PTEN、p16、突變型 p53在膀胱癌組織中的表達(dá)及意義

王新華，崔 涌，孟憲杰

(石河子人民醫(yī)院，新疆石河子832000)

膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多基因作用的復(fù)雜過程，與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關(guān)。通常認(rèn)為，遺傳學(xué)上的基因突變是腫瘤發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵事件，尤其是抑癌基因突變，與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。本研究通過檢測膀胱癌組織中抑癌基因PTEN、p16及突變型p53的表達(dá)情況，探討PTEN、p16、突變型p53在膀胱癌組織中的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2005年1月～2010年10月在石河子人民醫(yī)院行手術(shù)切除的膀胱癌患者45例，男30例、女15例，年齡38～80歲、中位年齡65歲，術(shù)前均未經(jīng)過放化療。經(jīng)病理檢查證實(shí)為膀胱癌，腫瘤分級按WHO的分級標(biāo)準(zhǔn)，低級別尿路上皮癌24例，高級別尿路上皮癌21例。取手術(shù)切除的膀胱腫瘤組織標(biāo)本作為觀察組。對照組為12例前列腺增生、膀胱結(jié)石、輸尿管囊腫患者經(jīng)膀胱手術(shù)所取正常膀胱黏膜組織。

1．2 方法

1．2．1 檢測方法 將標(biāo)本用10%中性甲醛固定，石蠟包理，連續(xù)切4μm厚切片。采用免疫組化SP法檢測組織中PTEN、p16、突變型p53的表達(dá)，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。PTEN為鼠抗人單克隆抗體，p16為鼠抗人單克隆抗體，突變型p53為鼠抗人單克隆抗體，均購自中杉生物技術(shù)公司。PBS代替一抗作陰性對照。切片脫蠟水化后，3%H2O2室溫處理10 min，抗原熱修復(fù)，血清室溫孵育10 min，滴加一抗，4℃過夜，滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育10 min，滴加辣根過氧化酶標(biāo)記的鏈親和素，室溫10 min顯色。蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色為陽性細(xì)胞，每例隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率，陽性細(xì)胞百分率≥5%為陽性，＜5%或缺乏為陰性。

1．2．2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件，PTEN、p16及突變型p53表達(dá)與各病理指標(biāo)的相互關(guān)系比較采用χ2檢驗(yàn)和四格表的精確概率法判斷。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 PTEN、p16、突變型p53在膀胱癌和正常膀胱組織中的表達(dá)比較 PTEN陽性反應(yīng)大多定位于細(xì)胞質(zhì)(見圖1)，膀胱癌和正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率分別為44．4%(20/45)和91．7%(11/12);p16陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核(見圖2)，在膀胱癌和正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率分別為42．2%(19/45)和100%(12/12);突變型p53陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核(見圖3)，在膀胱癌和正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率分別為46．7%(21/45)和16．7%(2/12)。三者在膀胱癌和正常膀胱組織中的表達(dá)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0．05)。

2．2 膀胱癌組織中PTEN、p16、突變型p53的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

2．3 PTEN、p16、突變型 p53的相關(guān)性 20例PTEN表達(dá)陽性組織中，p16表達(dá)陽性12例(60．0%);25例PTEN表達(dá)陰性組織中，p16表達(dá)陽性7例(28．0%);兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0．05)。19例p16表達(dá)陽性組織中，突變型p53表達(dá)陽性12例(63．2%);26例p16表達(dá)陰性組織中，突變型p53陽性表達(dá)9例(34．6%);兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0．05)。20例PTEN表達(dá)陽性組織中，突變型 p53表達(dá)陽性 11例(55．0%);25例PTEN表達(dá)陰性組織中，突變型p53陽性表達(dá)10例(40．0%);兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0．05)。

圖1 p16在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)(×200)

圖2 PTEN在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)(×200)

圖3 p53在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)(×200)

表1 PTEN、p16、突變型p53的表達(dá)與膀胱癌的臨床病理特征的關(guān)系(例)

3 討論

膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤，其中90% ～95%是尿路上皮癌［1］。目前，浸潤性膀胱癌仍是患者死亡的主要原因，手術(shù)切除腫瘤是膀胱癌的常規(guī)治療方法，然而術(shù)后復(fù)發(fā)率高、易進(jìn)展導(dǎo)致患者病死率升高。為了更好地監(jiān)測膀胱癌的進(jìn)展，國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量研究，但目前尚無理想的評價(jià)膀胱癌生物學(xué)行為的方法和標(biāo)記物。

