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    Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其影響探討

    2017-03-09 07:16:20張艷菊戴紅艷邢明清
    關(guān)鍵詞:乳鼠纈沙坦染色

    張艷菊,管 軍,戴紅艷,邢明清

    (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院,山東 青島 266000)

    ?實(shí)驗(yàn)研究?

    Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其影響探討

    張艷菊,管 軍,戴紅艷,邢明清

    (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院,山東 青島 266000)

    目的對Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其所產(chǎn)生的影響進(jìn)行分析。方法建立糖尿病性心肌病乳鼠模型,將該模型中的樣本分為纈沙坦干預(yù)組和未治療組兩組,另選Wistar乳鼠作為對照組,穩(wěn)重心臟標(biāo)本,并通常Masson三色染色以及HE染色對纈沙坦干預(yù)組、DCM模型組以及對照組的心肌細(xì)胞狀態(tài)。結(jié)果相比于對照組,DCM模型組細(xì)胞核大小不規(guī)則、心肌細(xì)胞排列紊亂,P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論P(yáng)eriostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質(zhì)纖維化與心臟重構(gòu)方面發(fā)揮作用。

    纈沙坦;乳鼠心肌組織;Periostin

    1 資料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    選取60只健康Wistar乳鼠,體重在180 g~220 g之間。

    1.2 儀器設(shè)備

    本次實(shí)驗(yàn)所選取的設(shè)備包含低溫高速離心機(jī)、微量移液器、病理切片機(jī)、玻片烘干機(jī)、架盤藥物天平、轉(zhuǎn)移電泳槽以及轉(zhuǎn)移電泳儀等。

    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

    1.3.1 動物模型所用試劑

    本次實(shí)驗(yàn)所選取的實(shí)驗(yàn)試劑包含鏈脲佐菌素粉劑、檸檬酸緩沖液以及纈沙坦膠囊等。

    1.3.2 蘇木精-伊紅

    本次實(shí)驗(yàn)所配置的Harris蘇木素溶液中包含中性樹膠、100%乙醇、90%乙醇以及70%乙醇等。

    1.3.3 Masson三色染色試劑

    本次實(shí)驗(yàn)所需要的Masson三色染色劑包含醋酸水溶液、苯胺藍(lán)染色液、氨水水溶液、三氯化鐵水溶液等。

    1.4 實(shí)驗(yàn)方法

    1.4.1 構(gòu)建DCM乳鼠模型

    本次實(shí)驗(yàn)所選取的60只研究樣本均以標(biāo)準(zhǔn)乳鼠飼料進(jìn)行喂養(yǎng),將溫度與溫度水平調(diào)整至適宜的范圍內(nèi)。經(jīng)過1周的喂養(yǎng)后,將其分為兩組,將10只對照組以及50只DCM模型組,經(jīng)過12 h的禁食處理后一次性腹腔注射STZ溶液60 mg/kg,對照且注射體積相同的檸檬酸緩沖液。乳鼠糖尿病依照以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診:隨機(jī)血糖達(dá)到16.7 mmol/L以上,空腹血糖達(dá)到11.1 mmol/L以上。41只造模成功的實(shí)驗(yàn)樣本則納入藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)范圍,將其中的20只標(biāo)記為纈沙坦干預(yù)組,另外21只標(biāo)記為DCM模型組,對其進(jìn)行灌胃處理。以周為時(shí)間單位測量兩組樣本的血糖水平以及體質(zhì)量,對其尿量變化、進(jìn)食量以及生長情況等方面進(jìn)行觀察。

    1.4.2 取材及處理

    在實(shí)驗(yàn)研究開展至第16周后對全部研究樣本進(jìn)行麻醉處理,稱重樣本心臟,再剪掉左右心房,完成沖洗處理后再將水分吸干,測量左心室重量,計(jì)算左心系數(shù)比,根據(jù)計(jì)算結(jié)果確定心室肥厚水平;利用濃度為10%的甲醛溶液將樣本浸泡起來,將剩余的樣本材料冷藏起來備用。

