電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀殘余試劑的再利用

梁大立 李介華 藍永樂 邱瑞霞 黃延峰

暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬清遠醫(yī)院 清遠市人民醫(yī)院檢驗中心，廣東清遠 511500

電化學(xué)發(fā)光免疫分析 （electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的新一代標記免疫測定技術(shù)。因標志物為非放射性物質(zhì)，而且實現(xiàn)自動化，具有快速、簡便、靈敏、特異等特點，己廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標志物、藥物及其他微量生物活性物質(zhì)的測定[1]，但配套試劑均需進口，測定成本高，為獨立包裝、固定測試數(shù)、條碼自動記錄，使瓶中殘余試劑不能再利用而造成浪費。為充分利用醫(yī)學(xué)資源，在保證檢驗質(zhì)量的前提下，筆者對羅氏E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀殘余試劑混合再利用的可行性進行研究，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

瑞士羅氏公司E170全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

1.2 試藥

定標物為羅氏原裝配套，PCT質(zhì)控物為羅氏公司提供，批號為168843、168845；CA72-4質(zhì)控物為美國伯樂公司提供，批號為54551、54553。新試劑為羅氏E170原裝配套試劑；混合試劑為羅氏E170同一項目、同一批號的試劑，經(jīng)儀器掃描條碼為0測試，將瓶中殘余試劑每3～4瓶混合為1瓶。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 手工輸入條碼信息 將羅氏三聯(lián)裝試劑白色瓶上的15位數(shù)字信息，輸入到相應(yīng)的試劑位空白欄。

2.1.2 定標與質(zhì)控 按要求保養(yǎng)儀器，對E170分析儀所檢驗項目進行定標及常規(guī)質(zhì)控，定標通過及室內(nèi)質(zhì)控在控方可進行以下實驗。

2.1.3 混合試劑精密度試驗 根據(jù)《體外診斷試劑分析性能評估指導(dǎo)原則》進行，取高、低2個濃度的質(zhì)控物，每天做2批次的測試，每批次測試時，對同一樣品作雙份測定，共做20 d。得80個測試結(jié)果，計算批內(nèi)及批間精密度。

2.1.4 混合試劑準確性測試 兩種試劑分別檢測PCT、CA72-4高、低濃度質(zhì)控物各20次，檢查分析結(jié)果是否在允許范圍內(nèi)，并進行結(jié)果比較。

2.1.5 標本測定 用新試劑和混合試劑對80例血清樣本進行PCT、CA72-4測定，對結(jié)果進行比較及相關(guān)性分析。

2.1.6 回收試驗 分別在1000μL正常血清內(nèi)加入PCT、CA72-4低值、高值質(zhì)控血清100μL，制成2個待測標本進行回收試驗，每樣本用混合試劑重復(fù)檢測3次，取平均值，計算回收率?；厥章蕿?0%～110%，結(jié)果為可接受[2]。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 每天用羅氏與伯樂低值、高值質(zhì)控物作為監(jiān)控品，對混合試劑進行3周監(jiān)控。

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以（）表示，進行 t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 結(jié)果

2.3.1 混合試劑精密度檢測結(jié)果 混合試劑檢測質(zhì)控物PCT、CA72-4批內(nèi)、批間CV均 ＜5%，符合衛(wèi)生部臨床檢驗中心的要求（＜ 10%）（表 1）。

表1 原裝與混合試劑檢測質(zhì)控血清PCT、CA72-4批內(nèi)、批間CV的比較（%）

2.3.2 混合試劑準確性檢測結(jié)果 混合試劑測得PCT、CA72-4低、高濃度質(zhì)控物各20次結(jié)果與靶值結(jié)果比較，PCT、CA72-4其20次結(jié)果均在質(zhì)控允許范圍內(nèi)，經(jīng)單樣本t檢驗，兩項目各濃度測定值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表 2）。

