紫外分光光度法測(cè)定納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量

劉巖?張英鴿　孫嵐?姚紅娟

摘 要 目的 建立納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量的測(cè)定方法。方法 采用紫外分光光度法，起始波長(zhǎng)：800nm，終止波長(zhǎng)：190nm，掃描間隔：1.0nm，參比溶劑：5%葡萄糖注射液。測(cè)定卡鉑/ 5%葡萄糖溶液的紫外吸收譜，對(duì)濃度與吸光度值間的線性關(guān)系、方法的精密度、重復(fù)性以及樣品的穩(wěn)定性、回收率進(jìn)行考察，對(duì)C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)中的卡鉑含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 卡鉑/ 5%葡萄糖溶液在229nm處出現(xiàn)最大吸收峰；在濃度范圍0.64 ～64 ?g/mL內(nèi)，吸光度值與卡鉑濃度具有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），方法具有良好的精密度（n=6，RSD=0.13%）與重復(fù)性（n=6 RSD=1.69%），樣品性質(zhì)穩(wěn)定，在室溫避光條件下保存無顯著降解（n=5，RSD=0.63%），日內(nèi)回收率95.96%～96.93%，日間回收率95.68%～97.53%；C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)中，卡鉑的含量為50.57%。結(jié)論 該方法可用于對(duì)納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑的含量進(jìn)行測(cè)定，具有良好的精密度與重復(fù)性，操作簡(jiǎn)單，有較好的實(shí)用性。

關(guān)鍵詞 卡鉑 紫外分光光度法 納米藥物遞送系統(tǒng)

卡鉑（Carboplatin，CBP）的化學(xué)名稱為順-二氨-1，1-環(huán)丁酸烷鉑，是繼順鉑之后的第二代鉑類抗癌藥物，對(duì)肺癌、卵巢癌等多種癌癥具有良好的治療效果[1～3]，相對(duì)于順鉑具有更小的腎、胃腸毒性[4，5]。

無機(jī)納米材料C60作為抗癌藥物載體具有載藥量大、控釋性好、組織靶向性強(qiáng)的特點(diǎn)，建立C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)可以增強(qiáng)卡鉑對(duì)腫瘤組織的靶向性、提高腫瘤細(xì)胞外周與胞內(nèi)的藥物濃度，從而達(dá)到提高藥效，降低毒副作用的目的。

目前，卡鉑的檢測(cè)方法主要采用高效液相色譜[6～8]和原子吸收光譜[9，10]，這2種方法具有良好的靈敏度和較強(qiáng)的專屬性，但儀器價(jià)格昂貴、重現(xiàn)性欠佳。還有報(bào)道采用二階導(dǎo)數(shù)光譜法[11]、絡(luò)合分光光度法[12，13]、電感耦合等離子質(zhì)譜/發(fā)射光譜法[14]對(duì)卡鉑含量進(jìn)行測(cè)定，但這些方法因樣品預(yù)處理過程復(fù)雜、樣品耗量大、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等問題而沒有被廣泛采用。納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量的測(cè)定不僅要求方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬，還要考慮C60本身的吸附性可能對(duì)儀器造成的損害和背景干擾問題。紫外分光光度法具有操作簡(jiǎn)單、迅速、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好，吸附于比色池中的C60易于去除不會(huì)對(duì)儀器造成嚴(yán)重?fù)p害，同時(shí)C60在紫外光區(qū)內(nèi)無強(qiáng)吸收，不會(huì)對(duì)卡鉑的測(cè)定造成干擾。本文采用紫外分光光度計(jì)建立一種快速、準(zhǔn)確的卡鉑分析方法，以用于測(cè)定卡鉑在納米藥物遞送系統(tǒng)中的含量，為卡鉑的藥物開發(fā)打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

UNIC2800紫外可見分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司），KQ-500DE數(shù)控超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），AC-120S精密電子分析天平（德國Sartorius公司），卡鉑（北京偶合科技有限公司，純度≥98%），C60（濮陽市永新富勒烯科技有限公司，純度99.9%），5%葡萄糖注射液（石家莊四藥集團(tuán)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)條件

