健脾消積顆粒對(duì)脾虛大鼠MTL、GAS影響的實(shí)驗(yàn)研究

李 紅，葛金文，蔣孟良，謝小全

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙410208；2.長(zhǎng)沙九芝堂股份有限公司，湖南 長(zhǎng)沙410007）

目前，由于生活水平不斷提高，營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，加之工作繁忙、缺少鍛煉，導(dǎo)致脾胃功能虛弱，消化不良，食欲不振，脘腹飽脹等病癥的人越來(lái)越多[1]。健脾消積顆粒由補(bǔ)氣健脾的四君子湯[2-3]——人參、白術(shù)、茯苓、甘草，消食化積的三仙[4-5]——山楂、麥芽、神曲及行氣導(dǎo)滯的陳皮等藥組成。具有健脾和胃、消食化積的功能，對(duì)脾胃虛弱之不思飲食、納差、消化不良、食欲不振、脘腹飽脹、大便溏瀉、腸鳴腹痛、神疲乏力，身體羸瘦等癥狀具有良好效果。為探討其健脾消積的作用機(jī)制，對(duì)其進(jìn)行了脾虛大鼠胃動(dòng)素（MTL）、胃泌素（GAS）影響的實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將方法與結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 健脾消積顆粒：湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院自制，批號(hào)：20100312。取其適量加純凈水配成含生藥39.6%、79.2%和158.4%的藥液供動(dòng)物灌胃使用。健脾消食丸：北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào)：20090906。劑量1次6 g，1日2次。試驗(yàn)時(shí)，取健脾消食丸適量，用粉粹機(jī)粉粹成細(xì)粉，加純凈水配成44%混懸液，供大鼠灌胃使用。

1.1.2 試劑 GAS試劑盒：北京福瑞生物工程公司，批號(hào)20100802；MTL放免藥盒：北京東雅生物技術(shù)研究所，批號(hào)20101106；乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na、AR）：中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)2010910；羥甲基纖維素鈉：上?；瘜W(xué)試劑公司分裝廠，批號(hào)20110210；抑肽酶：蘭州大綠利生物化學(xué)制藥有限公司，批號(hào)20100408。

1.1.3 儀器 GC1500型γ-放射免疫計(jì)數(shù)器：安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；MP51001型電子稱(chēng)：上海橫平科學(xué)儀器有限公司；GL-20M高速冷凍離心機(jī)：賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：鞏義市英峪予華儀器廠；TW-1A型旋片式真空泵：溫嶺市挺威真空設(shè)備有限公司；SK3300A型粉碎機(jī)：上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司。

1.1.4 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)于上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXKA(滬)2008-0016。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，空調(diào)恒溫，定時(shí)換氣，飼料、飲水、籠具、墊料符合SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)要求。

1.2 方法

1.2.1 生大黃的制備 稱(chēng)取生大黃200 g加6倍量的水浸泡1 h，煎煮30 min，濾過(guò)，藥渣再加5倍量的水煎煮25 min，濾過(guò)，合并2次濾液，置水浴上濃縮至100 mL，得1 mL含2 g生藥（1∶2）的藥液，供大鼠灌胃造模用。

1.2.2 動(dòng)物分組 取健康SD大鼠60只，先按♀♂分層，再按體質(zhì)量從輕到重排序，按隨機(jī)區(qū)組分組法分為6組，分別為（1）組：正常組，（2）組：模型組，（3）～（6）組：健脾消積顆粒高、中、低劑量組（以下分別稱(chēng)健脾消積低、健脾消積中、健脾消積高組）、健脾消食丸組。大鼠均為10只/組。

1.2.3 劑量的確定 按60 kg成人體表面積計(jì)算出大鼠等效劑量，再按1∶2遞增為中劑量組與大劑量組[6]，分別為3.96、7.92、15.84 g/kg；健脾消食丸組按中劑量給藥，為4.4 g/kg。

1.2.4 造模及給藥方法 除正常組灌胃純凈水外，其余各組灌胃200%的生大黃藥液4 mL/（d·只），連續(xù)14 d[7]。造模成功后，按照“1.2.3”中所確定劑量，從第15天起空白與模型組繼續(xù)灌服（ig）蒸餾水，給藥組分別灌39.6%、79.2%、158.4%的健脾消積藥液，健脾消食丸組灌44%的健脾消食丸藥液，灌胃容積均為1 mL/100 g體質(zhì)量，連續(xù)14 d。于末次灌胃后1 h摘取眼球取血2 mL，置于一干燥試管中，4℃離心15 min（3 500 r/min）；另取2 mL血，于加有10%乙二胺四乙酸二鈉和抑肽酶各30μL的試管內(nèi)，充分混勻，4℃離心10 min（3 500 r/min），將血清和血漿放入-20℃冰箱內(nèi)保存，備測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般指標(biāo)的觀察 在實(shí)驗(yàn)中觀察各組動(dòng)物的毛色、活動(dòng)情況、糞便等指標(biāo)。

