中藥的醇提工藝技術(shù)

姜鵬

【摘 要】目的 確定虎杖、當(dāng)歸的最佳醇提工藝條件。方法 以浸膏得率和虎杖苷浸出量為指標(biāo)，對(duì)影響浸出的主要因素進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果 最佳的提取工藝條件為：加60%的乙醇回流提取2次，加醇量分別為10、8倍，提取時(shí)間分別為1.5、1.0 h。結(jié)論 優(yōu)選的提取工藝可為工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】中藥 工藝

【中圖分類號(hào)】【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5158（2013）02-0343-01

虎杖、當(dāng)歸為常用中藥，虎杖的化學(xué)成分主要為白藜蘆醇類[1]、蒽醌類?；⒄溶眨ò邹继J醇苷）為虎杖中的主要有效成分，具有顯著的擴(kuò)血管作用，對(duì)冠狀動(dòng)脈、腦血管、肺血管、肝血管等都有擴(kuò)張作用，并對(duì)血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子、pH具有雙向調(diào)節(jié)作用。在虎杖制劑中，對(duì)其有效成分虎杖苷可以采用一定濃度的醇提取。本研究采用正交設(shè)計(jì)[2-3]的方法，以乙醇為提取溶媒，對(duì)該制劑處方中的主要藥味虎杖、當(dāng)歸的醇提工藝條件進(jìn)行優(yōu)選，為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

一、儀器與試藥

LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測(cè)器；Apollo色譜柱：Apollo C18-A（250mm×4.6 mm，5μm）；N3000色譜工作站；電子分析天平（AY120 Shimadzu0.1mg～120g）；恒溫水浴鍋（DK-SZZ型）。虎杖、當(dāng)歸藥材購自湖南三湘中藥飲片有限公司，經(jīng)檢驗(yàn)均為合格藥材?；⒄溶眨ㄅ?hào)111575-200502）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

1、虎杖苷含量測(cè)定

1）色譜條件

色譜柱為Apollo C18-A柱（250 mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（23∶77）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)306nm；流速1.0mL/min；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算不低于3 000。在此條件下，供試品色譜中虎杖苷與其它組分的色譜峰可達(dá)基線分離（見圖1）。

2）對(duì)照品溶液的制備

精密稱取虎杖苷對(duì)照品14.8 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，取1 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得（虎杖苷的濃度為0.029 6 mg/mL）。

3）供試品溶液的制備與測(cè)定

取各提取液，（指醇提濃度、醇提次數(shù)、正交試驗(yàn)、正交驗(yàn)證試驗(yàn)的提取液）用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取對(duì)照品與供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算。

2、乙醇濃度對(duì)浸出量的影響

依處方比例稱取虎杖、當(dāng)歸，分別加入濃度為40%、50%、60%、70%、80%的乙醇浸泡0.5 h，回流提取2次，加醇量分別為8、6倍，提取時(shí)間分別為2.0、1.5 h，分別收集5種不同濃度的提取液，然后測(cè)定浸膏得率與虎杖苷的浸出量。結(jié)果表明，虎杖、當(dāng)歸以60%乙醇提取，其虎杖苷的浸出量最高。

3、提取次數(shù)考察

按處方比例稱取虎杖、當(dāng)歸，加60%乙醇浸泡0.5 h，回流提取3次，加醇量分別為8、6、6倍，提取時(shí)間分別為2.0、1.5、1.5 h，收集合并第1、2次提取液，定容，再收集第3次提取液，定容，測(cè)定虎杖苷的浸出量。結(jié)果表明，第3次提取的浸膏得率與虎杖苷浸出量均小于3次總量的10%，故提取2次即可。

4、正交試驗(yàn)優(yōu)選醇提工藝

1）試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在確定醇提濃度與提取次數(shù)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)法對(duì)虎杖、當(dāng)歸提取的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。選擇浸泡時(shí)間、加醇量、提取時(shí)間作為考察因素，以浸膏得率與虎杖苷浸出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9（34）正交表安排試驗(yàn)。

