不同品種山羊超數(shù)排卵效果比較研究

高文超， 王學(xué)主， 張勝剛， 屈 雷， 高志敏， 雷安民?， 尹?？?， 王忠林， 任寶華

1．陜西省干細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，陜西楊凌712100；

2．陜西省布爾羊良種繁育中心，陜西麟游721500；

3．陜西省陜北絨山羊工程技術(shù)研究中心，陜西榆林719000

不同品種山羊超數(shù)排卵效果比較研究

高文超1， 王學(xué)主2， 張勝剛2， 屈 雷3， 高志敏1， 雷安民1?， 尹?？?， 王忠林2， 任寶華2

1．陜西省干細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，陜西楊凌712100；

2．陜西省布爾羊良種繁育中心，陜西麟游721500；

3．陜西省陜北絨山羊工程技術(shù)研究中心，陜西榆林719000

在生產(chǎn)條件下，對2個(gè)優(yōu)良品種的29只波爾山羊和8只陜北白絨山羊供體使用不同國別生產(chǎn)的促卵泡素（FSH）實(shí)施超數(shù)排卵處理，旨在比較波爾山羊和陜北白絨山羊超數(shù)排卵效果的差異。試驗(yàn)結(jié)果顯示，同樣采用加拿大產(chǎn)FSH進(jìn)行超排處理，波爾山羊的的平均回收胚胎數(shù)（12．80±7．98枚）稍高于陜北白絨山羊（9．43±7．16枚）（P＞0．05）。結(jié)果還顯示，輸卵管采胚法可以獲得比子宮角采胚法更高的可用胚率（P＞0．05），但前者對處理的供體術(shù)后的發(fā)情率有一定的不良影響，所以在山羊超數(shù)排卵中優(yōu)先采用子宮角采胚法。

山羊；超數(shù)排卵；胚胎移植；波爾山羊；陜北白絨山羊

胚胎移植（embryo transfer）是指將早期胚胎移植到雌性動物的子宮或輸卵管內(nèi)的適當(dāng)部位，通過妊娠孕育出胎兒［1］，即俗稱的“借腹懷胎”。超數(shù)排卵是胚胎移植技術(shù)中的核心技術(shù)環(huán)節(jié)，是目前獲得大量胚胎最有效的方法。正常情況下，母畜卵巢中大部分卵母細(xì)胞（99．9%）在發(fā)育至某一階段即退化閉鎖，僅有少數(shù)（0．1%）發(fā)育至成熟排卵［2］，采用超排技術(shù)可使排卵數(shù)增加10～20倍［3］。通過超數(shù)排卵處理，不僅可以開發(fā)利用母畜卵巢上的卵母細(xì)胞資源，而且可以提高優(yōu)良母畜的繁殖能力，對加速品種改良、提高動物的繁殖率都具有重要意義［4，5］。

現(xiàn)階段，我國對波爾山羊的超數(shù)排卵研究已相對成熟［4，6］，而對陜北白絨山羊的研究還處于起步階段［7］。本研究旨在探索不同品種山羊超數(shù)排卵效果的差異，為提高山羊胚胎移植效率提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2012年8月21日開始，2013年4月15日結(jié)束。本次試驗(yàn)地點(diǎn)為位于陜西省麟游縣的“陜西省布爾羊良種繁育中心”和陜西省榆陽區(qū)榆林學(xué)院的“陜西省絨山羊工程技術(shù)研究中心”。

1．2 試驗(yàn)羊選擇

供體母羊，為由南非引進(jìn)的純種波爾山羊和我國的陜北白絨山羊。波爾山羊挑選生長發(fā)育正常，膘情良好，沒有生殖系統(tǒng)疾病的母羊29只，隨機(jī)分成3組。陜北白絨山羊選擇產(chǎn)絨質(zhì)量較好，七八成膘情，無生殖道疾病，營養(yǎng)狀況良好，發(fā)育成熟的未經(jīng)產(chǎn)的母羊8只，歸為1組。

