山酢漿草根頸試管苗培養(yǎng)的研究

宋詩迎等

摘要：為實現(xiàn)栽培、保護野生種質(zhì)的目的，本研究以山酢漿草的根頸為材料，進(jìn)行了試管苗的培養(yǎng)和繼代繁殖培養(yǎng)、試管苗根莖的扦插和移植研究，建立起根頸試管苗培養(yǎng)技術(shù)。結(jié)果表明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是試管苗培養(yǎng)和試管苗根莖繼代繁殖培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；在溫室苗床上試管苗根莖扦插成活率為96%，繁殖速度提高了2.9倍；試管苗移植成活率為98.8%，移植成活的試管苗保持了野生山酢漿草的所有植物學(xué)性狀。

關(guān)鍵詞：山酢漿草；試管苗；繁殖

中圖分類號：S543+.904.3文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2013）07-0009-03

山酢漿草（Oxalis acetosella）又稱白花酢漿草、三葉銅錢草等，屬于酢漿草科酢漿草屬多年生草本植物，在我國黑龍江、吉林及遼寧地區(qū)的本溪、鳳城和蓋州等地都有分布^[1]，生長在針葉林、針闊混交林、闊葉林及灌叢下陰濕地。酢漿草含黃酮類、葒草素等成分，全草可作中草藥使用，具有活血化瘀、清熱解毒、利尿通淋等功效，能治勞傷疼痛、跌打損傷、無名腫毒、麻風(fēng)、疥癬等疾病^[2]。近年來遼寧東部地區(qū)的養(yǎng)雞農(nóng)民發(fā)現(xiàn)，將山酢漿草的干粉作為蛋雞的飼料添加劑使用，能明顯地降低蛋雞的發(fā)病率，提高養(yǎng)殖效益。為此，一個時期以來，遼寧東部地區(qū)養(yǎng)雞農(nóng)民每年都要數(shù)次采收山酢漿草，作為飼料添加劑或者出售，導(dǎo)致山酢漿草的野生資源受到了嚴(yán)重破壞，不僅嚴(yán)重影響其作為飼料添加劑的使用，還使本來分布和數(shù)量都很有限的這一藥用植物更加稀少。雖然目前已有栽培植物尤其是酢漿草屬植物組織培養(yǎng)的研究報道^[3～10]，但迄今未有山酢漿草的相關(guān)研究報道。為實現(xiàn)栽培、保護野生種質(zhì)的目的，研究者對其進(jìn)行了根頸愈傷組織的無性系繁殖研究。

1材料與方法

1.1試驗材料

6月中旬，從本溪灌叢下陰濕地采取生長旺盛的山酢漿草，將具有根頸的根剪下作為試驗材料。

1.2材料滅菌

將試驗材料放到500 ml的磨口廣口瓶中，用無菌水搖晃洗滌5～10 min，蒸餾水搖晃洗滌5 min左右，移到超凈工作臺上，用75%的乙醇滅菌約10 s，再用0.1% HgCl2滅菌2 min，無菌水洗滌2次，再用飽和的次氯酸鈉溶液滅菌8 min，最后用無菌水洗滌6次，即可獲得無菌材料^[11]。

1.3培養(yǎng)條件

光照強度1 500 lx，培養(yǎng)溫度22℃，其它培養(yǎng)條件參見六道木嫩芽快速繁殖的研究^[12]。

1.4試驗方法

1.4.1根頸試管苗培養(yǎng)把材料上的根頸從無菌材料上切下，接種到以1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT為基本培養(yǎng)基、分別添加0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L 2，4-D、NAA、IBA、IAA 4種生長素的培養(yǎng)基上，進(jìn)行不同種類、不同濃度生長素對根頸試管苗培養(yǎng)影響的試驗。試驗重復(fù)2次，每種培養(yǎng)基接種培養(yǎng)20個根頸。

1.4.2試管苗根莖的繼代繁殖培養(yǎng)把在1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的具有生長點的根莖，用無菌手術(shù)剪子剪成具有2個生長點的根莖段后，繼續(xù)接種到該種培養(yǎng)基上，進(jìn)行試管苗根莖的繼代繁殖培養(yǎng)。試驗重復(fù)2次，每次繼代繁殖培育6代，接種200個根莖段。

1.4.3試管苗根莖的扦插繼代培養(yǎng)繁殖的試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，將根莖剪成具有2個生長點的根莖段后，扦插到溫室苗床上厚約6 cm的扦插基質(zhì)（由1/2園土與1/2河沙組成）中，進(jìn)行試管苗根莖段的扦插試驗。移栽后前12 d要保持遮陰、空氣相對濕度為85%的生長條件，之后按照溫室內(nèi)正常條件進(jìn)行管理。試驗重復(fù)2次，扦插的數(shù)量分別為380株和260株。

1.4.4根莖扦插試管苗的移植5月上旬，當(dāng)外界最低溫度達(dá)到15℃時，把在溫室苗床上由根莖扦插成活的試管苗移植到大連郊區(qū)水庫旁灌叢下的陰濕地上。移植試驗一次性完成，共移植605株。移植后，除移植時澆1次透水外不進(jìn)行其它管理。移植的同時，從本溪挖來20株正常生長的野生山酢漿草定植于試管苗旁作為對照。

