微柱凝膠技術(shù)在臨床安全輸血中的應(yīng)用

金燕萍，江 銘，賈方明

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科，上海 200020）

輸血治療作為一種特殊的治療手段，已越來越廣泛地被應(yīng)用于臨床治療和挽救患者的生命。輸血前對患者進(jìn)行血型鑒定、抗體篩選、交叉配血是保障輸血安全的關(guān)鍵措施，也是避免輸血不良反應(yīng)的基本條件。由血型不規(guī)則抗體引起的輸血不良反應(yīng)多為急、慢性溶血性輸血反應(yīng)[1]，近年來報道很少，一個很大的原因是輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)迅速發(fā)展，試驗(yàn)的靈敏度越來越高。人類紅細(xì)胞上抗原非常復(fù)雜，目前被發(fā)現(xiàn)30 多個，而臨床上常規(guī)的血型鑒定只檢測ABO 系統(tǒng)和Rh 系統(tǒng)的D 抗原。因此，輸血前對受血者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查和交叉配血試驗(yàn)尤為重要。不規(guī)則抗體是指抗A、抗B 以外的血型抗體，多為IgG 類抗體，主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激而產(chǎn)生，在鹽水介質(zhì)中IgG 類抗體不能引起紅細(xì)胞凝集，只能使相應(yīng)的紅細(xì)胞致敏。IgG 類不規(guī)則抗體可引起受血者溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病[1]?？煽康膶?shí)驗(yàn)方法對確保輸血安全有著至關(guān)重要的作用。目前臨床上常用的抗體篩查和交叉配血方法包括鹽水法、酶法、凝聚胺法等。微柱凝膠技術(shù)是目前國際公認(rèn)的安全輸血推薦方法之一，其避免了傳統(tǒng)交叉配血方法存在的缺陷，安全性高，操作簡單、快速，且靈敏度高，在臨床輸血中得到廣泛推廣[2]。為確保臨床輸血安全，有效避免急、慢性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，我院本科室對近5 年來6 630 例需要輸血治療的患者采用微柱凝膠法進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選和交叉配血試驗(yàn)，同時與凝聚胺法進(jìn)行比較。本研究結(jié)果提示2 種方法結(jié)合使用、互相驗(yàn)證，大大提高了輸血的安全性，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

資料與方法

一、資料

收集2014 年7 月至2019 年6 月間在我院需輸血治療的住院患者6 630 例，其中男性3 783 例，女性2 847 例，年齡為16～87 歲。

二、方法

1.試劑和儀器檢測試劑：抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠法）由北京佰利申科貿(mào)有限公司提供；改良凝聚胺試劑、篩選細(xì)胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。檢測儀器中，BASO 2005-2 血清學(xué)專用離心機(jī)由臺灣貝索企業(yè)有限公司提供；微柱凝膠卡專用離心機(jī)（DG Spin）和孵育器（DG Therm）由北京佰利申科貿(mào)有限公司提供。

2.微柱凝膠法和凝聚胺法：應(yīng)用微柱凝膠法和凝聚胺法對6 630 例患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，比較2 種檢測方法對不規(guī)則抗體的檢出率；同時對這些患者選擇ABO 血型及Rh（D）血型同型的紅細(xì)胞懸液采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血，并用凝聚胺法對同樣的標(biāo)本進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)作為對照，觀察2 種配血方法檢出配血不合的靈敏度。微柱凝膠法交叉配血試驗(yàn)及抗體篩查試驗(yàn)、凝聚胺交叉配血試驗(yàn)及抗體篩查試驗(yàn)均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

3.統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS 25.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、2 種方法行不規(guī)則抗體篩查的結(jié)果比較

6 630 例患者的血標(biāo)本，用微柱凝膠法進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，檢出不規(guī)則抗體35 例，檢出率為0.53%；用凝聚胺法進(jìn)行篩查，檢出不規(guī)則抗體26 例，檢出率為0.39%，2 種方法間的不規(guī)則抗體檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.33，P＞0.05）（見表1）。

二、2 種方法行交叉配血的情況比較

6 630 例患者的血標(biāo)本，采用微柱凝膠法行交叉配血試驗(yàn)，有48 例配血不合，不合率為0.72%；采用凝聚胺法行交叉配血試驗(yàn)，有30 例配血不合，不合率為0.45%，2 種方法間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.18，P＜0.05）。