PTEN是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)具有磷酸酶活性的抑癌基因，其定位于染色體10q23．3，編碼PTEN蛋白，參與氨酸磷酸酶和絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)過程，使第二信使PIP3去磷酸化，從而抑制細(xì)胞生長和凋亡，在多種腫瘤中頻發(fā)突變和缺失，其異常表達(dá)已證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2］。Tsuruta等［3］研究顯示，PTFN基因失表達(dá)與膀胱癌的分級、分期密切相關(guān)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，在腫瘤演變中起重要作用。本研究顯示，膀胱癌組織中的PTFN陽性表達(dá)率明顯低于正常膀胱組織，且隨著腫瘤惡性程度增高和臨床進(jìn)展呈明顯降低趨勢，提示PTEN基因表達(dá)缺失不僅是膀胱癌發(fā)生過程中的早期事件，在腫瘤進(jìn)展過程中也發(fā)揮著重要的作用。而PTEN陽性表達(dá)對膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)無明顯影響，與Koksal等［4］的報(bào)道一致，表明PTEN不適合作為預(yù)測膀胱癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立指標(biāo)。

p16基因是1993年由Serrano等發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，位居染色體9p21，編碼一個(gè)相對分子量16 000的多肽［5］。p16基因是直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因，p16與細(xì)胞周期蛋白D1競爭結(jié)合細(xì)胞周期素依賴性激酶4(CDK4)和(或)CDK6，特異性抑制細(xì)CDK4和CDK6活性，從而抑制增殖，是一種多腫瘤抑制基因［6］。p16是CDK的抑制因子，p16-cyclinD/CDK-PRB通路異常是腫瘤發(fā)生的早期事件［7］。本研究顯示，膀胱癌組織中的p16陽性表達(dá)率明顯低于正常膀胱組織。隨著腫瘤惡性程度的增高，p16陽性表達(dá)率明顯下降。

p53是細(xì)胞周期中重要的調(diào)節(jié)因子，通過調(diào)節(jié)p21的轉(zhuǎn)錄活性使細(xì)胞周期停留在G1～S期［8］，具有調(diào)節(jié)血管生成、促進(jìn)凋亡及調(diào)節(jié)DNA修復(fù)的作用，可抑制正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化［9］。p53基因突變在膀胱癌中很普遍，無論是p53基因突變還是p53蛋白在核內(nèi)的積聚，都在膀胱癌的進(jìn)展中起重要作用，且p53蛋白過度表達(dá)是膀胱癌高度惡性和預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一［10］。本研究顯示，隨著腫瘤惡性程度的增高，p53陽性表達(dá)率明顯升高。

本研究進(jìn)一步對PTEN、p16、突變型p53的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果表明，p16基因的表達(dá)與PTEN有相關(guān)性，隨著P16陽性表達(dá)率的下降，PTEN陽性表達(dá)率也下降，提示二者可能在腫瘤的形成過程中發(fā)揮協(xié)同作用。

綜上所述，p16、PTEN和突變型p53基因表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，抑癌基因p16、PTEN失活是膀胱癌發(fā)生的早期事件，可作為早期診斷的標(biāo)記物，隨著腫瘤惡性程度的增高，二者表達(dá)明顯下降，但二者不適合作為預(yù)測膀胱癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立指標(biāo);突變型p53蛋白的過度表達(dá)是膀胱癌高度惡性的標(biāo)志之一。

［1］張兆祥，劉宇飛．尿路上皮癌組織學(xué)變異的病理特征及診斷［J］．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008，24(6):729-34．

［2］Raftopoulou M，Etienne-Manneville S，SeIf A，et al．Regulation of cell migration by the C2 domain Of the tumor suppressor PTEN［J］．Science，2004，303(5661):1179-1181．

［3］Tsuruta H，Kishimoto H，Sasaki T，et al．Hyperplasia and carcinomas in Pten-deficient mice and reduced PTEN protein in human bladder cancer patients［J］．Cancer Res，2006，66(17):8389-8396．

［4］Koksal T，Yasar D，Dirice E，et al．Differential PTEN protein expression profiles in superficial versus invasme bladder cancers［J］．Urol Int，2005，75(2):102-106．

［5］Fischer CA，Kampmann M，Zlobec I．p16 expression in oropharyngeal cancer:its impact on staging and prognosis compared with the conventional clinical staging parameters［J］．Ann Oncol，2010，21(10):1961-1966．

［6］Ohtani N，Yamakoshi K，Takahashi A，et al．The p16INK4a-RB pathway:molecular link between cellular senescence and tumor suppression［J］．JMed Invest，2004，51(3-4):146-153．

［7］Tsuda H，Yamamoto K，Inoue T，et al．The role of p16-cyclinD/CDK-PRB pathway in the tumorigenesis of endometrioid-type endometrial carcinoma［J］．Br JCancer，2000，82(3):675-682．

［8］Mitra AP，Datar RH，Cote RJ．Molecular staging of bladder cancer［J］．BJU Int，2005，96(1):7．

［9］Vazquez A，Bond EE，Levine AJ，et al．The genetics of the p53 pathway，apoptosis and cancer therapy［J］．Nat Rev Drug Discoc，2008，7(12):979．

［10］Mitra AP，Datar RH，Cote RJ．Molecular pathways in invasive bladder canccr:new insights into mechanisms，progression，and target identification［J］．JClin Oncol，2006，24(35):5552．