表2 混合試劑準確性檢測結(jié)果

表2 混合試劑準確性檢測結(jié)果

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2.3.3 原裝試劑與混合試劑檢測血清樣本結(jié)果 原裝新試劑與混合試劑檢測80例血清樣本的PCT、CA72-4的結(jié)果相關(guān)系數(shù)（r）分別為0.998、0.997，兩種試劑測定結(jié)果經(jīng)配對樣本t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均 ＞0.05）（表3）。

表3 80例標本原裝試劑與混合試劑檢測血清PCT、CA72-4結(jié)果

表3 80例標本原裝試劑與混合試劑檢測血清PCT、CA72-4結(jié)果

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2.3.4 混合試劑回收試驗結(jié)果 PCT、CA72-4的低值回收率分別是96.3%、101.5%，PCT、CA72-4的高值回收率分別是96.8%、105.9%。

2.3.5 混合試劑穩(wěn)定檢測結(jié)果 低、高值質(zhì)控品21次檢測結(jié)果有均在允許范圍之內(nèi)，未出現(xiàn)失控，經(jīng)單樣本t檢驗，兩項目各濃度測定值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表4）。

3 討論

羅氏E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀克服了放射免疫分析試劑有效期短和輻射污染、酶聯(lián)免疫吸附試驗易受溫度、酸堿度變化的影響，以及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)中發(fā)光分子只能利用一次的缺點，分析過程可通過電場精確控制，因此具有特異性好、靈敏度高、線性測定范圍寬、操作的自動化程度高等優(yōu)點[3]，國內(nèi)外均有文獻對其綜合性能進行了分析并給予較高評價[4-6]。

表4 混合試劑準確性檢測結(jié)果

表4 混合試劑準確性檢測結(jié)果

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羅氏E170電化學(xué)發(fā)光試劑為專用試劑，每套試劑條碼記錄為100個測試，當檢測了100個樣本后，儀器即默認該套試劑為“零”個測試，試劑瓶內(nèi)雖有殘余試劑，但儀器不會再進行檢測。經(jīng)2年多實踐觀察，每套試劑殘余量約為25%，與文獻報道的每套試劑有20%～30%的試劑剩余量相近，因此棄之不用，造成較大浪費[7]。

本研究結(jié)果顯示，對混合的殘余試劑進行21 d監(jiān)控，PCT、CA72-4兩項目高、低水平質(zhì)控物測定結(jié)果均在控，兩項目各濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明混合試劑3周內(nèi)有較好的穩(wěn)定性；混合試劑檢測質(zhì)控物PCT、CA72-4兩項目的精密度、準確性、回收率等實驗性能指標均符合相關(guān)實驗要求，新試劑與混合試劑檢測患者血清樣本的PCT、CA72-4的結(jié)果相關(guān)性良好，且測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明混合試劑性能穩(wěn)定，檢測質(zhì)量可靠。實踐工作中應(yīng)注意每盒試劑的穩(wěn)定期，羅氏E170試劑盒開封后2～8℃可穩(wěn)定12周，放在E170免疫分析儀上4周，如置20～25℃約為20 h。因此，檢測完畢后，試劑盡快放入4℃冰箱保存，蓋緊試劑瓶，防止試劑水分蒸發(fā)，造成變質(zhì)。同一項目、同一批號的混合殘余試劑在一定時間內(nèi)檢測結(jié)果可靠，殘余試劑在4周內(nèi)盡快再利用[8]。殘余試劑混合再利用檢測前應(yīng)先進行定標，檢測時設(shè)置高、低水平質(zhì)控在檢測前、中、后進行嚴密監(jiān)控，在定標曲線合格和質(zhì)控都在控的情況下測定結(jié)果方為有效。實踐證明E170試劑盒的殘余試劑混合再利用，操作簡便可行、穩(wěn)定性好、測定結(jié)果可靠，能節(jié)約1/4檢測成本，減少醫(yī)學(xué)資源浪費。

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