MACC1基因干擾對卵巢上皮性癌細胞增殖和順鉑耐藥的影響

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450052

MACC1基因干擾對卵巢上皮性癌細胞增殖和順鉑耐藥的影響

鄧佑興 史惠蓉 李霞 張瑞濤

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450052

背景與目的：有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)在多種腫瘤中高表達，其通過調(diào)節(jié)細胞外信號激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)1/2信號通路影響腫瘤細胞的增殖、凋亡等過程。而對于MACC1在卵巢癌中的作用研究甚少。本研究應(yīng)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)逆轉(zhuǎn)卵巢上皮性癌耐藥細胞中MACC1基因的表達，并探討MACC1基因表達與卵巢癌細胞順鉑耐藥的關(guān)系。方法：前期設(shè)計的針對MACC1 mRNA的小發(fā)卡狀RNA(shRNA)轉(zhuǎn)染卵巢癌順鉑耐藥細胞系SKOV3/DDP細胞，RT-PCR及Western blot檢測MACC1 mRNA和蛋白表達的變化；四甲基偶氮唑藍法檢測轉(zhuǎn)染前后SKOV3/DDP細胞的增殖及對順鉑的半數(shù)抑制濃度(IC50)，流式細胞儀測定順鉑處理前后各組細胞凋亡率。Western blot檢測ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的變化。實驗分3組：空白組為未經(jīng)處理的SKOV3/DDP細胞，陰性對照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒p-super-EGFP-1，實驗組轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒p-super-EGFP-MACC1 shRNA。結(jié)果：與其他兩組細胞相比，實驗組細胞MACC1 mRNA及蛋白降低，對順鉑的IC50較低(26.094 vs 47.501/47.089 μmol/L，P＜0.05)，p-ERK1/2蛋白表達下降(0.3979 vs 0.6712/0.6681，P＜0.05)，順鉑處理前、后凋亡率增加(1.32% vs 0.66%/0.48%，P＜0.05；36.70% vs 18.53%/16.60%，P=0.000)。結(jié)論：MACC1基因表達下調(diào)能在一定程度上恢復(fù)SKOV3/DDP細胞對順鉑的敏感性，可能與ERK1/2通路有關(guān)。

結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1；卵巢癌；順鉑；細胞外信號激酶

已有研究［1-2］表明，結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)可作為細胞外信號激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)1/2信號通路的上游調(diào)控因子，而卵巢癌的順鉑耐藥與ERK1/2信號通路密切相關(guān)。因此，推測MACC1基因可能參與卵巢癌順鉑耐藥的調(diào)控。本研究旨在通過RNAi技術(shù)沉默人卵巢癌耐藥細胞系SKOV3/ DDP細胞中MACC1表達，并觀察MACC1基因干擾前后卵巢癌順鉑耐藥細胞相關(guān)生物學(xué)行為的變化，探討MACC1與卵巢癌細胞順鉑耐藥的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 主要材料

人卵巢癌細胞系SKOV3/DDP購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細胞庫；真核熒光表達載體p-super-EGFP-1由鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室張欽憲教授惠贈；重組質(zhì)粒p-super-EGFP-MACC1 shRNA由本課題組前期構(gòu)建；RevertAid Frist Strand cDNA購自加拿大Formentas公司；DNA&siRNA InterferinTM轉(zhuǎn)染試劑購于美國Polyplus Transfection公司；MTT購自Sigma公司；細胞培養(yǎng)試劑購自Hyclone公司；順鉑購自云南生物谷制藥公司；Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒購自凱基公司；兔抗人MACC1抗體購自Abcam公司、兔抗人β-actin抗體及羊抗兔單克隆IgG購自CST公司，兔抗人ERK1/2、p-ERK1/2抗體購自北京博奧森公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