種公羊，分別選擇純種波爾山羊和產(chǎn)絨質(zhì)量較好、性欲旺盛、精液品質(zhì)好的健康陜北白絨山羊。

試情公羊，分別選健康無病、性欲較好的成年純種波爾山羊和陜北白絨山羊。

1．3 試驗(yàn)藥品

促卵泡素（FSH）分別為加拿大貝爾尼斯動物衛(wèi)生有限公司（生產(chǎn)批號：N111021）和中國科學(xué)院生產(chǎn)。孕酮陰道栓（CIDR）為新西蘭Pharmacia＆Upjohn Pty．Ltd．公司（生產(chǎn)批號：N111021）生產(chǎn)。促黃體釋放激素（LHRH?A3）分別為寧波市三生藥業(yè)有限公司（生產(chǎn)批號：20110901）和上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所（生產(chǎn)批號：20110302）生產(chǎn)。氯前列烯醇（PG）分別為寧波市三生藥業(yè)有限公司（生產(chǎn)批號：120604）和上海市計(jì)劃生育研究所（生產(chǎn)批號：20120101）生產(chǎn)。

1．4 供體山羊超數(shù)排卵

1．4．1 波爾山羊供體 采用CIDR＋FSH＋PG方法。在發(fā)情周期的任意一天，陰道埋置第1個(gè)新西蘭產(chǎn)CIDR，填入孕酮栓當(dāng)天記為第0 d，第7 d換第2個(gè)CIDR，第11～14 d每日早晚分2次（間隔時(shí)間相等）注射FSH（注射的第1 d每次3．5 mL，第2 d每次2．0mL，第3 d每次1．5mL，第4 d每次0．5 mL，注射總量為15mL／只），第7次注射FSH同時(shí)注射PG 2mL／只，最后一次注射FSH時(shí)取出CIDR。取CIDR后第2d開始試情。發(fā)情供體羊進(jìn)行第1次配種并同時(shí)注射LH 100 IU。發(fā)情母羊采用種公羊本交進(jìn)行配種，每日早中晚各1次，直至發(fā)情結(jié)束。波爾山羊供體分為3組，第1組6只母羊所用FSH均為加拿大動物健康公司生產(chǎn)（以下簡稱：加拿大產(chǎn)）；第2組10只母羊所用FSH均為中國科學(xué)院動物研究所生產(chǎn)（以下簡稱：中科院產(chǎn)）；第3組13只母羊早上注射的FSH為加拿大產(chǎn)，下午注射的 FSH為中科院產(chǎn)（見表1）。

表1 供體山羊的超排方案Table 1 The superovulation program of the donors．

1．4．2 陜北白絨山羊供體 采用CIDR＋FSH＋PG方法。在發(fā)情周期的任意一天，陰道埋置新西蘭產(chǎn)CIDR，放栓當(dāng)天記為“第0 d”，第9～12 d每日早晚分2次（間隔時(shí)間相等）等量注射加拿大產(chǎn)FSH（注射的第1 d每次2．0 mL，第2 d每次1．5 mL，第3 d每次1．0 mL，第4 d每次0．5 mL，注射總量為10mL／只），第7次注射FSH同時(shí)注射PG 2mL／只，最后一次注射FSH時(shí)取出孕酮栓，第13 d開始試情，發(fā)情供體羊進(jìn)行第1次配種并同時(shí)注射LH 100IU。發(fā)情的供體母羊采用種公羊本交進(jìn)行配種，每日早晚各1次，直至發(fā)情結(jié)束（見表1）。

1．5 胚胎的采集及胚胎鑒定

在供體發(fā)情配種后，波爾山羊供體采用子宮回收法采胚［8］，陜北白絨山羊供體采用輸卵管回收法采胚［9］。根據(jù)胚胎的形態(tài)特征將胚胎分為A（優(yōu)）、B（良）、C（中）、D（差）四個(gè)等級，其中，A、B級為可用胚胎［10］。

