部基因治療療效最肯定，最具有實(shí)際應(yīng)用前景，但存在一些問題，目前多僅限于實(shí)驗(yàn)階段，而且多數(shù)工作屬于初步研究，距離完全克服金屬支架植入后再狹窄現(xiàn)象尚有遙遠(yuǎn)的路程。

近年發(fā)現(xiàn)，次高溫（42℃～50℃）及淺低溫（-10℃～15℃）冷凍處理可阻止血管回縮，促進(jìn)動脈血管SMC凋亡、阻止內(nèi)膜增生，已在治療下肢動脈粥樣硬化阻塞方面獲得初步成功，前景良好。術(shù)后14個(gè)月通暢率達(dá)83%。Samson等［28］報(bào)道冷凍球囊成形的技術(shù)成功率達(dá)96%，術(shù)后12個(gè)月通暢率達(dá)82%。Banerjee等［29］報(bào)道兩家醫(yī)院治療27例復(fù)雜性外周動脈狹窄患者，技術(shù)成功率為100%，隨訪14個(gè)月通暢率75%。我們認(rèn)為對于復(fù)雜性狹窄，聯(lián)合支架植入、冷凍治療具有明顯優(yōu)勢。2009年Laird等［30］報(bào)道102例多中心冷凍治療股-腘動脈狹窄，技術(shù)成功率為85%，9個(gè)月通暢率為70%。另外，Jefferies等［31］報(bào)道用冷凍球囊成形治療腎動脈支架植入后再狹窄，Orsi等［32］報(bào)道用冷凍球囊治療輸尿管-腸管吻合口狹窄，Lanciego等［33］報(bào)道治療鼻淚管狹窄等。雖然，冷凍球囊已在國外成功應(yīng)用于外周血管病變及生理管腔狹窄，療效較為樂觀，但缺點(diǎn)是治療費(fèi)用比較昂貴，增加患者的費(fèi)用［28］。所以，本組實(shí)驗(yàn)借鑒目前已廣泛應(yīng)用于臨床的微波/射頻治療術(shù)中的實(shí)時(shí)溫度監(jiān)測技術(shù)和恒溫技術(shù)，將射頻治療針更換為微細(xì)導(dǎo)絲以進(jìn)行實(shí)時(shí)溫度監(jiān)測，利用射頻治療儀的循環(huán)系統(tǒng)達(dá)到球囊充盈的攜載溫度介質(zhì)恒溫的目的，將傳統(tǒng)的單純機(jī)械性擴(kuò)張管腔狹窄模式改進(jìn)為機(jī)械性擴(kuò)張聯(lián)合“次高溫”或“低溫”損傷SMC的模式。尋求熱處理最佳參數(shù)組合以期達(dá)到最佳擴(kuò)張效果。

淺低溫（-10～15℃）冷凍球囊局部處理可有效地預(yù)防PTA后血管“回彈”、促進(jìn)動脈血管壁SMC凋亡、阻止內(nèi)膜增生、降低再狹窄的發(fā)生率［34-37］。最近文獻(xiàn)報(bào)道，冷凍球囊局部處理在治療下肢動脈粥樣硬化阻塞方面已獲得初步成功，具有良好的應(yīng)用前景［10-11，30，37］。與超低溫（-40℃～-120℃）促使組織凝固性壞死、繼發(fā)炎癥反應(yīng)不同，與細(xì)胞壞死是不可控、不受調(diào)節(jié)的具有明顯炎癥反應(yīng)的致命性損傷不同，淺低溫主要治療溫度范圍為-15℃～-5℃，是可控的、可調(diào)節(jié)的，不伴有明顯炎癥反應(yīng)的良性損傷，主要依賴啟動細(xì)胞（主要是SMC）凋亡、阻止細(xì)胞增生。

本實(shí)驗(yàn)之所以選擇髂內(nèi)動脈為病變血管，基于豬的髂動脈供血與人類形似，利用豬髂動脈建立動脈粥樣硬化模型為預(yù)防和治療金屬支架植入術(shù)后管腔再狹窄提供了動物實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并且介入治療后并發(fā)癥少。熱球囊的溫度控制是應(yīng)用精確數(shù)字化制導(dǎo)技術(shù)，在實(shí)時(shí)高分辨率影像和高靈敏腔內(nèi)溫度測量儀監(jiān)測下，以微小球囊和攜熱能液體介質(zhì)向?qū)嶒?yàn)動物的“靶”血管導(dǎo)入熱能，具體包括熱能的傳輸、監(jiān)測（血管內(nèi)表面和血管周圍）和恒溫技術(shù)；同時(shí)應(yīng)用PolarCath系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)靶血管冷凍療法，液體冷凍劑（氧化亞氮）從高壓容器中排出，通過導(dǎo)管腔到達(dá)球囊；進(jìn)入球囊之后，液體轉(zhuǎn)變?yōu)闅怏w，膨脹球囊。這一蒸發(fā)過程導(dǎo)致溫度顯著下降；冷凍球囊具有雙重效應(yīng)：機(jī)械性擴(kuò)張、釋放冷凍能量作用于血管壁。通過體外輸送液化狀態(tài)的一氧化二氮至球囊，一氧化二氮在氣化過程中帶走大量熱量，從而可以使球囊表面溫度降低到使接觸組織發(fā)生不可逆損傷的程度。通過調(diào)節(jié)液態(tài)一氧化二氮的流量和流速可以控制球囊的冷凍溫度和冷凍范圍。

