響應(yīng)曲面法優(yōu)化黃參莖葉多酚的提取工藝及其抗氧化活性

馬婷婷， 田呈瑞， 李龍柱， 權(quán)美平， 張 娟， 趙 珮， 張穎娜

（陜西師范大學(xué) 食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西 西安 710062）

黃參在植物分類學(xué)上屬傘形科迷果芹屬植物迷果芹（Sphallerocarpus gracilis），多年生草本，主要分布在內(nèi)蒙古、黑龍江、甘肅、青海、和西藏等高寒地區(qū)，俗稱黃葑、小葉山紅蘿卜，其根肉質(zhì)，呈淡黃色，可食，富含蛋白質(zhì)和各種礦質(zhì)元素，災(zāi)年群眾用其救饑荒，普通年份也用其烹飪成各種佳肴美食[1-2]。整個(gè)植株亦可用藥，是一種極具開發(fā)前景的藥食兩用的植物。據(jù)《本草綱目》記載，黃參味甘、性溫，有補(bǔ)氣養(yǎng)血、滋陰壯陽(yáng)、通經(jīng)活絡(luò)、舒肝健胃的功效，對(duì)中老年人胃氣虛寒、神疲乏力，婦女氣血失調(diào)，兒童發(fā)育遲緩、營(yíng)養(yǎng)不良、挑食厭食效果俱佳，被譽(yù)為“小人參”。另?yè)?jù)《晶珠本草》記載，黃參治黃水病，腰腎寒癥。因此，黃參是一種營(yíng)養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值極高的純天然綠色保健食品，具有廣泛的應(yīng)用與開發(fā)前景。黃參在我國(guó)分布廣泛，資源豐富，然而，目前有關(guān)黃參的研究、開發(fā)較少，僅有的文獻(xiàn)報(bào)道也只局限于黃參根部、籽中的化學(xué)成分、微量元素的分析及功效作用[3-6]，而據(jù)我們所知，有關(guān)黃參莖葉的研究國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道。作者以黃參莖葉為原料，采用超聲波輔助提取多酚，通過響應(yīng)曲面法優(yōu)化提取工藝條件，并采用3種方法分析黃參莖葉多酚的抗氧化活性，以期為黃參莖葉的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃參莖葉：于2012年7月采自甘肅山丹軍馬場(chǎng)，采第二年莖葉；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、碳酸鈉、福林酚試劑，無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、三氯化鐵、三氯乙酸、氯仿、鐵氰化鉀、二氯化亞鐵、水楊酸、雙氧水等：均為分析純，西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；LAC164型電子分析天平；恒溫水浴鍋；KQ-200KDE型超聲波清洗器；RE-52旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器：上海安亭；722型可見分光光度計(jì)：上海光譜；FW100型高速萬能植物粉碎機(jī)；GZX-9146MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱：上海迅博。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理 黃參莖葉→攤涼→去除雜物→洗凈→曬至半干→烘箱內(nèi)50℃烘干→植物粉碎機(jī)粉碎→過60目篩→密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

1）沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為100 μg/mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2）沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立[7]：精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL， 分別置于 7個(gè)10 mL試管中，加入1.5 mL福林酚試劑，2.5 mL 7.5%的碳酸鈉溶液，并用蒸餾水定容，搖勻，暗室反應(yīng)60 min，于765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值，每個(gè)質(zhì)量濃度做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，取平均值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸光度值Y與沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度X（μg/mL）之間的回歸關(guān)系為：Y=0.115 1X+0.006 7，R2=0.998 5。

1.2.3 樣品總酚質(zhì)量濃度的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取1.000 g樣品粉，按一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇和一定的料液比、超聲時(shí)間、超聲溫度進(jìn)行超聲提取后，3 500 r/min離心30 min，取上清液按1.2.2的方法測(cè)定其在 765 nm處的吸光度，并計(jì)算多酚得率（%）。

式中，Y為多酚得率（%）；c為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的樣品液的總酚質(zhì)量濃度 （μg/mL）；V為樣品液的體積（mL）；m 為樣品粉質(zhì)量（g）；D 為稀釋倍數(shù)。

1.2.4 響應(yīng)曲面法（RSM）優(yōu)化設(shè)計(jì)

1）溶劑選擇：采用水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯作為提取溶劑，觀察提取效果，以選擇合適溶劑。

2）單因素實(shí)驗(yàn)：在超聲功率和超聲頻率分別為200 W和80 Hz的條件下研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、料液比、超聲時(shí)間對(duì)總酚得率的影響，以料液比 1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45 g/mL； 提取溫度40、50、60、70、80、90 ℃ 和超聲時(shí)間 10、20、30、40、50、60 min作為考察因素，以多酚得率作為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，考察各因素對(duì)提取效果的影響[8]。