SKOV3/DDP細胞在含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)、傳代。培養(yǎng)條件為37 ℃，CO2體積分數(shù)為5%，飽和濕度。分為3組：空白組為未經(jīng)處理的SKOV3/DDP細胞，陰性對照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒p-super-EGFP-1，實驗組轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒p-super-EGFP-MACC1 shRNA。重組質(zhì)粒按北京康為世紀有限公司質(zhì)粒小量提取試劑盒說明進行提取，并利用Nano Drop 2000軟件鑒定質(zhì)粒純度和濃度。采用DNA&siRNA InterferinTM轉(zhuǎn)染試劑進行細胞轉(zhuǎn)染，具體操作按說明書進行。轉(zhuǎn)染48 h后，以含800 μg/mL G418的選擇培養(yǎng)液進行篩選。

1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)

檢測SKOV3/DDP細胞中MACC1 mRNA的表達：TRIzol分別提取3組細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，以其為模板分別以MACC1、β-actin cDNA上、下游引物分管擴增目的基因及內(nèi)參對照，MACC1上游引物序列：5’-CCTTCGTGGTAATA ATGCTTCC-3’，下游引物序列：5’-AGGGCTTCCATTGTATTGAG GT-3’，產(chǎn)物696 bp；β-actin上游引物序列：5’-GGCGGCACCACCATGTACCCT-3’，下游引物序列：5’-AGGGGCCGGAC TCGTCATACT -3’，產(chǎn)物220 bp。MACC1引物參照參考文獻［9］引物序列，由生工生物(上海)工程技術(shù)有限公司合成；β-actin引物購自寶生物工程(大連)有限公司。PCR反應(yīng)條件：94 ℃3 min，94 ℃ 30 s，53 ℃ 30 s和72 ℃ 30 s，循環(huán)35次，最后，72 ℃ 5 min，4 ℃終止。PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，GENE GENIUS凝膠成像系統(tǒng)中觀察和拍照，ImageJ軟件分析處理PCR圖像，以MACC1與β-actin灰度值的比值代表MACC1 mRNA的相對表達水平。實驗重復(fù)3次。

1.2.3 Western blot檢測MACC1、ERK1/2及p-ERK1/2 蛋白表達

分別提取3組細胞總蛋白，Bradford法行蛋白定量。蛋白變性后，10%SDS-PAGE電泳，45 V恒壓濕轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶粉TBST封閉2 h，加入一抗(兔抗人MACC1 1∶500，兔抗人ERK1/2 1∶100，兔抗人p-ERK1/21∶100，兔抗人β-actin 1∶1 000)，4 ℃過夜，加入二抗(羊抗兔1∶1 000)室溫1 h，ECL化學(xué)發(fā)光法顯色。采用ImageJ軟件分析特異性蛋白條帶灰度值，β-actin設(shè)為內(nèi)參，以目標蛋白與β-actin條帶灰度值的比值代表目標蛋白的相對表達水平。

1.2.4 MTT法檢測細胞增殖

3組細胞以5×103/孔傳至96孔板，于37 ℃，CO2體積分數(shù)為5%的條件下培養(yǎng)。每組設(shè)6復(fù)孔，結(jié)果取均值。分別培養(yǎng)24、48、72 h后加入5 mg/mL MTT 10 μL，繼續(xù)溫育4 h。棄上清液，加入二甲亞砜100 μL，搖床振蕩10 min，用Bio-Rad酶標儀測定490 nm處的吸光度(A)值，繪制細胞增殖曲線。

1.2.5 MTT法檢測細胞對順鉑耐藥性

本實驗所用順鉑終濃度為10、20、30、40、50、60 μmol/L，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔。加藥培養(yǎng)48 h后測定A值。計算不同濃度順鉑對5組細胞的抑制率，細胞抑制率=1-實驗組A/空白組A。應(yīng)用Probit概率回歸法計算IC50值。

1.2.6 流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞凋亡

測定未加順鉑和順鉑用量均為未轉(zhuǎn)染組細胞的IC50時，各組細胞的凋亡率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，所得數(shù)據(jù)均以表示，多組比較采用方差分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多個樣本均數(shù)兩兩比較采用LDS法方差分析。檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 轉(zhuǎn)染前后各組細胞MACC1 mRNA的表達