本實(shí)驗(yàn)冷凍球囊處理組冷處理作用時(shí)間設(shè)定為2 min，是基于文獻(xiàn)報(bào)道［27］：在離體實(shí)驗(yàn)中，牛的主動脈經(jīng)-10℃、冷凍0、60、120 s后，SMC和內(nèi)皮細(xì)胞均有明顯凋亡現(xiàn)象：SMC顯著凋亡時(shí)間以持續(xù)60 s作用明顯，內(nèi)皮細(xì)胞以120 s為顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在I/M比值、內(nèi)膜增生指數(shù)、管腔狹窄指數(shù)方面，熱處理時(shí)間20 min均優(yōu)于10 min。熱球囊組及冷凍球囊組比較，在I/M比值、內(nèi)膜增生指數(shù)、管腔狹窄指數(shù)、內(nèi)膜面積及管腔面積方面，熱球囊組優(yōu)于冷凍球囊組。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熱球囊較冷凍球囊在抑制局部SMC增殖、移行和分泌基質(zhì)方面占一定的優(yōu)勢，但由于本組實(shí)驗(yàn)存在不足之處，即豬髂內(nèi)動脈粥樣硬化性狹窄模型建立程度控制不佳，血管狹窄程度不一致，另一方面，由于實(shí)驗(yàn)動物數(shù)有限及觀察時(shí)間仍偏短，可能會對實(shí)驗(yàn)結(jié)論造成了一定的影響。

［1］劉大男，何作云，吳立榮，等.球囊損傷后血管重塑中內(nèi)皮依賴性因子的作用及其相互關(guān)系［J］.中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)，2011，30：287-292.

［2］Dotter CT，Judkins MP.Transluminal treatment of arteriosclerotic obstruction.Description of a new technic and a preliminary report of its application［J］.Circulation，1964：654-670.

［3］Grüntzig A，Hopff H.Percutaneous recanalization after chronic arterial occlusion with a new dilator-catheter（modification of the Dotter technique）（author’s transl）［J］.Dtsch Med Wochenschr，1974，99：2502-2510.

［4］徐克，姜宏.管腔內(nèi)支架治療的新進(jìn)展［J］.引進(jìn)國外醫(yī)藥技術(shù)與設(shè)備，1998，4：86-91.

［5］Regar E，Serruys PW，Bode C，et al.Angiographic findings of the multicenter Randomized Study With the Sirolimus-Eluting Bx Velocity Balloon-Expandable Stent（RAVEL）：sirolimuseluting stents inhibit restenosis irrespective of the vessel size［J］.Circulation，2002，106：1949-1956.

［6］王曉東.不同種類冠狀動脈支架生物相容性與置入后血管再狹窄［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13：1699-1702.

［7］徐鐵民，徐梅.經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形并支架置入后血管再狹窄的預(yù)防及治療［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13：4317-4320.

［8］焦延景，邱齡，肖傳實(shí)，等.大鼠頸動脈球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞增生性衰老的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2008，9：1055-1057.

［9］Herrmann HC，Buchbinder M，Clemen MW，et al.Emergent use of balloon-expandable coronary artery stenting for failed percutaneous transluminal coronary angioplasty［J］.Circulation，1992，86：812-819.

［10］Lumsden AM，Davies MG，Peden EK.Medical and endovascular management of critical limb ischemia［J］.J Endovasc Ther，2009，16（2 Suppl 2）：Ⅱ31-Ⅱ62.

［11］Shammas NW.Restenosis after lower extremity interventions：current status and future directions［J］.J Endovasc Ther，2009，16（Suppl 1）：I170-I182.

［12］Nakamura T，Brott BC，Brants I，et al.Vasomotor function after paclitaxel-coated balloon post-dilation in porcine coronary stent model［J］.JACC Cardiovasc Interv，2011，4：247-255.

［13］Hehrlein C，DeVries JJ，Arab A，et al.Failure of a novel Balloon-Expandable_-Emitting（103Pd）stent to prevent edge effects［J］.Circulation，2001，104：2358-2362.

［14］趙衛(wèi)東，陳英茂，王所亭.放射性充液球囊的劑量學(xué)研究［J］.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2002，22：298-299.

［15］Zhang LH，Luo T，Zhang C，et al.Anti-DNA antibody modified coronary stent for plasmid gene delivery：results obtained from a porcine coronary stent model［J］.J Gene Med，2011，13：37-45.