3）響應(yīng)曲面法優(yōu)化：在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理，作者以乙醇體積分?jǐn)?shù)（%）、超聲溫度（℃）、以及料液比（g/mL）為主要的考察因子 （自變量）， 分別以X1、X2、X3表示，以黃參莖葉得率Y為響應(yīng)值，利用Design-ExpertV.8.0.5b軟件設(shè)計(jì)了3因素3水平的響應(yīng)曲面法實(shí)驗(yàn)，共有17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)，其中12個(gè)為析因點(diǎn)，5個(gè)為零點(diǎn)以估計(jì)誤差，實(shí)驗(yàn)因素水平編碼值見表1。

表1 中心組合實(shí)驗(yàn)Box-Behnken設(shè)計(jì)因素和水平編碼值Table 1 Independent variables and levels in Box-Behnken CCD

1.2.5 抗氧化活性的測(cè)定

1）清除DPPH自由基能力的測(cè)定：參照Brandwilliams等[9]的方法，稍作修改測(cè)定黃參莖葉多酚粗提取對(duì)DPPH自由基的清除能力。實(shí)驗(yàn)測(cè)定前，配制0.1 mmol/L的DPPH乙醇溶液。精確吸取2.0 mL的不同濃度多酚樣品水溶液和6.0 mL新配制的DPPH溶液于試管中，均勻混合，避光反應(yīng)30 min，于517 nm處測(cè)定其吸光度，記錄數(shù)據(jù)。空白對(duì)照用等體積的蒸餾水代替多酚樣品液測(cè)定乙醇溶液中未反應(yīng)之前DPPH的吸光度。用與樣品溶液同濃度的抗壞血酸溶液和BHT溶液作為陽(yáng)性對(duì)照。以樣品液濃度為橫坐標(biāo)，自由基清除率為縱坐標(biāo)作圖分析樣品清除自由基的能力。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。對(duì)DPPH自由基的清處能力按公式（2）計(jì)算：

式中，I表示對(duì)自由基的清除率（%）；Ai表示樣品溶液和DPPH溶液混合液的吸光度（2 mL樣品溶液+6 mL的DPPH溶液）；Aj表示未加 DPPH溶液的樣品溶液的吸光度（2 mL樣品溶液+6 mL的乙醇溶液）；A0表示未加樣品時(shí) DPPH溶液的吸光度 （2 mL乙醇溶液+6 mL的DPPH溶液）。

2）還原力的測(cè)定：樣品提取液還原力的測(cè)定依照稍作修改的Vaquero等[10]的方法進(jìn)行。取2.5 mL的樣品提取液（樣品質(zhì)量濃度的變化范圍是0.1~1.0 mg/mL）加入到裝有2.5 mL 0.2 mol/L pH 6.6的磷酸緩沖液的試管中，再加入2.5 mL 1%的鐵氰化鉀溶液混合均勻。50℃反應(yīng)20 min后，加入2.5 mL 10%的三氯乙酸在3 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心10 min，取上清液5 mL與4 mL的蒸餾水和0.5 mL 0.1%的三氯化鐵溶液混合。反應(yīng)10 min后，在700 nm處測(cè)其吸光度?；旌弦旱奈舛仍礁弑硎緲悠诽崛∫旱倪€原能力越強(qiáng)。

3）清除羥基自由基能力的測(cè)定：按照Yan等[11]描述的方法測(cè)定樣品提取液對(duì)羥基自由基的清楚能力。將2 mL的樣品溶液與2 mL、2 mmol/L的二氯化鐵、2 mL、2 mmol/L的過氧化氫溶液和2 mL、6 mmol/L的水楊酸混合，再加入10 mL的蒸餾水，在37℃的水浴鍋中反應(yīng)30 min。在510 nm處設(shè)置空白對(duì)照測(cè)定其吸光值。陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸和BHT。以樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，清除率為縱坐標(biāo)作圖分析對(duì)羥基自由基的清除能力。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。 清除率（SA）按公式（3）計(jì)算：

式中，A0表示未加樣品混合液的吸光度（2 mL的二氯化鐵+2 mL過氧化氫+2 mL水楊酸）；Ai表示樣品的吸光度 （2 mL的二氯化鐵+2 mL過氧化氫+2 mL水楊酸+2 mL的樣品溶液）；Aj未加過氧化氫溶液樣品的吸光度（2mL的二氯化鐵+2mL水楊酸+2mL的樣品溶液）；SA為樣品對(duì)羥基自由基的清除率（%）。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑對(duì)多酚得率的影響