1．6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

對山羊同期發(fā)情率、平均獲胚數(shù)、平均可用胚數(shù)與獲胚率等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；統(tǒng)計(jì)各測定指標(biāo)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和標(biāo)準(zhǔn)誤，采用t檢驗(yàn)法分析組間差異。應(yīng)用數(shù)據(jù)包 SPSS 16．0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 不同品種山羊的超數(shù)排卵效果比較

利用CIDR＋FSH＋PG法對29只波爾山羊供體和8只陜北白絨山羊供體進(jìn)行超排，結(jié)果見表2。由表可見，將波爾山羊分為3組，分別采用不同來源的FSH，各組部回收胚數(shù)、可用胚數(shù)及可用胚率均無顯著差異（P＞0．05），說明利用CIDR＋FSH＋PG法，不論使用加拿大產(chǎn)FSH，還是中科院產(chǎn)FSH，或是兩者早晚結(jié)合使用，都可以達(dá)到超排效果。

對6只波爾山羊供體和8只陜北白絨山羊供體，分別使用加拿大產(chǎn)FSH進(jìn)行超排處理后，從排卵的結(jié)果看，波爾山羊與陜北白絨山羊的平均回收胚胎數(shù)分別為12．80±7．98枚和9．43±7．16枚，平均可用胚數(shù)分別為12．00±7．97枚和8．57± 6．24枚，波爾山羊的排卵效果稍好于陜北白絨山羊，但差異不顯著（P＞0．05）。波爾山羊和陜北白絨山羊的平均回收胚胎數(shù)分別為13．13±7．03枚和9．43±7．16枚，兩者的平均可用胚胎數(shù)分別為11．04±6．77枚和8．57±6．24枚，兩者的可用胚率分別為84．84%和91．48%，以上三個(gè)結(jié)果分別相比均差異不顯著（P＞0．05）。該結(jié)果說明，CIDR＋FSH＋PG法對陜北白絨山羊和波爾山羊的超排同樣有效。

國內(nèi)對不同品種山羊山羊的超排進(jìn)行了較多的研究［4，8，9］。趙霞［8］采用同種FSH比較了波爾山羊和內(nèi)蒙古白絨山羊的超數(shù)排卵效果，結(jié)果顯示，波爾山羊總獲得的平均可用胚胎數(shù)（18．35± 4．45枚）顯著高于內(nèi)蒙古白絨山羊所獲得的平均可利用胚胎數(shù)（12．4±5．74枚）（P＜0．05），說明波爾山羊?qū)に氐姆磻?yīng)比白絨山羊的反應(yīng)敏感。而本研究中，陜北白絨山羊?qū)に氐拿舾行耘c波爾山羊相當(dāng)，超排的效果也沒有顯著差別，目前采用的超排手段可以獲得較高的可用胚數(shù)。同時(shí)本試驗(yàn)結(jié)果還顯示，陜北白絨山羊的超排效果雖比波爾山羊的稍低，但其排卵效果仍比正常情況增加了5～10倍。

