青霉素鈉和頭孢唑林鈉與脂肪乳配伍時的含量測定＊

李穎華 ，馬玉樊 ，王 熒 ，張志剛 ，張 宏 ，盧婷利 ，陳 濤 ，3

(1.西北工業(yè)大學(xué)明德學(xué)院，陜西 西安 710124;2.西北工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院，陜西 西安 710072;3.陜西脂質(zhì)體工程技術(shù)研究中心，陜西 西安 710075)

青霉素鈉、頭孢唑林鈉是臨床常用的抗生素，使用時大多以葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液等溶劑進行溶解，且以葡萄糖注射液為主，因其除起溶劑作用外還能為患者提供能量。但一些危重患者對葡糖糖的代謝機能受損，持續(xù)滴注葡糖糖注射液會造成高血糖癥，甚至酸中毒[1]。脂肪乳注射液是一種胃腸外能量補給劑，具有良好的生物相容性，且對于危重患者能被優(yōu)先吸收利用[2]。它以大豆油為主要成分，以精制卵磷脂為乳化劑、甘油為等滲劑，經(jīng)高壓均質(zhì)而成[3]，臨床上廣泛用于危重患者手術(shù)前后的能量供給、營養(yǎng)支持及改善腫瘤患者對化學(xué)治療、放射治療的耐受性[4－6]?；谥救榈闹T多臨床優(yōu)點，若其可與抗生素配伍使用，則既具有效兼顧治療和防治感染又能提供身體恢復(fù)所需營養(yǎng)和能量的雙重功效，更好地滿足臨床上一些危重患者的需求。因此，本試驗中模擬臨床用法，建立了檢則這兩種常用抗生素分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍時含量的方法，同時考察了配伍后24 h內(nèi)兩種抗生素的含量變化，結(jié)果其配伍后穩(wěn)定性良好，粒徑、電位與pH均不發(fā)生改變，對體內(nèi)外抑菌效果也無影響[7－8]，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀;Waters 2996型紫外檢測器;Waters 717型自動進樣器;Waters Millennium色譜工作站;TG16A－WS型臺式高速離心機;德國Sartorius pH計。注射用青霉素鈉(華北制藥有限公司，批號為S0911316);注射用頭孢唑林鈉(石藥集團中諾藥業(yè)＜石家莊＞有限公司，批號為100208018);10%，20%，30%脂肪乳(西安力邦制藥有限公司，批號分別為1003171，1003083，0910093);乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、枸櫞酸均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

青霉素鈉:色譜柱為Agilent HC C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為 0.1 moL/L 磷酸二氫鉀溶液(pH=2.5)－乙腈(70 ∶30)，流速 1.0 mL/min，檢測波長為 225 nm，柱溫為 25 ℃，進樣量為 20 μL。

頭孢唑林鈉:色譜柱為Agilent HC C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm)，流動相國磷酸氫二鈉－枸櫞酸水溶液(各3.8×10－3mol/L)－乙腈(88 ∶12)，流速為 1.0 mL/min;檢測波長為 254 nm，柱溫為25 ℃，進樣量為 10 μL。

2.2 干擾試驗

青霉素鈉:將注射用青霉素鈉按擬訂的流動相稀釋成質(zhì)量濃度為0.2 g/mL的供試品溶液，用0.22 μm的濾膜過濾后待用。分別精密吸取10%，20%，30%脂肪乳注射液100 μL，置1 mL的離心管中，加流動相至刻度，搖勻后置離心機中8000 r/min離心30 min，取下層澄清溶液用0.22 μm濾膜過濾，備用。將注射用青霉素鈉分別與10%，20%，30%的脂肪乳配伍，質(zhì)量濃度為1 g/L。將配伍后的溶液各精密吸取100 μL，置1 mL的離心管中，加流動相至刻度，搖勻后置離心機中8 000 r/min下離心30 min，取下層澄清溶液用0.22 μm濾膜過濾，備用。將上述待測液按擬訂色譜條件進樣，結(jié)果青霉素鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍后的色譜圖相同;10%、，20%，30%脂肪乳的色譜圖相同。其中青霉素鈉、10%脂肪乳及青霉素鈉與10%脂肪乳配伍后的色譜圖見圖1。可見，10%，20%，30%脂肪乳對脂肪乳中青霉素鈉的檢測無干擾。

圖1 青霉素鈉干擾試驗高效液相色譜圖

頭孢唑林鈉:將注射用頭孢唑林鈉按擬訂的流動相稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 g/L的供試品溶液，0.22 μm濾膜過濾后待用。分別精密吸取10%，20%，30%脂肪乳注射液100 μL，置1 mL的離心管中，加2.1.2項下的流動相至刻度，搖勻后置離心機中8 000 r/min離心30 min，取下層澄清溶液用0.22 μm濾膜過濾，備用。將注射用頭孢唑林鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍，質(zhì)量濃度為1 g/L。將配伍后的溶液各精密吸取100 μL，置1 mL的離心管中，加擬訂的流動相至刻度，搖勻后置離心機中8 000 r/min離心30 min，取下層澄清溶液用0.22 μm濾膜過濾，備用。將上述待測液按擬訂色譜條件進樣，結(jié)果頭孢唑林鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍后的色譜圖相同;10%，20%，30%脂肪乳的色譜圖相同。其中頭孢唑林鈉、10%脂肪乳及頭孢唑林鈉與10%脂肪乳配伍后的色譜圖見圖2?？梢?，10%，20%，30%脂肪乳對頭孢唑林鈉的檢測無干擾。