精確稱取黃參莖葉粉末 0.2 g，按 1∶30的料液比分別加入水、60%的乙醇、60%的甲醇、60%的丙酮、60%的乙酸乙酯 ，60℃下超聲提取30 min，提取2次后合并，并于3 500 r/min離心30 min，取上清液，測(cè)定其多酚含量。比較5種溶劑的提取效果，從中選擇最佳溶劑。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。不同溶劑提取效果見圖1。可知提取得率分別是丙酮＞乙醇＞乙酸乙酯＞甲醇＞水，但由于丙酮有毒，基于得率和安全性的雙重考慮，我們選用提取得率第二的乙醇進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖1 提取溶劑對(duì)多酚得率的影響Fig.1 Influence of the kind of solvent on yield of polyphenol

2.2 超聲波輔助提取單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)多酚得率的影響 按料液比 1∶30，超聲溫度 60℃，超聲時(shí)間 30 min，研究不同濃度的乙醇對(duì)多酚得率的影響，其他步驟參照2.1.1。由圖2可知，隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，多酚得率不斷增大，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，黃參莖葉多酚的提取率最大，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，多酚得率急劇下降；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%時(shí)，多酚類的溶出明顯受到抑制，最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%。

圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)多酚得率的影響Fig.2 Influence of ethanol concentration on yield of polyphenol

2.2.2 超聲溫度對(duì)多酚得率的影響 按料液比1∶30，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，超聲時(shí)間30 min，研究不同超聲溫度對(duì)多酚得率的影響，其他步驟參照2.1.1，結(jié)果見圖3。多酚得率隨著超聲溫度的升高而增大，當(dāng)溫度為 70℃ 時(shí)，多酚得率達(dá)到最高，大于 70℃時(shí)，因溫度過高導(dǎo)致一部分溶劑揮發(fā)損失并且對(duì)多酚成分造成一定程度的破壞，所以提取率反而降低。因此提取溫度選擇70℃為最佳。

圖3 超聲溫度對(duì)多酚得率的影響Fig.3 Influence of ultrasonic temperature on yield of polyphenol

2.2.3 超聲時(shí)間對(duì)多酚得率的影響 按料液比1∶30，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，超聲溫度70℃，研究不同超聲時(shí)間對(duì)多酚得率的影響，其他步驟參照2.1.1，結(jié)果見圖4。隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，多酚得率不斷提高，尤其是在30 min時(shí)，得率的提高幅度較大，在30～50 min得率呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì)，而在60 min時(shí)，得率明顯下降，可能是由于超聲作用時(shí)間過長(zhǎng)，有效成分發(fā)生降解或氧化遭到破壞從而導(dǎo)致得率的降低。因此最佳超聲時(shí)間為30 min。

圖4 超聲時(shí)間對(duì)多酚得率的影響Fig.4 Influence of ultrasonic time on yield of polyphenol

2.2.4 料液比對(duì)多酚得率的影響 按乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，超聲溫度70℃，超聲時(shí)間30 min，研究不同料液比對(duì)多酚得率的影響，其他步驟參照2.1.1，結(jié)果見圖5。增加液料比可提高乙醇提取的效果，并且在料液比1∶35之前，多酚得率提高較快，之后便趨于平緩。料液比在1∶35時(shí)得率最大，但從提取成本考慮因此選擇料液比1∶35。

圖5 料液比對(duì)多酚得率的影響Fig.5 Influence of solid-to-solvent ratio on yield of polyphenol

2.3 響應(yīng)曲面法優(yōu)化黃參莖葉多酚提取工藝

2.3.1 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 根據(jù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，綜合單因素影響試驗(yàn)結(jié)果，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、料液比3個(gè)對(duì)多酚提取影響顯著的因素，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上采用三因素三水平的響應(yīng)面分析法。單因素試驗(yàn)結(jié)果顯示：以乙醇為提取溶劑，乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、超聲溫度70℃、料液比為1∶35時(shí)，黃參莖葉多酚有最大提取率。超聲波輔助提取黃參莖葉多酚的響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析見表2。

表2 Box-Behnken設(shè)計(jì)方案及黃參莖葉多酚得率的測(cè)定結(jié)果Table 2 Box-Behnken CCD matrix and resonses values of polyphenol

應(yīng)用Design expert.V.8.0.5b軟件，結(jié)合表2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行回歸擬合，得到得率對(duì)乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、料液比的二次多項(xiàng)式回歸方程：