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后，空白組、陰性實驗組、實驗組中MACC1 mRNA的表達水平分別是0.519 4±0.009 3、0.509 8±0.005 7、0.081 4±0.002 8，實驗組明顯低于其他兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8796.3，P＜0.05)；而陰性對照組和空白組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05，圖1)。

圖 1 RT-PCR鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前后3組細胞MACC1 mRNA表達效果Fig. 1 MACC1 mRNA expressions in each group by RT-PCR

2.2 轉(zhuǎn)染前后各組細胞MACC1、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表達

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后，實驗組與其他兩組相比，MACC1蛋白表達水平降低，p-ERK1/2蛋白表達水平降低，而ERK1/2蛋白在3組細胞中表達的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖2，表1)。

圖2 Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后3組細胞MACC1、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達Fig.2 MACC1, ERK1/2 and p-ERK1/2 protein expression in each group by Western blot

表 1 各組細胞MACC1、ERK1/2和 p-ERK1/2表達Tab.1 MACC1, ERK1/2 and p-ERK1/2 protein expression in each group

2.3 轉(zhuǎn)染前后各組細胞增殖情況

據(jù)MTT檢測法顯示，實驗組細胞的增殖速度明顯低于陰性對照組和空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，圖3)。

2.4 轉(zhuǎn)染前后各組細胞順鉑耐藥性變化

據(jù)MTT檢測法顯示，實驗組對順鉑的IC50為(26.094±0.911)μmol/L，分別低于空白組和陰性對照組［分別為(47.501±0.401)和(47.089±0.451)μmol/L］，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1 340.2，P＜0.05，圖4)。

圖 3 3組細胞的生長曲線Fig. 3 The growth curve of cells in each group

圖 4 3組細胞的順鉑敏感性Fig. 4 The chemosensitivity to cisplatin in each group

2.5 細胞凋亡率的變化

順鉑處理前、后實驗組細胞的凋亡率高于空白組和陰性對照組(F=22.723，P＜0.05；F=256.568，P=0.000)。順鉑處理前實驗組細胞凋亡率高于空白組及陰性對照組(P=0.001； P=0.002)；順鉑處理后實驗組細胞凋亡率也高于空白組及陰性對照組(P=0.000；P=0.000)；順鉑處理前后，陰性對照組和空白組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.224；P=0.096，圖5，表2)。

圖 5 MACC1沉默對SKOV3/DDP細胞凋亡率的影響Fig. 5 The effect of MACC1 silencing on the apoptosis rate in SKOV3/DDP

表 2 MACC1沉默對SKOV3/DDP細胞凋亡率(%)的影響Tab. 2 The effect of MACC1silencing on the apoptosis rate (%) in SKOV3/DDP

3 討 論

腫瘤的形成因素之一是細胞內(nèi)原癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活，使細胞信號傳導(dǎo)通路的失衡、細胞周期調(diào)控機制紊亂，而導(dǎo)致細胞過度增生和凋亡減少［3］。MACC1最初是Stein等［1］應(yīng)用qRT-PCR和數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)的一個與結(jié)腸癌密切相關(guān)的新基因，定位于人類染色體7p21.1，包含7個外顯子和6個內(nèi)含子，編碼一個含852個氨基酸殘基的蛋白。MACC1是細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)/ c-Met信號傳導(dǎo)通路的重要調(diào)節(jié)因子，在細胞生長、細胞遷移及細胞侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著極其重要的作用［4-5］。