2結(jié)果及分析

2.1不同種類、不同濃度生長素對試管苗培養(yǎng)的影響

培養(yǎng)到60 d時觀察統(tǒng)計，結(jié)果見表1。只在添加不同濃度NAA和IAA的培養(yǎng)基上有試管苗形成，且只在添加0.2、0.4 mg/L IAA的 2種培養(yǎng)基上有根莖形成。從試管苗、根莖的生長率、長勢 4個方面看，添加0.4 mg/L IAA的培養(yǎng)基生長效果最好。在該種培養(yǎng)基上培養(yǎng)9 d時，有培養(yǎng)材料在根頸下部長出白色的根，上部長出葉片，生長成試管苗；之后，隨著試管苗的生長率不斷增加，又有試管苗會相繼生長出根莖；培養(yǎng)到60 d時，不僅試管苗生長旺盛，且所有的試管苗都長出根莖，根莖平均長度為2.6 cm，每條根莖上有2～8個可見的生長點。2次重復(fù)試驗的結(jié)果基本一致。以上結(jié)果說明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是山酢漿草根頸試管苗培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

2.2試管苗根莖的繼代繁殖培養(yǎng)

試管苗根莖的繼代繁殖培養(yǎng)周期為50 d，其繁殖的試管苗生長狀態(tài)比使用根頸為材料培養(yǎng)的試管苗更旺盛，每株試管苗的平均根莖長度為4.4 cm、平均有8.9個可見生長點，每一代的平均繁殖系數(shù)為4.2，并且采用此方法培養(yǎng)的試管苗沒有無效苗，所有的試管苗都生長旺盛。以上結(jié)果說明，1/2MS+ 15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA也是山酢漿草試管苗根莖繼代繁殖培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

2.3試管苗根莖的扦插

觀察表明，扦插10 d后有根莖段開始發(fā)芽，并生長為試管苗。扦插40 d后統(tǒng)計顯示，2次扦插共成活614株，平均成活率為96%。以根莖為材料進(jìn)行扦插，每株試管苗的根莖平均可切成3.9個扦插的莖段，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。

2.4根莖扦插試管苗的移植

移植后的觀察表明，與同期移栽的野生苗相比，移植的試管苗容易成活，前期生長速度慢、植株較小，60 d后生長開始加速，秋季出現(xiàn)了生長旺盛、植株整齊、葉色濃綠、落葉推遲6 d左右等特點。移植70 d后統(tǒng)計表明，共移植成活598株，成活率為98.8%。由根莖培養(yǎng)的試管苗保持了野生山酢漿草的所有植物學(xué)性狀，移植的試管苗當(dāng)年正常開花結(jié)果。

3討論

本研究通過兩條途徑進(jìn)行繁殖：一是試管苗根莖繼代培養(yǎng)的方法，50 d為一個培養(yǎng)周期，平均繁殖系數(shù)為4.2，按照這個繁殖速度，1株試管苗的根莖1年能繁殖出2萬多株試管苗；二是在苗床上扦插根莖，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。以上結(jié)果說明，本研究建立的繁殖技術(shù)繁殖速度快，能夠滿足栽培、保護野生種質(zhì)對種苗的需求。

在對試管苗進(jìn)行繼代繁殖培養(yǎng)時，其繁殖周期比直接由根頸培養(yǎng)試管苗的培養(yǎng)周期縮短了10 d。于馨恒等^[13]在進(jìn)行小天仙子的研究中，也觀察到這種現(xiàn)象。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的主要原因有：一是由根頸直接培養(yǎng)試管苗時，根頸材料需經(jīng)過滅菌處理，在滅菌中材料可能受到嚴(yán)重傷害，接種到培養(yǎng)基上后需要恢復(fù)培養(yǎng)一段時間；二是根頸是在土壤中生長的，接種到培養(yǎng)基上后對新環(huán)境需要有一個適應(yīng)過程。而繼代繁殖培養(yǎng)時，其根莖不需經(jīng)過滅菌處理，且是在相同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的，試管苗已經(jīng)適應(yīng)了這種環(huán)境條件，避免了恢復(fù)培養(yǎng)及適應(yīng)過程所需要的時間。

參考文獻(xiàn)：

[1]

李書心. 遼寧植物志（上冊） [M]. 沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社， 1988.

[2]南京中醫(yī)藥大學(xué). 中醫(yī)藥大辭典（上冊） [M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2006.

[3]陳曉流， 崔美， 陳學(xué)森， 等. 草莓新品系妙紫組培快繁技術(shù)研究 [J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012， 44（5）：17-19.

[4]孫洪雁， 孫清榮， 單公華， 等. 魯棗1號組織培養(yǎng)和植株再生體系研究 [J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012， 44（1）：14-16.

[5]李霖， 宋宜穎， 魯潤龍， 等. 紫葉酢漿草的組織培養(yǎng) [J]. 植物生理學(xué)通訊， 2002， 38（4）：360.

[6]高貴珍， 張興桃， 劉小陽， 等. 三角紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)與快速繁殖 [J]. 植物資源與環(huán)境學(xué)報， 2004， 13（1）：62-63.

[7]胡國富， 李鳳蘭， 胡寶忠. 三角紫葉酢漿草的組織培養(yǎng) [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2008，6：176-178.

[8]劉建， 王永清， 王利， 等. 糖分對三角紫葉酢漿草葉片組培苗形成的影響 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， 34（7）：1348-1349.

[9]王利， 王永清， 張帆. 三角酢漿草離體培養(yǎng)植株再生的研究 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2005， 33（2）：238-239，315.

[10]王鈺， 阮龍， 武廷章， 等. 三角紫葉酢漿草組培快繁技術(shù)的研究 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報， 2006， 33（2）：230-233.

[11]安利佳， 姜長陽. 植物組織培養(yǎng)導(dǎo)論 [M]. 大連：遼寧師范大學(xué)出版社， 1996.

[12]汪思齊， 楊萌萌， 宋年平， 等. 六道木嫩芽快速繁殖的研究 [J]. 山東林業(yè)科技， 2012，5：12-14.

[13]于馨恒， 劉兵， 王春露， 等. 小天仙子組織培養(yǎng)研究 [J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技， 2011，3：47-48.