氨基酸分析儀檢測氨基酸水溶肥中游離氨基酸可行性分析
2013-06-04 07:09:12古華龍陳海雪梁家銘余良瑩
古華龍 陳海雪 梁家銘 余良瑩
【摘 要】通過酸水解法測定含氨基酸水溶肥料中17種氨基酸含量，采用sykam全自動氨基酸分析儀，水合茚三酮柱后衍生，結(jié)果表明：同一個樣品測得的氨基酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小，峰面積的回收率在97.8%～101.3%，用此方法測氨基酸具有良好的重復(fù)性、準(zhǔn)確性。
【關(guān)鍵詞】含氨基酸水溶肥；酸水解；氨基酸；柱后衍生
0.前言
我國是一個缺水的農(nóng)業(yè)大國，化肥的使用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占重要地位，而傳統(tǒng)肥料存在利用率低、養(yǎng)分損失率高而且耗水量大的缺點，水溶肥料由于其迅速溶于水中、養(yǎng)分更易被吸收而且吸收利用率高并可應(yīng)用于滴灌、噴施、噴灌的節(jié)水特點，在我國農(nóng)業(yè)中有廣闊的發(fā)展前景[1]。氨基酸水溶肥作為水溶肥中的一員，其原理：氨基酸存在肥料中，易于被作物吸收的特點；亦有提高施肥對象抗病性，改善施肥作物品質(zhì)的功能；補充植物必須的氨基酸，刺激和調(diào)節(jié)植物快速生長，促使植物生長健壯，促進對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；增強植物的代謝功能，提高光合作用，促進植物根系發(fā)達，加快植物生長繁殖[2]。目前，對于氨基酸的檢測大多采用液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、毛細管電泳、凱氏定氮法和光譜法等方法。這些方法或試劑費用昂貴，或分離效率低，或不能同時測多種氨基酸。運用氨基酸分析儀能解決以上問題，并且操作簡單方便，重復(fù)性好。
1.方法原理
含氨基酸水溶肥用磺基水楊酸沉淀蛋白質(zhì)后，用EDTA絡(luò)合金屬元素釋放氨基酸，氨基酸經(jīng)離子交換色譜分離、測定。脯氨酸在440 nm波長處有最大吸收峰，除脯氨酸外，其他各氨基酸均在570nm波長有最大吸收峰。因此，在440nm檢測計算脯氨酸含量，而在570nm檢測計算其它各氨基酸含量。
2.試劑與儀器
2.1試劑
6.0mol/l鹽酸溶液、茚三酮溶液、50g/L磺基水楊酸溶液、10g/L EDTA溶液、流動相：檸檬酸鈉緩沖液A=0.2N，pH=3.45；檸檬酸鈉緩沖液B=0.2N，pH=10.85；C=超純水；D=20g/L氫氧化鈉溶液。
2.2氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液
含天門冬氨酸、蘇氨酸等17種常規(guī)蛋白水解液分析用層析純氨基酸，各組分濃度C（氨基酸）=100nmol/ml。
2.3儀器與設(shè)備
sykam全自動氨基酸分析儀、0.45μm水洗濾膜、真空干燥箱、真空泵等。
3.實驗方法
3.1樣品前處理
稱取試樣2g-10g（精確到0.01g），置于250mI容量瓶中。充分溶解后，加水至刻度，混勻，放置過夜后吸取上清液（或過濾后吸取濾液）2ml，于10mL離心管，準(zhǔn)確加人2mL磺基水楊酸溶液混勻，放置lh。準(zhǔn)確加人1mLEDTA-Na溶液和1mL鹽酸溶液，混勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾。吸取上清液（或濾液）1ml蒸干。準(zhǔn)確加人1～5mL的樣品稀釋液溶解，使氨基酸濃度處于儀器最佳檢測范圍內(nèi)，供儀器測定用[3]。
3.2儀器條件
色譜條件： LCAK06/Na （水解氨基酸分析柱）
柱溫：：58℃～74℃梯度控溫
洗脫泵：0.45mL/min；衍生泵：0.25mL/min
檢測器：440nm/570nm雙波長檢測器；反應(yīng)器溫度：130℃；進樣體積：50μL
4.結(jié)果與分析
4.1氨基酸的色譜分析
圖1
試驗測定17種氨基酸標(biāo)樣色譜圖見圖1，除PRO（脯氨酸）在440nm檢出，其余氨基酸都在570nm檢測出。連續(xù)進6針濃度為100nmol/L的氨基酸混合標(biāo)樣，其平均分離度R=3.65，最小分離度R=1.41（Ile～Leu），18種濃度均為100nmol/L的氨基酸標(biāo)液的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見下表1。
峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.150%～0.748%，說明此方法進樣重復(fù)性良好。
4.2回收率實驗
把已經(jīng)稀釋3倍的氨基酸的混合標(biāo)樣、氨基酸水溶肥進行測定，再把標(biāo)液加入到樣品中檢測氨基酸含量，所得數(shù)據(jù)見下表2。
實驗的回收率在97.8%～101.3%之間，說明該方法具有較高的準(zhǔn)確性。
5.結(jié)論
本文中使用氨基酸自動分析儀測定水溶肥中氨基酸的方法具有良好的重復(fù)性，較高的回收率，而且樣品分離度好，說明檢測氨基酸水溶肥料是可行的。
【參考文獻】
[1]李代紅，傅送保，操斌.水溶性肥料的應(yīng)用與發(fā)展[J].現(xiàn)代化工，2012，32（7）：12-15.
[2]張番.水溶性肥料：養(yǎng)分豐富促生長節(jié)水節(jié)肥顯成效[N].中國農(nóng)資，2012-7-13（25）.
[3]NY1429-2010含氨基酸水溶肥料[S].
