百會(huì)透曲鬢對(duì)腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影響

鄒偉,劉思妤,韓海偉,蔣大偉

?

百會(huì)透曲鬢對(duì)腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影響

鄒偉1,劉思妤2,韓海偉2,蔣大偉2

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040)

通過觀察百會(huì)透刺曲鬢針刺法對(duì)腦出血急性期模型大鼠血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)的動(dòng)態(tài)變化的影響,探討頭穴透刺治療腦出血可能的作用機(jī)制。選取60只健康雄性Wistar大鼠,將其中54只隨機(jī)分為模型組、模型＋針刺組(針刺組)、模型＋茴拉西坦組(西藥組)3組。每組再分為出血后1 d、3 d和7 d3個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分配6只大鼠,制備腦出血(ICH)大鼠模型,剩余6只大鼠作為備用。采取酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中VEGF和ICAM-1水平。針刺組與模型組相比,大鼠血清內(nèi)VEGF在3 d、7 d均有顯著上調(diào)(均＜0.05)。針刺組與西藥組相比,出血后1 d,西藥組對(duì)大鼠血清內(nèi)VEGF上調(diào)顯著大于針刺組(＜0.05);出血后7 d,針刺組對(duì)大鼠血清內(nèi)VEGF上調(diào)顯著大于西藥組(＜0.05)。針刺組與模型組相比,大鼠血清內(nèi)ICAM-1在不同時(shí)間點(diǎn)均有顯著下調(diào)(＜0.05)。針刺組在出血后3 d、7 dICAM-1較西藥組有顯著下調(diào)(＜0.05)。百會(huì)透曲鬢針刺法可以調(diào)整腦出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是針刺百會(huì)透刺曲鬢治療腦出血的可能機(jī)理之一。

針刺療法;腦出血;穴,百會(huì);穴,曲鬢;腦出血;血管內(nèi)皮生長因子;細(xì)胞間黏附分子-1;大鼠

腦出血(ICH)指原發(fā)性非外傷性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血,發(fā)病率約為每年60～80/10萬,在我國約占全部腦卒中的20%～30%[1],是腦血管病中病情較重、發(fā)病較急、變化多端的疾病,病死率與致殘率均較高。因此,尋找有效的治療方法顯得格外重要。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種具有肝素活性的生長因子,可以特異性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,參與血管生成并提高血管通透性,是對(duì)血管新生有特異作用的生長因子。細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)是一種介導(dǎo)細(xì)胞相互黏附的膜表面糖蛋白,是一種促炎因子,可導(dǎo)致血管堵塞及損傷,在正常狀態(tài)下僅有低水平表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)采用自體血注入法制備腦出血大鼠模型,以針刺百會(huì)透曲鬢為干預(yù)方法,觀察針刺后腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的變化規(guī)律,從腦出血區(qū)腦血管修復(fù)與損傷的角度,探討百會(huì)透曲鬢治療腦出血的作用機(jī)制,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康清潔級(jí)雄性Wistar大鼠60只,體重為(350±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)l星期。造模前禁食12 h,禁水6 h。將其中54只隨機(jī)分為模型組、針刺組、西藥組3組。每組再分為1 d、3 d和7 d3個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分配6只大鼠,制備ICH大鼠模型,剩余6只大鼠備用。

1.2 腦出血模型的制備

參照Rosenberg等[2]報(bào)道的方法制作ICH大鼠模型,將大鼠用10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉,俯臥位固定于立體定位儀上,取頭皮正中,備皮消毒,正中切口,骨膜剝離器剝離骨膜,暴露前囟及冠狀縫,取前內(nèi)點(diǎn)旁開3.5 mm,后O.2 mm定點(diǎn),用牙科鉆鉆開直徑為1.0 mm的圓孔,深達(dá)硬腦膜表面,鼠尾乙醇消毒,距尾端3 cm處剪斷鼠尾,用微量注射器取血50mL,將微量注射器固定于立體定位儀上,沿鉆孔垂直進(jìn)針約6 mm,將未肝素化的自體血50mL以25mL/min速度推進(jìn)尾殼核,留針約2 min,緩慢出針。留針期間乙醇棉球包扎鼠尾斷端傷口,術(shù)后局部噴灑慶大霉素,用牙科水泥封閉顱骨傷口,縫合頭皮,局部皮膚采用碘酚消毒,防止局部感染影響指標(biāo)觀察。

1.3 篩選成功模型的方法

大鼠造模完成待大鼠清醒后,采用Berderson評(píng)分法[3]篩選成功模型動(dòng)物,即輕抓大鼠尾巴,提起高于桌面10 cm,正常大鼠前爪伸直。0分為無神經(jīng)功能缺損;1分為腦部病變對(duì)側(cè)腕關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)屈曲,肩內(nèi)收屈曲;2分為上述體征＋向麻痹側(cè)推阻力下降;3分為活動(dòng)時(shí)向麻痹側(cè)打圈(呈追尾狀)。以1～3分為準(zhǔn),將不符合者剔除,且增補(bǔ)相應(yīng)數(shù)量大鼠。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)方法

1.4.1 模型組

于ICH造模后,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。此外,類針刺組相同捆綁,每日30 min。

1.4.2 針刺組

于ICH造模后,大鼠捆綁固定。采用0.35 mm×25 mm毫針針刺患側(cè)百會(huì)透曲鬢穴,取穴方法參照華興邦等[4]制定的大鼠穴位圖譜,進(jìn)針0.8寸,留針30 min,期間捻轉(zhuǎn)3次,每次5 min,要求以每分鐘200轉(zhuǎn)的速度捻針。針刺患側(cè)百會(huì)透曲鬢穴,每次30 min,每日1次。此外,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。

1.4.3 西藥組

于ICH造模后,給予類針刺組相同捆綁每日30 min,并給予茴拉西坦稀釋液1 mL灌胃(按人:大鼠體重為200:1配置)治療,每日3次。

1.5 標(biāo)本的采集

各腦出血組均于發(fā)病后1 d、3 d、7 d抽取大鼠在相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)過量水合氯醛麻醉,將大鼠仰臥固定在固定板上,剪去心前區(qū)部位的被毛,用碘酒、乙醇消毒皮膚,切開動(dòng)物胸部,將注射器直接刺入心臟抽吸血液。取血至離心管后,將離心管室溫靜置1 h,后將其置于4℃冷藏過夜。于次日將離心管取出,于4℃、5000 r/min冷凍離心10 min后將上清液吸至新的離心管。

1.6 指標(biāo)測定

采取酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定VEGF和ICAM-1水平。應(yīng)用固相夾心法測定標(biāo)本中VEGF和ICAM-1水平。先將VEGF和ICAM-1和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記的HRP。在經(jīng)過溫育和洗滌,去除結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物AB,與酶結(jié)合物同時(shí)作用后產(chǎn)生顏色,顏色的深淺和樣品中的VEGF和ICAM-1的濃度成正比例關(guān)系。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。所有數(shù)據(jù)采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,各組組間差異采用兩因素方差分析,兩兩比較采用檢驗(yàn)。以＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 兩組不同時(shí)間點(diǎn)血清VEGF及ICAM-1比較 (±s)