1.3.2 MTL值測(cè)定 于洗凈的微孔酶標(biāo)板設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔與樣品孔，于標(biāo)準(zhǔn)孔加入640、320、160、80、40、20 pg/mL MTL標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣品孔加入樣本稀釋液40μL，再加血漿10μL，隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次，每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15 min，每孔加入終止液50μL，15 min內(nèi)，以空白空調(diào)零，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.3.3 GAS值測(cè)定 于洗凈的微孔酶標(biāo)板設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔與 樣品 孔，于標(biāo) 準(zhǔn) 孔加入80、40、20、10、5 ng/mL GAS標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣品孔加入樣本稀釋液40μL，再加血清10μL，用封板膜封板后置37℃溫育30 min。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外，同上溫育，同上洗滌，每孔先加入顯色劑A 50μL，再加入顯色劑B 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 min，每孔加終止液50μL，同上測(cè)定、計(jì)算各樣品的實(shí)際濃度。注意：加10μL血漿、血清時(shí)盡量將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 對(duì)一般指標(biāo)的影響

模型組大鼠毛色變黃、枯燥、無(wú)光澤，給藥組毛色幾乎恢復(fù)正常，說(shuō)明脾虛對(duì)動(dòng)物皮毛色澤有影響，健脾消積顆粒對(duì)脾虛大鼠的皮毛色澤有恢復(fù)作用。另脾虛小鼠排便次數(shù)、稀便數(shù)、稀便率、糞粒大小顯著增加，給藥后均有所降低，說(shuō)明健脾消積顆粒對(duì)脾虛小鼠胃腸排泄有調(diào)節(jié)作用。

2.2 健脾消積顆粒對(duì)血漿MTL、GAS的影響

造模后脾虛大鼠MTL水平顯著降低，模型組與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；健脾消積高劑量組與模型組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），健脾消積低、中劑量組、健脾消食丸組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

健脾消積顆粒對(duì)大鼠血清GAS的影響，造模后脾虛大鼠血清GAS水平顯著降低；模型組與正常組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。健脾消積高組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），健脾消積顆粒低、中劑量組、健脾消食丸組與模型組比較（P＜0.05），從數(shù)據(jù)來(lái)看高劑量組基本恢復(fù)至正常。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 健脾消積顆粒對(duì)脾虛大鼠MTL、GAS的影響（±s，n＝10）

表1 健脾消積顆粒對(duì)脾虛大鼠MTL、GAS的影響（±s，n＝10）

注：與正常組比較**P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。

組 別正常組模型組健脾消積低健脾消積中健脾消積高健脾消食丸劑量（g/kg）純凈水純凈水3.96 7.92 15.84 4.4 MTL（pg/mL）206.42±22.84 167.25±18.13**178.57±23.45 181.52±11.39△194.28±10.09△△181.17±9.24△GAS（pg/mL）52.01±3.07 44.06±3.13**49.46±3.42△49.72±4.66△50.63±2.89△△48.75±2.67△

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為：脾主運(yùn)化，運(yùn)化水谷精微，胃主受納、腐朽。脾胃虛弱導(dǎo)致不思飲食、脘腹飽脹、泄瀉、腸鳴腹痛、形體消瘦、少氣懶言、四肢無(wú)力。健脾消積顆粒，是臨床治療脾胃虛弱癥的經(jīng)驗(yàn)方。該方由人參、白術(shù)、茯苓、山楂、麥芽、神曲、陳皮、甘草八味中藥組成，方中人參補(bǔ)脾益肺、益氣生津?yàn)榫?；白術(shù)補(bǔ)脾益氣與被稱(chēng)為消食化積佳品的“三仙（山楂、麥芽、神曲）”配伍，是為臣藥；茯苓利水滲濕，健脾止瀉；陳皮理氣健脾，降逆止嘔，輔佐人參白術(shù)補(bǔ)脾之功與三仙受納、腐熟之能；甘草補(bǔ)中益氣、調(diào)和諸藥為使藥?？v觀全方補(bǔ)脾藥和健胃藥相互配伍，補(bǔ)而不滯，攻而不過(guò)，雙管齊下，相得益彰，共奏健脾和胃、消食化積之功效。

從中醫(yī)理論來(lái)看，影響脾的運(yùn)化升清功能，飲食消化吸收功能不良，氣血生化乏源，氣不足則氣推動(dòng)乏力，故見(jiàn)各種胃腸運(yùn)動(dòng)減慢[8]。而MTL可明顯促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)和胃電活動(dòng)，且作用持久；GAS也有明顯的促進(jìn)胃排空的作用[9]。本實(shí)驗(yàn)表明：健脾消積顆?？墒菇档偷腗TL、GAS基本恢復(fù)至正常水平，證明健脾消積顆粒通過(guò)調(diào)節(jié)MTL、GAS水平從而使脾虛動(dòng)物紊亂的胃腸運(yùn)動(dòng)得以恢復(fù)，而且，健脾消積顆粒的療效明顯優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥——健脾消食丸，且劑量與效應(yīng)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。

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