    1.4.3 病理學(xué)檢測

    取出左心室標(biāo)本,對其進(jìn)行脫水處理,用石蠟包塊后再切成片狀,完成烘干處理后備用。用無水乙醇將切片漂洗5分鐘,依次利用濃度為95%,80%,70%的乙醇溶液分別浸泡3分鐘,再利用蒸餾水以及PBS緩沖液進(jìn)行最后的漂洗。

    利用Masson三色染色和蘇木素-伊紅染色對切片樣本進(jìn)行染色處理。

    利用光鏡對心肌細(xì)胞的形態(tài)分布、膠原含量以及心肌細(xì)胞進(jìn)行觀察。

    1.4.4 免疫組化檢測

    利用二甲苯溶液對石蠟切片進(jìn)行脫蠟處理;消除樣本過氧化物酶活性,將樣本于氧化氫酶溶液浸泡,再利用蒸餾水對其進(jìn)行沖洗;滴加櫞酸鈉溶液,加熱三分鐘后再自然冷卻,再浸泡于PBS緩沖液中反復(fù)3次,每次3 min,進(jìn)行抗原修復(fù)處理;于切片上滴加胎牛血清,孵育20 min,并將其余溶甩出;再將材料進(jìn)行二甲苯透明以及梯度酒精脫水處理,完成樹膠封片處理后再對其進(jìn)行觀察。

    2 結(jié) 果

    2.1 實(shí)驗(yàn)樣本情況

    乳鼠樣本在實(shí)驗(yàn)過程中可能會持續(xù)處于多食、多飲、高血糖狀態(tài),出現(xiàn)感染、爛尾、皮毛暗淡以及體征明顯減輕等方面的癥狀。利用纈沙坦對其進(jìn)行干預(yù)治療,能夠有效改善上述癥狀,相比于DCM模型組,實(shí)驗(yàn)樣本的狀態(tài)更加良好。

    對照組樣本皮毛有光澤、反應(yīng)靈敏并且精神狀態(tài)良好。

    DCM造模組樣本在STZ注射環(huán)節(jié)中出現(xiàn)8例死亡現(xiàn)象,造成這種現(xiàn)象的原因可能與糖尿病酮癥酸以及感染中毒有關(guān)。其中不符合成模標(biāo)準(zhǔn)但血糖正常,剔除。共有21只DCM模型組樣本以及10只對照組樣本,20只纈沙坦治療組樣本納入到后續(xù)實(shí)驗(yàn)中。

    2.2 血糖監(jiān)測

    實(shí)驗(yàn)前空白對照組平均空腹血糖(6.17士0.71)、DCM模型組(7.13士0.50)、纈沙坦組(6.93士0.43);

    實(shí)驗(yàn)后1周末空白對照組平均空腹血糖(7.47士1.59)、DCM模型組(25.33士2.03)、纈沙坦組(29.50士1.53);

    實(shí)驗(yàn)后4周末空白對照組平均空腹血糖(7.20士0.46)、DCM模型組(26.60士2.58)、纈沙坦組(27.80士0.46);

    實(shí)驗(yàn)后8周末空白對照組平均空腹血糖(7.57士0.52)、DCM模型組(29.51士1.53)、纈沙坦組(24.13士0.78)。

    3 討 論

    經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),相比于對照組,DCM模型組細(xì)胞核大小不規(guī)則、心肌細(xì)胞排列紊亂,P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述,Periostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質(zhì)纖維化與心臟重構(gòu)方面發(fā)揮作用,實(shí)驗(yàn)價(jià)值值得推廣。

    [1] 劉文旗.Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其影響[D].青島大學(xué),2015,03(03):27-28.

    [2] 趙婷婷.纈沙坦對糖尿病乳鼠腦組織AGE-RAGE、氧化應(yīng)激及內(nèi)皮功能的影響[D].山東大學(xué),2007,05(04):37-38.

    本文編輯:李 豆

    R587.1

    B

    ISSN.2095-8242.2017.13.2391.02

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