表2 供體山羊的超數(shù)排卵結(jié)果Table 2 The results of donors goat superovulation．

2．2 不同采胚方法對供體回收胚胎效果的影響

常用的采胚方法有子宮角回收法和輸卵管回收法。林峰等［10］對波爾山羊的胚回收效率的研究結(jié)果顯示，輸卵管采胚法的獲胚數(shù)與可用胚數(shù)均顯著高于子宮角采胚法（P＜0．05），胚胎回收率極顯著高于后者（P＜0．01），但子宮角移植法獲得的受體羊的的妊娠率及產(chǎn)羔率極顯著的高于輸卵管移植法（P＜0．01）。本研究采用不同采胚方法回收胚胎，平均回收數(shù)、平均可用胚數(shù)和可用胚率無顯著差異，說明2種采胚方法對2個(gè)品種的山羊都是有效的。由于子宮角的腔體大，肌肉層厚，一般不會出現(xiàn)黏連，即使輕度的黏連也可以在妊娠中因子宮的擴(kuò)張而得以恢復(fù)，因此子宮角采集法得到的可用胚因胚齡較大，發(fā)育完整，質(zhì)量較好，移植受胎率較高，且生殖器官發(fā)生粘連的比例低于輸卵管法。而輸卵管本身很細(xì)小，容易受到損傷而發(fā)生黏連，發(fā)生黏連的部位多在輸卵管和卵巢之間，會影響卵子的正常接收與運(yùn)行，甚者會導(dǎo)致不育。所以建議，在山羊胚胎移植中，優(yōu)先選擇子宮角采胚法回收胚胎。

表3 不同采胚方法對供體山羊超排效果的影響Table 3 The effect of donors superovulation by different collectting embryosmethods．

3 討論

不同品種的山羊的超排效果有種間差異［11，12］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，波爾山羊的超數(shù)排卵效果稍好于陜北白絨山羊，前者的平均回收胚胎數(shù)與平均可用胚胎數(shù)均約是后者的1．3倍?，F(xiàn)階段，我國對波爾山羊的超數(shù)排卵研究已相對成熟，而對陜北白絨山羊的研究還處于起步階段。本研究可為陜北白絨山羊的超數(shù)排卵研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

利用輸卵管采胚法可以比子宮角采胚法回收較多的胚胎［10，13］，但是對輸卵管易造成黏連，影響供體羊以后的使用，而子宮角不易造成黏連，即使發(fā)生子宮角黏連，也可以通過使供體羊妊娠的方式來緩解，所以超排采胚時(shí)建議利用子宮角采胚法。

［1］ Hasler JF．The current status and future of commercial embryo transfer in cattle［J］．Anim．Reprod．Sci．，2003，79（3-4）：245-264．

［2］ 王蒂．細(xì)胞工程學(xué)［M］．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003．

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［4］ 陳玉霞，孫克寧，林 峰，等．不同藥物組合對波爾山羊超數(shù)排卵效果的影響研究［J］．家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，3：54 -56．

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Study on Superovulation of Different Varieties of Goats

GAOWen?chao1，WANG Xue?zhu2，ZHANG Sheng?gang2，QU Lei3，GAO Zhi?min1，LEIAn?min1?，YIN Hai?ke2，WANG Zhong?lin2，REN Bao?hua2
1．Shaanxi Center of Stem Cells Engineering＆Technology，Shaanxi Yangling 712100，China；
2．Boer Goat Breeding Center ofShaanxi Province，Shaanxi Linyou 721500，China；
3．Engineering Technical Research Centre of Shaanbei cashmere goat，Shaanxi Yulin 719000，China

To compare the Boer goat and Shaanbeiwhite cashmere goat superovulation effect in the commercial application，29 Boer goats and 8 Shaanbei white cashmere goats were superovultated with different FSH made in different countries．Superovulatory treatmentwas performed using Ca?FSH in Boer goats and Shaanbei white cashmere goats．The total number of recovered embryos per does was 12．80±7．98 for Boer goats，which was higher than that of Shaanbei white cashmere goats（9．43±7．16），butwithoutsignificant difference（P＞0．05）．The results also showed that the estrous rate of the treated donor after operated were badly influenced by the collection method from oviduct．So the collection method of the uterine horn ought to be preferentially used in goat．

goat；superovulation；embryo transfer；Boer goat；Shaanbeiwhite cashmere goat

10．3969／j．issn．2095?2341．2013．05．08

2013?06?13；接受日期：2013?07?23

國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)（2011ZX008008?002）資助。

高文超，碩士研究生，主要從事山羊同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究。E?mail：gaowenchao2011＠163．com。?通信作者：雷安民，副研究員，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事哺乳動物生殖生物學(xué)和胚胎生物技術(shù)研究。E?mail：anminleiryan＠nwsuaf．edu．cn