式中，Y 為黃參莖葉多酚的預(yù)測(cè)值，x1、x2、x3分別為上述3個(gè)自變量的編碼值，該模型的方差分析結(jié)果見表3，模型系數(shù)顯著性檢驗(yàn)見表4。

表3 模型方差分析Table 3 Variance for regression equation

從表3可知，本實(shí)驗(yàn)選用的模型極顯著 （p＜0.01），失擬項(xiàng)不顯著（p=0.083 1＞0.05），說明模型是合適的，模型的校正決定系數(shù)R2Adj=0.940 4，說明該模型可以解釋94.04%的響應(yīng)值變化，相關(guān)系數(shù)R=0.986 8，說明該模型擬合程度良好，實(shí)驗(yàn)誤差小，該模型是合適的，可以用此模型對(duì)黃參莖葉多酚的提取工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

從表4的回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)可知，方程的二次項(xiàng)的影響均極顯著，交互影響顯著，各一次項(xiàng)顯著性參差不齊，表明各影響因素對(duì)多酚得率的影響不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系，所以可以利用回歸方程來確定最佳提取工藝條件。依據(jù)參數(shù)估計(jì)值可判斷影響因子的主效應(yīng)主次順序?yàn)椋阂掖俭w積分?jǐn)?shù)＞超聲溫度＞料液比。

2.3.2 響應(yīng)曲面分析 根據(jù)回歸方程式（4），作響應(yīng)曲面圖，考察所擬合的響應(yīng)曲面的形狀，分析乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度和料液比對(duì)多酚得率的影響。其響應(yīng)曲面及其等高線見圖6～8。圖6顯示，當(dāng)料液比為最佳值（x3=1∶35）時(shí)，乙醇體積分?jǐn)?shù)和超聲溫度對(duì)多酚得率的交互作用。圖7顯示，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為最佳值（x1=70%）時(shí)，超聲溫度和料液比對(duì)多酚得率的交互作用。圖8顯示，當(dāng)超聲溫度為最佳值（x2=70℃）時(shí)，乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比對(duì)多酚得率的交互作用，三組圖直觀地反映了各因素對(duì)響應(yīng)值的影響，對(duì)應(yīng)的等高圖直觀地反映出各因素交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響，圓形表示二因素交互作用不顯著，橢圓形表示二因素交互作用顯著[11]。

表4 模型各系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果Table 4 Test of significance for regression coefficients

2.3.3 最佳工藝參數(shù)及驗(yàn)證試驗(yàn) 通過design expert8.0優(yōu)化的工藝條件為提取黃參莖葉多酚的工藝優(yōu)化條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)74.25%，超聲溫度70.30℃，料液比1∶34.57，此時(shí)多酚的理論得率為1.145 2%。為檢驗(yàn)響應(yīng)曲面法優(yōu)化結(jié)果的可靠性，采用上述優(yōu)化條件提取黃參莖葉多酚，考慮實(shí)際操作的便利性，將條件優(yōu)化為：乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，超聲溫度70℃，料液比1∶35，在此條件下做3次重復(fù)試驗(yàn)得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果見表5。平均得率達(dá)到了1.1448%，和理論預(yù)測(cè)值相比，其相對(duì)誤差小于1%，因此，基于響應(yīng)曲面法所得的黃參莖葉多酚優(yōu)化提取工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)用價(jià)值。

圖6 乙醇體積分?jǐn)?shù)（x1）、超聲溫度（x2）及其相互作用對(duì)多酚得率影響的響應(yīng)面和等高線Fig.6 Response surface plot and its contour plot of the effect of ethanol concentration （x1）and ultrasonic temperature （x2）and theirs mutual interactions on yield of polyphenol

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Results of experimental verifications

圖7 超聲溫度（x2）、料液比（x3）及其相互作用對(duì)多酚得率影響的響應(yīng)面和等高線Fig.7 Response surface plot and its contour plot of the effect of ultrasonic temperature（x2）and solid-tosolvent ratio （x3）and theirs mutual interactions on yield of polyphenol

圖8 乙醇體積分?jǐn)?shù)（x1）、料液比（x3）及其相互作用對(duì)多酚得率影響的響應(yīng)面和等高線Fig.8 Response surface plot and its contour plot of the effect of ethanol concentration （x1）and solid-tosolvent ratio （x3）and theirs mutual interactions on yield of polyphenol