圖2 頭孢唑林鈉干擾試驗高效液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

青霉素鈉:精密稱取注射用青霉素鈉9.6 mg，用流動相溶解并制成質(zhì)量濃度為 9.6，4.8，2.4，1.2，0.6，0.3，0.15，0.07 5，0.037 5，0.018 7 g/L 的溶液，進樣測定，將峰面積(A)與藥物濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程 A=177 490 C+11 142，r=0.999 8。結(jié)果表明，青霉素鈉質(zhì)量濃度在 0.075 ～4.8 g/L 范圍與峰面積呈良好線性關(guān)系。

頭孢唑林鈉:精密稱取頭孢唑林鈉16 mg，用流動相溶解并制成質(zhì)量濃度為 16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.031 3，0.015 6，0.007 8，0.003 9，0.001 9 g/L 的溶液，進樣測定，將峰面積(A)與藥物質(zhì)量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程為 A=1×106C －98 555，r=0.999 8。結(jié)果表明，頭孢唑林鈉質(zhì)量濃度在0.007 8～8.0 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4 加樣回收試驗

精密量取已知含量的各配伍液，準(zhǔn)確加入高、中、低3種不同質(zhì)量濃度的各溶液，測定峰面積(A)，分別代人各自回歸方程計算含量。結(jié)果見表1和表2。結(jié)果表明，青霉素鈉及頭孢唑林鈉的檢測方法準(zhǔn)確可靠。

2.5 精密度試驗

分別取1.0 g/L青霉素鈉溶液及1.0 g/L頭孢唑林鈉溶液，按擬訂色譜條件和方法，連續(xù)重復(fù)進樣6次，以峰面積考察進樣精密度。結(jié)果青霉素鈉平均峰面積為188 412，頭孢唑林鈉平均峰面積為1 432，表明進樣精密度良好。

青霉素鈉:取青霉素鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳的配伍液，在 4 ℃和 25 ℃條件下，分別于 0，2，4，6，24 h 時取樣，按擬訂項下色譜條件檢測并記錄峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算青霉素鈉的含量，其含量及隨時間變化情況見表3。經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計分析，這些含量間的變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 青霉素鈉加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

表2 頭孢唑林鈉加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

表3 青霉素鈉與脂肪乳配伍后24 h內(nèi)的含量變化(%)

頭孢唑林鈉:取頭孢唑林鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳的配伍液，在 4℃和 25℃條件下，分別于 0，2，4，6，24 h時取樣，按擬訂色譜條件檢測并記錄峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算頭孢唑林鈉的含量，其含量及隨時間變化情況見表4。經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計分析，這些含量間的變化并差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表4 頭孢唑林鈉與脂肪乳配伍后24 h內(nèi)的含量變化(%)

3 討論

注射用青霉素鈉、注射用頭孢唑林鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍后24 h內(nèi)配伍液的外觀、pH及粒徑均無明顯變化，表明青霉素鈉、注射用頭孢唑林鈉與脂肪乳配伍不會引起脂肪乳變性，配伍后24 h內(nèi)未出現(xiàn)漂油和破乳現(xiàn)象。經(jīng)高效液相色譜法檢測藥物含量沒有因為與脂肪乳配伍而產(chǎn)生變化，并未出現(xiàn)其他吸收峰，表明抗生素沒有發(fā)生降解。配伍后脂肪乳和藥物都非常穩(wěn)定。體外抑菌試驗結(jié)果表明，青霉素鈉與頭孢唑林鈉分別與10%，20%，30%脂肪乳配伍后對藥物的抑菌作用均無影響[7－8]。

本研究為脂肪乳的應(yīng)用提供了一個新思路，其既保持了本身的補充營養(yǎng)功能又能用作抗生素的溶劑。這樣，既可避免葡萄糖注射液溶解抗生素用于危重患者所帶來的副作用，還可為患者提供足夠的營養(yǎng)支持，改善患者的淋巴細(xì)胞活性，有助于患者康復(fù)。

[1]Wirtisch M，Wessner B，Spittler A，et al.Effect of different lipid emulsions on the immunological function in humans:A systematic review with metaanalysis[J].Clinical Nutrition，2007，26(3):302 －313.

[2]Bistrian BR.Novel lipid sources in parenteral and enteral nutrition[J].Proc Nutr Soc，1997，56(1B):471 － 477.

[3]陳亭苑，張思源.靜脈脂肪乳劑的應(yīng)用和進展[J].腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)，1995，2(4):247 －252.

[4]蔣朱明，張思源，王秀榮，等.中鏈甘油三酯對手術(shù)后接受腸外營養(yǎng)患者代謝的影響[J].中華外科雜志，2001，39(9):694－697.

[5]黎介壽.我國臨床營養(yǎng)支持的現(xiàn)狀與展望[J].腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)，2000，7(1):1 －3.

[6]Gobel Y，Koletzko B，Bohles HJ，et al.Parenteral fat emulsions based on olive and soybean oils:a randomized clinical trial in preterm infants[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr，2003，37(2):161 － 167.

[7]馬玉樊，盧婷利，王汝濤，等.注射用頭孢唑林鈉與脂肪乳的配伍穩(wěn)定性及對體內(nèi)外抑菌活性的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2012，31(7):406－411.

[8]馬玉樊，趙 雯，王汝濤，等.注射用青霉素鈉與脂肪乳的配伍穩(wěn)定性及體外抑菌活性檢測[J].中國藥業(yè)，2012，21(16):35－36.