近年研究表明，MACC1在多種惡性腫瘤(如結(jié)直腸癌、肝癌、乳腺癌)中常高表達，可作為標志轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷的指標［6-8］，提示MACC1的高表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)［9］，上皮性卵巢癌組織中存在MACC1的異常高表達；并成功構(gòu)建了MACC1特異性shRNA真核表達載體，轉(zhuǎn)染卵巢癌OVCAR3細胞使MACC1基因表達降低后，檢測到細胞增殖能力減弱、凋亡增加。Gao等［10］在肝細胞癌Huh7中沉默MACC1基因后，細胞的遷移、侵襲能力減弱。Pichorner等［11］構(gòu)建結(jié)直腸癌裸鼠移植瘤模型，轉(zhuǎn)染MACC1 shRNA后，移植瘤生長速度減慢，轉(zhuǎn)移能力減弱，說明在體內(nèi)試驗中MACC1抑制能顯著抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。本實驗應(yīng)用RNAi技術(shù)將重組質(zhì)粒p-super-EGFP-MACC1 shRNA轉(zhuǎn)染人卵巢癌耐藥細胞SKOV3/DDP，采用MTT法觀察MACC1基因沉默后細胞的增殖和對順鉑敏感性的變化，流式細胞術(shù)檢測細胞早期凋亡率。發(fā)現(xiàn)MACC1沉默的細胞增殖明顯減慢，早期凋亡率增加，對順鉑的IC50降低，敏感性提高。以上研究均提示，在腫瘤細胞中抑制MACC1基因的表達，能使腫瘤細胞生長、侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱。

MACC1對腫瘤細胞的這種調(diào)節(jié)作用可能是通過一系列細胞通路完成的。其中，ERK1/2信號通路可能發(fā)揮重要作用。ERK1/2信號通路是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的重要成員，能磷酸化激活多種轉(zhuǎn)錄因子和蛋白激酶，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，與細胞增殖、分化、細胞形態(tài)維持、細胞凋亡和細胞的惡變等多種生物學(xué)反應(yīng)有關(guān)［12-13］。近來，許多研究者將ERK通路視為腫瘤治療的重要靶點，如曹等發(fā)現(xiàn)應(yīng)用ERK1/2通路抑制劑PD98059可增加乳腺癌細胞對表柔比星的敏感性［14］。探討MACC1與ERK1/2通路的關(guān)系時，Stein等［1］研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌細胞中，轉(zhuǎn)染外源性MACC1后，HGF介導(dǎo)的結(jié)腸癌細胞播散作用可被ERK1/2通路抑制劑PD98059或UO126抑制，提示外源性MACC1高表達可激活ERK1/2信號通路。Wang等［15］在胰腺癌細胞中應(yīng)用RNAi技術(shù)沉默MACC1基因后，發(fā)現(xiàn)胰腺癌細胞增殖和遷移能力減弱，對吉西他濱敏感性提高，p-ERK1/2蛋白表達降低。本實驗也發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌耐藥細胞中抑制MACC1基因表達后，不僅細胞增殖、凋亡能力及順鉑敏感性發(fā)生變化，p-ERK1/2蛋白表達也顯著降低。提示MACC1可能通過ERK1/2通路調(diào)控卵巢癌耐藥細胞的增殖、凋亡及順鉑敏感性。

結(jié)合以往研究及本實驗結(jié)果，猜測MACC1可能作為ERK1/2通路的上游因子，調(diào)控卵巢癌的增殖及對順鉑的化療敏感性。這為下一步構(gòu)建動物模型，進行體內(nèi)實驗奠定了基礎(chǔ)。

［1］ STEIN U, WALTHER W, ARLT F, et al. MACC1, a newly identified key regulator of HGF-MET signaling, predicts colon cancer metastasis ［J］. Nat Med, 2009, 15(1): 59-67.

［2］ WEI S Q, SUI L H, ZHENG J H, et al. Role of ERK1/2 kinase in cisplatin-induced apoptosis in human ovarian carcinoma cells［J］. Chin Med Sci J, 2004, 19(2): 125-129.

［3］ JEMAL A, CLEGGL X, WARD E, et al. Annual report to the nation on the status of cancer, 1975-2001, with a special feature regarding survival ［J］. Cancer, 2004, 101(1): 3-27.