2）試驗(yàn)結(jié)果

依處方比例稱取虎杖25.0 g、當(dāng)歸10.0 g，共9份，根據(jù)表2安排試驗(yàn)。由直觀分析可知，以浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，A、B、C三因素的極差（R）與離差平方和（Sj）均少于空白列相應(yīng)的值，故可認(rèn)為各因素對(duì)浸出均無影響。而以虎杖苷浸出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，由直觀分析可知，其最佳提取工藝條件為A2B3C1，各因素的主次順序?yàn)锽、C、A，其中B、C因素經(jīng)方差分析表明，對(duì)虎杖苷浸出量有極顯著性影響，A因素影響不明顯（方差分析中，考慮A因素的SA比空白列的S空白小，故認(rèn)為A因素對(duì)虎杖苷浸出量沒有影響，并將SA與S空白合并作為誤差估計(jì)，以提高分析的精確度，見表3）。根據(jù)上述分析，A因素?zé)o論是以浸膏得率還是以虎杖苷浸出量為指標(biāo)，其對(duì)浸出均未見明顯的影響，故可任取一個(gè)水平，為縮短生產(chǎn)時(shí)間，取A1為佳；B、C因素在上述2種評(píng)價(jià)指標(biāo)中，均以B3、C1為佳。因此，可確定醇提工藝的最優(yōu)條件為A1B3C1，即提取時(shí)加60%乙醇浸泡0.5 h，提取2次，加醇量分別為藥材的10、8倍，提取時(shí)間分別為1.5、1.0 h。

3）驗(yàn)證試驗(yàn)

由于優(yōu)選的醇提工藝條件A1B3C1在正交表中沒有出現(xiàn)，因此必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證。

按處方比例稱取虎杖25 g、當(dāng)歸10g，按優(yōu)選方案（A1B3C1）加60%乙醇進(jìn)行提取，收集提取液，定容，測(cè)定浸膏得率及虎杖苷的浸出量。結(jié)果表明，優(yōu)選方案（A1B3C1）重復(fù)3次試驗(yàn)的虎杖苷浸出量均稍高于正交表中浸出量最高的6號(hào)方案，從而證明這一方案合理可行。

三、討論

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)是研究多因素多水平的一種設(shè)計(jì)方法，它是根據(jù)正交性從全部試驗(yàn)中挑選出部分有代表性的點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)，這些有代表性的點(diǎn)具備了“均勻分散，齊整可比”的特點(diǎn)，是一種高效率、快速、經(jīng)濟(jì)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。

醇提提取工藝試驗(yàn)中，選用君藥的有效成分虎杖苷作為提取的評(píng)價(jià)指標(biāo)，客觀地反映了提取工藝的優(yōu)劣。通過正交試驗(yàn)等確定了醇提最佳工藝條件為：以60%的乙醇浸泡0.5 h，加熱回流提取2次，加醇量分別為10、8倍，提取時(shí)間分別為1.5、1.0 h。虎杖苷提取率達(dá)83.5%，基本提取完全。

本試驗(yàn)采用的虎杖苷含量測(cè)定方法，條件比較穩(wěn)定，出峰時(shí)間短，分離效果好，可用于虎杖及其制劑的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1] 周文龍，耿強(qiáng)，夏新華，虎杖、當(dāng)歸醇提工藝研究，論文網(wǎng)，2011，04

[2] 楊西岳.虎杖及白藜蘆醇的開發(fā)[J].天然產(chǎn)物分離，2005，3（3）：16-18

[3] 張 峻.正交試驗(yàn)法優(yōu)化虎杖提取工藝的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志， 2003，38（2）：154

[4] 謝 揚(yáng)，朱秋華，劉瑞源，等.正交實(shí)驗(yàn)篩選虎杖甙提取工藝[J].中藥材， 2004，27（9）：678-679