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    注射用鹽酸頭孢替安無菌檢查方法

    2013-06-08 03:05:44高錫來
    中國信息化·學術(shù)版 2013年2期

    高錫來

    【摘 要】本文對各規(guī)格注射用鹽酸頭孢替安的無菌檢查方法進行了論述,介紹其試驗過程及注意事項。

    【關(guān)鍵詞】無菌檢查法、注射劑、鹽酸頭孢替安

    【中圖分類號】R978.1【文獻標識碼】A【文章編號】1672-5158(2013)02-0330-01

    (1) 供試品溶液制備:

    規(guī)格2.0g取供試品20支,每支分別加0.9%無菌氯化鈉溶液6ml使溶解,再分別吸出3ml轉(zhuǎn)移至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,搖勻,制成約40mg/ml的供試溶液;

    規(guī)格1.0g取供試品20支,每支分別加適量0.9%無菌氯化鈉溶液使溶解后,全部轉(zhuǎn)移至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,搖勻,制成約40mg/ml的供試溶液;

    規(guī)格0.5g取供試品20支,每支分別加適量0.9%無菌氯化鈉溶液使溶解后,全部轉(zhuǎn)移至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,搖勻,制成約20mg/ml的供試溶液;

    規(guī)格0.25g 取供試品30支,每支分別加適量0.9%無菌氯化鈉溶液使溶解后,全部轉(zhuǎn)移至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,搖勻,制成約15mg/ ml的供試溶液;

    (2)薄膜過濾:

    將上述制備好的供試品溶液置3個濾筒中同時過濾,每筒過濾供試液約170ml;以加入青霉素酶的0.9%無菌氯化鈉溶液為沖洗液,總沖洗量1000 ml(預先加入青霉素酶1支,2ml/支,酶活力不低于300萬單位/ ml),分次沖洗,即單筒沖洗量約300ml,加酶不低于200萬單位/筒;以大腸埃希菌為陽性對照菌,依法檢查(《中國藥典》2010年版二部附錄XI H),應符合規(guī)定。

    驗證用具:

    1 供試品

    注射用鹽酸頭孢替安2.0g(批號B201012302、B201012304 、B201012306)

    2 培養(yǎng)基

    由北京陸橋技術(shù)有限責任公司及奧博星生物技術(shù)有限責任公司提供

    1 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 批號:100925

    2 改良馬丁培養(yǎng)基 批號:100611

    3 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 批號:091010

    4 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 批號:20100405

    5 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 批號:20100306

    驗證試驗用菌種名稱及其編號:由中檢所提供

    1 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003];

    2 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501];

    3 大腸埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B)44102];

    4 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941];

    5 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001];

    6 黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]。

    青霉素酶(2 ml/支,酶活力不低于300萬單位/ml)

    驗證步驟:

    1.1 菌液的制備

    (1)接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,于30~35℃培養(yǎng)18~24小時;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中,于23~28℃培養(yǎng)24~48小時;分別取上述培養(yǎng)物1ml,加至9ml 0. 9%無菌氯化鈉溶液中,10倍稀釋至10-7、10-7、10-5、10-6,10-5,制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu/ml的菌懸液,混勻備用。

    (2)取經(jīng)23~28℃培養(yǎng)5-7天的黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)物,加入3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫,然后,用管底部有一圓孔并帶有薄的無菌棉花的無菌試管濾出孢子懸液至無菌空試管中,再用上述0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)小于100cfu孢子懸液,混勻備用。

    (3)菌液計數(shù):分別取上述細菌菌液和真菌菌液1m加入培養(yǎng)皿,每種菌液做平行2皿,注入相應瓊脂培養(yǎng)基15~20ml。細菌30~35℃培養(yǎng)48小時;真菌23~28℃培養(yǎng)72小時。