［4］ KOKOSZY?SKA K, KRY?SKI J, RYCHLEWSKI L, et al.Unexpected domain composition of MACC1 links MET signaling and apoptosis ［J］. Acta Biochim Pol, 2009, 56(2): 317-323.

［5］ STEIN U, SMITH J, WALTHER W, et al. MACC1 controls Met: what a difference an Sp1 site makes ［J］. Cell Cycle, 2009, 8(15): 2467-2469.

［6］ SHIRAHATA A, SHINMURA K, KITAMURA Y, et al. MACC1 as a marker for advanced colorectal carcinoma ［J］. Anticancer Res, 2010, 30(7): 2689-2692.

［7］ QIU J, HUANG P, LIU Q, et al. Identification of MACC1 as a novel prognostic marker in hepatocellular carcinoma［J］. J Transl Med, 2011, 9: 166.

［8］ HUANG Y, ZHANG H, CAI J, et al. Overexpression of MACC1 and its significance in human Breast Cancer Progression ［J］. Cell Biosci, 2013, 3(1): 16.

［9］ ZHANG R, SHI H, CHEN Z, et al. Effects of metastasisassociated in colon cancer 1 inhibition by small hairpin RNA on ovarian carcinoma OVCAR-3 cells［J］. J Exp Clin Cancer Res, 2011, 30: 83.

［10］ GAO J, DING F, LIU Q, et al. Knockdown of MACC1 expression suppressed hepatocellular carcinoma cell migration and invasion and inhibited expression of MMP2 and MMP9［J］. Mol Cell Biochem, 2013, 376(1-2): 21-32.

［11］ PICHORNER A, SACK U, KOBELT D, et al. In vivo imaging of colorectal cancer growth and metastasis by targeting MACC1 with shRNA in xenografted mice［J］. Clin Exp Metastasis, 2012, 29(6): 573-583.

［12］ RAMOS J W. The regulation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) in mammalian cells［J］. Int J Biochem Cell Biol, 2008, 40(12): 2707-2719.

［13］ KIM E K, CHOI E J. Pathological roles of MAPK signaling pathways in human diseases［J］. Biochim Biophys Acta, 2010, 1802(4): 396-405.

［14］ 曹迎明, 王殊, 張嘉慶, 等. MEK抑制劑增加乳腺癌細胞MCF-7對表柔比星的敏感性［J］. 中國癌癥雜志, 2008, 18(11): 839-843.

［15］ WANG G, KANG M, LU W, et al. MACC1: A potential molecule associated with pancreatic cancer metastasis and chemoresistance ［J］. Oncol Lett, 2012, 4(4): 783-791.

歡迎訂閱《臨床腫瘤學(xué)雜志》

《臨床腫瘤學(xué)雜志》是由國家新聞出版總署和解放軍總政治部批準創(chuàng)辦的腫瘤專業(yè)高級學(xué)術(shù)期刊，是中國科技論文統(tǒng)計源期刊(中國科技核心期刊)、中國生物醫(yī)學(xué)核心期刊和CSCO團體會員期刊，已被“萬方數(shù)據(jù)-數(shù)字化期刊群”、“中國核心期刊（遴選）數(shù)據(jù)庫”、“中國學(xué)術(shù)期刊綜合評價數(shù)據(jù)庫（CAJCED）”、“中國期刊全文數(shù)據(jù)庫（CJFD）”、“中文科技期刊數(shù)據(jù)庫”、“中文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻/會議論文數(shù)據(jù)庫”等多家數(shù)據(jù)庫收錄，還被國際著名的檢索系統(tǒng)美國《化學(xué)文摘》（Chemical Abstracts，CA）、《烏利希國際期刊指南》（Ulrich’s International Periodicals Directory）及波蘭《哥白尼索引》（Index Copernius, IC）收錄。