2.4 黃參莖葉多酚的抗氧化能力

2.4.1 清除DPPH自由基的能力 圖9為不同質(zhì)量濃度的黃參莖葉多酚提取物和陽(yáng)性對(duì)照清除DPPH自由基的能力。從圖9可知，隨著多酚提取物質(zhì)量濃度的增加（由0.1~1.0 mg/mL），DPPH自由基的清除率由33.01%增加到83.88%。與同質(zhì)量濃度的抗壞血酸和BHT相比較，樣品的清除率在低質(zhì)量濃度時(shí)稍微高于BHT，高質(zhì)量濃度時(shí)和BHT相當(dāng)，但低于抗壞血酸的清除率。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除率在92.4%~98.1%范圍內(nèi)。

圖9 黃參莖葉多酚、BHT和抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除效果Fig.9 Scavenging effect of Sphallerocarpus gracilis stem leaves polyphenol，BHT and VC on DPPH radical

2.4.2 清除羥基自由基的測(cè)定 由圖10不同質(zhì)量濃度的黃參莖葉多酚和陽(yáng)性對(duì)照對(duì)羥基自由基的清除效果可知，當(dāng)多酚質(zhì)量濃度由0.1 mg/mL增加至1.0 mg/mL時(shí)，其對(duì)羥基自由基的清除率由22.95%上升到44.79%，且低質(zhì)量濃度時(shí)樣品對(duì)羥基自由基的清除率略低于BHT，高濃度時(shí)和BHT基本持平，但抗壞血酸對(duì)羥基自由基的清除率明顯高于樣品和BHT。從圖10還可看出，隨著質(zhì)量濃度的增加，樣品和BHT對(duì)羥基自由基的清除能力并沒有呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。

圖10 黃參莖葉多酚、BHT和抗壞血酸對(duì)羥基自由基的清除效果Fig.10 Scavenging effect Sphallerocarpus gracilis stem leaves polyphenol，BHT and VC on hydroxyl free radical

2.4.3 提取物的還原能力 黃參莖葉多酚、抗壞血酸和BHT的還原能力見圖11?？梢钥吹?，隨著多酚質(zhì)量濃度的增加，其還原力也隨之增加。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，還原力與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，同等質(zhì)量濃度條件下，還原能力的大小順序?yàn)閂C＞BHT＞黃參莖葉多酚。還原能力的測(cè)定中，多酚類化合物的存在使得鐵氰化物中的三價(jià)鐵變成以Fe2+存在的復(fù)雜化合物。根據(jù)文獻(xiàn)[13-15]的研究報(bào)道，測(cè)定多酚類物質(zhì)的還原能力對(duì)解釋說明它們的抗氧化效果和還原能力之間的關(guān)系是必要的。多酚類化合物是良好的電子供體，能夠通過使自由基轉(zhuǎn)化成更穩(wěn)定的產(chǎn)物而使終止自由基反應(yīng)鏈。

3 結(jié)語(yǔ)

根據(jù)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)曲面法得到黃參莖葉多酚的最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)74.25%、提取溫度 70.30 ℃、料液比（g/mL）34.57、超聲時(shí)間為30 min，此時(shí)黃參莖葉多酚的提取得率是1.1448%，和理論預(yù)測(cè)值相比，其相對(duì)誤差小于1%，因此采用響應(yīng)曲面法對(duì)黃參莖葉多酚超聲波輔助提取條件進(jìn)行優(yōu)化可行。依據(jù)參數(shù)估計(jì)值可判斷影響因子的主效應(yīng)主次順序?yàn)椋阂掖俭w積分?jǐn)?shù)＞超聲溫度＞料液比。

圖11 黃參莖葉多酚、BHT和抗壞血酸的還原能力Fig.11 Reducing power of Sphallerocarpus gracilis stem leaves polyphenol，BHT and VC

體外抗氧化試驗(yàn)研究表明：黃參莖葉多酚具有一定的還原力和清除羥基自由基的能力，并且對(duì)DPPH自由基有較強(qiáng)的清除效果，黃參莖葉多酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以開發(fā)為一種高效、天然的抗氧化劑。

本研究結(jié)果表明：黃參的莖葉多酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性，這不僅為黃參莖葉的研究提取了基礎(chǔ)的理論數(shù)據(jù)，而且還為黃參的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了參考依據(jù)。黃參作為一種藥食兩用的植物，若能在保健功效和藥用價(jià)值等方面進(jìn)行開發(fā)，其應(yīng)用前景將更加廣闊。開發(fā)黃參莖葉資源，變資源優(yōu)勢(shì)為經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)，推動(dòng)地方經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，使黃參這種藥食兩用的資源產(chǎn)生更大的經(jīng)濟(jì)效益與社會(huì)效益。

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