    (4)判斷標準

    每1ml菌液中含菌數(shù)小于100cfu。

    (5)計數(shù)結(jié)果:見無菌檢查法驗證試驗記錄表1。

    2.2 產(chǎn)品驗證

    (1)供試品溶液制備:

    1)供試品溶液制備:取供試品20支,每支分別加0.9%無菌氯化鈉溶液6ml使溶解,再分別吸出3ml轉(zhuǎn)移(1/2量轉(zhuǎn)移)至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,制成約20mg/ml的供試溶液,搖勻備用。

    (2)方法驗證:

    2)試驗組:取一全封閉集菌培養(yǎng)器(三筒),將上述其中1份供試液按薄膜過濾法置3個濾筒中過濾(每筒過濾供試液約170ml,含供試品約6. 6g)。供試液過濾后,用總量1000ml的0.9%無菌氯化鈉溶液(預先加入青霉素酶1支,2 ml/支,酶活力不低于300萬單位/ ml)同時沖洗三個濾筒,單筒沖洗量約300 ml,分次沖洗,每次100ml,每次過濾前應充分振搖。沖洗液過濾后,三筒均注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml,其中一筒不加菌液,作為本次試驗的供試品對照,供試品對照應無菌生長;另外兩筒,一筒加入上述1.1中制備好的大腸埃希菌試驗菌液1ml,一筒加入金黃色葡萄球菌試驗菌液1ml,同法操作,共做3組,6種試驗菌及相應培養(yǎng)基逐一進行驗證,將所有培養(yǎng)基筒置規(guī)定條件下培養(yǎng)觀察。

    3)對照組:另取一全封閉集菌培養(yǎng)器,不過濾供試品和沖洗液,直接注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml,并加入上述1.1中制備好的大腸埃希菌試驗菌液1 ml,作為對照。同法操作,6種試驗菌及相應培養(yǎng)基逐一進行驗證,將所有培養(yǎng)基筒置規(guī)定條件下培養(yǎng)觀察。

    4)陰性對照組:另取一全封閉集菌培養(yǎng)器,各過濾沖洗用0.9%無菌氯化鈉溶液300ml后,再分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基各100ml,置規(guī)定條件下培養(yǎng)觀察。

    5)培養(yǎng):硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基筒30-35℃培養(yǎng)3天;改良馬丁培養(yǎng)基筒23-28℃培養(yǎng)5天,每天觀察并記錄結(jié)果。

    6)試驗結(jié)果:見無菌檢查法驗證試驗記錄表2。

    3 結(jié)果判斷

    該品種按上述方法進行驗證試驗,各對照管培養(yǎng)48~72小時均生長良好;與對照管比較,含供試品各容器中的試驗菌均生長良好;供試品對照管及陰性對照管培養(yǎng)5天,均無菌生長。試驗結(jié)果表明:該供試品在此檢驗量和檢驗條件下抑菌作用可忽略不計,故可照此方法進行該品種的無菌檢查,根據(jù)中國藥典2010年版附錄XIH的相關(guān)規(guī)定及各試驗菌生長情況,陽性對照菌為大腸埃希菌。

    4 結(jié)論

    注射用鹽酸頭孢替安(2.0g)無菌檢查法:采用薄膜過濾法,取供試品20支,每支分別加0.9%無菌氯化鈉溶液6ml使溶解,再分別吸出3ml轉(zhuǎn)移(1/2量轉(zhuǎn)移)至500ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,搖勻,制成約40mg/ml的供試液;將上述供試液置3個濾筒中同時過濾,每筒過濾供試液約170ml;供試液過濾后,用總量1000 ml的0.9%無菌氯化鈉平均沖洗3個濾筒,并預先在沖洗液中加入1支青霉素酶(2 ml/支,酶活力不低于300萬單位/ ml),分次沖洗,即單筒沖洗量不少于300ml/筒,加酶不低于200萬單位/筒;陽性對照菌為大腸埃希菌;其他操作依據(jù)中國藥典2010年版。

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