［16］王沛，張平洋，馬小五，等.靶向超聲介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染防止血管再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國超聲醫(yī)學(xué)雜志，2009，25：625-628.

［17］周俊，陸國平，戚文航.核因子KB的反義和誘騙性寡核苷酸對大鼠球囊損傷后血管狹窄和新生內(nèi)膜形成的影響［J］.中國動脈硬化雜志，2003，11：314-318.

［18］Zargham R.Preventing restenosis after angioplasty：a multistage approach［J］.Clin Sci（Lond），2008，114：257-264.

［19］Fattori R，Piva T.Drug-eluting stents in vascular intervention［J］.Lancet，2003，361：247-249.

［20］Stankovic G，Colombo A，Presbitero P，et al.Randomizedevaluation of polytetrafluoroethylene-covered stent in saphenous vein grafts：the Randomized Evaluation of polytetrafluoroethylene COVERed stent in Saphenous vein grafts（RECOVERS）Trial［J］.Circulation，2003，108：37-42.

［21］Saito T，Iguchi A，Tabayashi K.Irradiation inhibits vascular anastomotic stenosis in a canine model［J］.Gen Thorac Cardiovasc Surg，2009，57：406-412.

［22］Lim SY，Jeong MH，Hong SJ，et al.Inflammation and delayed endothelization with overlapping drug-eluting stents in a porcine model of in-stent restenosis［J］.Circ J，2008，72：463-468.

［23］Douis H，Shabir S，Lipkin G，et al.Drug-eluting stent insertion in the treatment of in-stent renal artery restenosis in three renal transplant recipients［J］.J Vasc Interv Radiol，2008，19：1757-1760.

［24］Wyttenbach R，Corti R，Alerci M，et al.Effects of percutaneous transluminal angioplasty and endovascular brachytherapy on vascular remodeling of human femoropopliteal artery：2 years follow-up by noninvasive magnetic resonance imaging［J］.Eur J Vasc Endovasc Surg，2007，34：416-423.

［25］Zeller T，Sixt S，Rastan A，et al.Treatment of reoccurring instent restenosis following reintervention after stent-supported renal artery angioplasty［J］.Catheter Cardiovasc Interv，2007，70：296-300.

［26］Krueger K，Bendel M，Zaehringer M，et al.Endovascular gamma irradiation for the prevention restenosis after angioplasty of femoropopliteal de novo stenoses［J］.Eur Radiol，2006，16：399-406.

［27］Yiu WK，Cheng SW，Sumpio BE.Direct comparison of endothelial cell and smooth muscle cell response to supercooling and rewarming［J］.J Vasc Surg，2007，46：557-564.

［28］Samson RH，Showalter DP，Lepore M Jr，et al.CryoPlasty therapy of the superficial femoral and popliteal arteries：a reappraisal after 44 months’experience［J］.J Vasc Surg，2008，48：634-637.

［29］Banerjee S，Brilakis ES，Das TS，et al.Treatment of complex superficial femoral artery lesions with PolarCath cryoplasty［J］.Am J Cardiol，2009，104：447-449.

［30］Laird JR，Dawson DL.The role for cryoplasty in the treatment of infrainguinal artery disease：case studies［J］.J Endovasc Ther，2009，16（2 Suppl 2）：Ⅱ116-Ⅱ128.

［31］Jefferies JL，Dougherty K，Krajcer Z.First use of cryoplasty to treat in-stent renal artery restenosis［J］.Tex Heart Inst J，2008，35：352-355.

［32］Orsi F，Penco S，Matei V，et al.Treatment of ureterointestinal anastomotic strictures by diathermal or cryoplastic dilatation［J］.Cardiovasc Intervent Radiol，2007，30：943-949.

［33］Lanciego C，Navarro S，Velasco J，et al.Randomized comparison of nasolacrimal cryoplasty versus plastic lacrimal stenting in the management of epiphora in adults［J］.J Vasc Interv Radiol，2009，20：1588-1596.

［34］Grassl ED，Bischof JC.In vitro model systems for evaluation of smooth muscle cell response to cryoplasty［J］.Cryobiology，2005，50：162-173.

［35］Tatsutani KN，Joye JD，Virmani R，et al.In vitro evaluation of vascular endothelial and smooth muscle cell survival and apoptosis in response to hypothermia and freezing［J］.Cryo Letters，2005，26：55-64.

［36］Balasubramanian SK，Venkatasubramanian RT，Menon A，et al.Thermal injury prediction during cryoplasty through in vitro characterization of smooth muscle cell biophysics and viability［J］.Ann Biomed Eng，2008，36：86-101.

［37］Yiu WK，Cheng SW，Sumpio BE.Synergistic effect of cool/thaw cycles on vascular cells in an in vitro model of cryoplasty［J］.J Vasc Interv Radiol，2008，19：925-930.