本刊以“突出臨床，兼顧基礎(chǔ)，中西并蓄”為辦刊特色，主要刊登腫瘤臨床研究領(lǐng)域的最新研究成果和經(jīng)驗，國內(nèi)外的最新研究動態(tài)與進展，以及與臨床密切相關(guān)的基礎(chǔ)研究等內(nèi)容。主要欄目有：專家論壇、論著、臨床應(yīng)用、綜述與講座、指南與解讀、短篇報道、病例討論、簡訊等。讀者對象為廣大的腫瘤工作者和相關(guān)的醫(yī)藥衛(wèi)生人員。本刊不僅是廣大讀者獲取新信息的窗口，也是廣大作者施展才華的舞臺，發(fā)行量在國內(nèi)同類期刊中最高，學(xué)術(shù)影響廣泛。自2009年5月1日起本刊已啟用網(wǎng)站在線投稿系統(tǒng)，廣大讀者和作者可以自由瀏覽本刊網(wǎng)站，并可免費下載本刊最新一期的部分文獻全文，登錄網(wǎng)址：www.lczlx.com，我們期待您的積極支持和參與。

本刊為月刊，大16開本，96頁，激光照排，隨文插放彩圖，印刷裝幀精美，國內(nèi)外公開發(fā)行。標準刊號：ISSN 1009-0460，CN 32-1577/R，郵發(fā)代號：28-267（國內(nèi)），BM8600（國外）。每期定價10元(包括郵寄費)，全年120元。全國各地郵局均可訂閱，漏訂者請直接匯款至南京市楊公井34標34號《臨床腫瘤學(xué)雜志》編輯部補訂。郵編：210002，電話：025-84400143、80864363，傳真：025-84400143，E-mail:lczlx@vip.163.com、lczlx@csco.org.cn。

Effect of MACC1 gene suppression on the proliferation of SKOV3/DDP cells and its chemosensitivity to cisplatin

DENG You-xing, SHI Hui-rong, LI Xia, ZHANG Rui-tao (Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou Henan 450052, China)

SHI Hui-rong E-mail: hrshi2011@163.com

Background and purpose: The metastasis-associated in colon cancer-1 (MACC1) is highly expressed in different cancers and has an effect on the proliferation and apoptosis of tumor cells through the regulation of extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 pathway. However, the role of MACC1 in ovarian cancer has been rarely studied. The study was aimed to suppress MACC1 gene expression by siRNA and explore the relationship between MACC1 expression and chemosensitivity to cisplatin in ovarian cancer cell line SKOV3/DDP. Methods: Empty plasmid p-super-EGFP-1 (negative control group) and p-super-EGFP-MACC1 shRNA (experimental group) were transfected into ovarian cancer cell SKOV3/DDP respectively. SKOV3/DDP cells without transfection were used as blank group. Then, MACC1 mRNA and protein levels were measured by RT-PCR and Western blot, respectively. Cell proliferation and IC50 of cisplatin was determined by methyl thiazolyl tetrazolium test (MTT). Apoptosis rate was determined by flow cytometer (FCM). ERK1/2 and p-ERK1/2 protein levels were determined by Western blot. Results: Compared with those in blank and negative control groups, MACC1 mRNA and protein levels deceased in experimental group. The IC50 of cisplatin in experimental group was lower than that in the other groups (26.094 vs 47.501/47.089 μmol/L, P＜0.05). There was a lower expression of p-ERK1/2 in experimental group (0.3979 vs 00.6712/0.6681, P＜0.05). Apoptosis rate was significantly higher in the experimental group before and after treatment of cisplatin (1.32% vs 0.66%/0.48%, P＜0.05; 36.70% vs 18.53%/16.60%, P=0.000). Conclusion: MACC1 gene may be involved incisplatin resistance phenomenon in SKOV3/DDP cells through ERK1/2 pathway.

Metastasis-associated in colon cancer-1; Ovarian cancer; Cisplatin; Extracellular signal-regulated kinase

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.12.006

R737.31

A

1007-3639(2013)12-0967-07

2013-10-09

2013-11-30）

史惠蓉 E-mail:hrshi2011@163.com