起始波長(zhǎng)：800nm，終止波長(zhǎng)：190nm，掃描間隔：1.0nm，參比溶劑：5%葡萄糖注射液。圖1為卡鉑在5%葡萄糖溶液中的紫外吸收光譜，最大吸收峰位置為229nm。

2.2 線性關(guān)系考察

精確稱取卡鉑樣品2.8mg，用25mL 5%葡萄糖注射液定溶，超聲10min使卡鉑充分溶解，得到濃度為112?g/mL樣品，作為母液備用。配制濃度為64?g/mL、32?g/mL、25.6?g/mL、19.2?g/mL、12.8?g/mL、6.4?g/mL、3.2?g/mL、1.6?g/mL、0.64?g/mL的待測(cè)樣品，分別取上述樣品3mL于比色池中，在229nm處測(cè)定吸光度值，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。以樣品濃度（C， ?g/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度值（A）為縱坐標(biāo)，做線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），結(jié)果表明在0.64～64 ?g/mL范圍內(nèi)，卡鉑濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2.3精密度測(cè)定

精確稱取1.2mg卡鉑，用30mL 5%葡萄糖注射液溶解，配制濃度為40?g/mL的待測(cè)樣品，在229nm處連續(xù)平行測(cè)定6次，記錄吸光度值。結(jié)果：6次測(cè)定的吸光度值RSD=0.13%，表明方法精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性測(cè)定

取2.3中所配濃度為40?g/mL的溶液，室溫條件下避光保存，每天測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定5天。5天檢測(cè)結(jié)果的RSD=0.63%，說明在卡鉑在5%葡萄糖溶液中室溫條件下避光保存較為穩(wěn)定，未出現(xiàn)顯著降解。

2.5 重復(fù)性測(cè)定

重新稱取6份質(zhì)量為1.2mg的卡鉑樣品，如2.3所述方法配制濃度為40?g/mL的待測(cè)樣，測(cè)定6份樣品的吸光度值，分析批內(nèi)變異情況。結(jié)果RSD=1.69%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.6 回收率測(cè)定

精確稱取卡鉑2.0mg，按高、中、低水平配成濃度為80?g/mL、40?g/mL、20?g/mL的待測(cè)樣品，每日測(cè)定3次，連續(xù)檢測(cè)3天，根據(jù)吸光度值和2.2項(xiàng)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算回收率，見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，卡鉑的日內(nèi)回收率為95.96%～96.93%，日間回收率為95.68%～97.53%，說明回收率良好。

2.7 載藥量測(cè)定

精確稱取C60 10.0mg、卡鉑24mg于錐形瓶中，加入5%葡萄糖注射液20mL，避光攪拌24h，以16000r/min離心8min，收集上清液并稀釋10倍，在229nm處測(cè)定吸光度值，按照公式：

（m游離藥量 =C×稀釋倍數(shù)×稀釋體積，C為測(cè)定吸光度值代入2.2項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算結(jié)果）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見表2）。

3 討論

以C60為藥物載體對(duì)化療藥物卡鉑進(jìn)行吸附，可以實(shí)現(xiàn)提高藥效、降低毒副作用的目的。因C60經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間攪拌將有少量形成穩(wěn)定存在于水中的納米晶顆粒[15]，所以在收集到的游離藥液中存在C60，如果按照中國藥典中所采用的高效液相色譜法[16]對(duì)C60/卡鉑藥物遞送系統(tǒng)中的卡鉑含量進(jìn)行測(cè)定，則可能遇到2點(diǎn)問題：（1）測(cè)定樣品中存在的C60在色譜中高保留，造成色譜柱污染；（2）譜峰不佳。而其它檢測(cè)方法如電感耦合等離子質(zhì)譜/發(fā)射光譜法、絡(luò)合分光度法則需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，既增加了操作的復(fù)雜性又不利于回收樣品，還可能因預(yù)處理不當(dāng)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用紫外分光光度法對(duì)納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑的含量進(jìn)行測(cè)定，可以實(shí)現(xiàn)方便、快速、準(zhǔn)確的定量，同時(shí)避免C60的干擾，操作簡(jiǎn)單，是一種良好的分析方法。

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