三、2 種交叉配血方法結(jié)果的配血不合分析

微柱凝膠法檢出的48 例交叉配血不合，其中34 例是由不規(guī)則抗體引起的，13 例是由自身抗體引起，1 例是類B 孟買血型。凝聚胺法檢出的30 例交叉配血不合的患者，其中24 例由不規(guī)則抗體引起，5 例由自身抗體引起，1 例為類B 孟買血型引起（見表2）。

四、2 種交叉配血試驗(yàn)的靈敏度比較

2 種方法交叉配血不合的患者經(jīng)抗體鑒定，有35 例患者存在不規(guī)則抗體，13 例自身抗體，1 例類孟買血型，真正配血不合需謹(jǐn)慎輸血的有49 例。微柱凝膠法配血不合的48 例，有1 例在微柱凝膠法配血顯示配合，但在凝聚胺法配血時顯微鏡下有凝集，經(jīng)抗體鑒定，未確定其特異性。微柱凝膠法的靈敏度為97.96%；凝聚胺法有30 例配血不合，其靈敏度為61.22%。微柱凝膠法交叉配血試驗(yàn)的靈敏度明顯高于凝聚胺法（χ2=20.36，P＜0.05）。

表1 微柱凝膠法與凝聚胺法不規(guī)則抗體篩查情況比較[n（%）]

表2 2 種交叉配血方法配血不合情況分析（n）

討 論

隨著輸血醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，輸血技術(shù)也在不斷完善。輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測是輸血的關(guān)鍵性步驟，靈敏、準(zhǔn)確的檢測技術(shù)是臨床安全、有效輸血的重要保證?？贵w篩查是檢測患者除了抗A、抗B 以外的血型抗體。雖然不規(guī)則抗體在國內(nèi)正常人群中的檢出率僅為0.3%～2.0%，但如果不檢測或漏檢將危及患者生命，尤其是有輸血史和妊娠史的患者[3]。交叉配血試驗(yàn)是在輸血前用于檢查受血者和獻(xiàn)血者的抗原與抗體成分是否相容的試驗(yàn)，其主要是檢查受血者血清中有無破壞供血者紅細(xì)胞的抗體，同時進(jìn)一步復(fù)查受血者與供血者的血型是否符合輸血原則，可以發(fā)現(xiàn)亞型或弱抗原、不規(guī)則抗體等。用于抗體篩選和交叉配血的方法很多，但傳統(tǒng)的試驗(yàn)都存在一定的局限性[4]。微柱凝膠法是采用微柱凝膠技術(shù)與免疫血清學(xué)相結(jié)合的方法，是近年發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法，其不僅能同時檢測出IgM和IgG 抗體，還能檢測到弱抗原抗體反應(yīng)，避免不規(guī)則抗體引起的輸血反應(yīng)，確保輸血安全。

目前普遍應(yīng)用的凝聚胺法，是中和紅細(xì)胞表面電荷使不規(guī)則抗體結(jié)合，然后通過高速離心使紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集，凝集在一定時間內(nèi)解聚，特異性凝集則不能被解聚，從而達(dá)到檢出不規(guī)則抗體的目的，其快速、簡單，能檢出IgM 和IgG 抗體，具有一定的靈敏度，目前已作為不規(guī)則抗體篩查和交叉配血的常規(guī)試驗(yàn)。但凝聚胺法在臨床應(yīng)用中也存在一定的局限性，如對操作者的技術(shù)要求比較高，易受人為因素的影響，結(jié)果的觀察是從凝集到無凝集的過程，振搖的力度和振搖的時間都需嚴(yán)格掌握，難以標(biāo)準(zhǔn)化，弱凝集的標(biāo)本由于振搖和放置時間稍長凝集也會消失[5]。對有些低濃度抗體易漏檢，靈敏度較低，如抗-JKb[6]。此外，凝聚胺和Kell 系統(tǒng)抗原都帶正電荷，故不能檢出抗-K 抗體[7]。微柱凝膠法是基于游離紅細(xì)胞和聚集紅細(xì)胞是否通過具有分子篩作用的凝膠顆粒構(gòu)成的膠體介質(zhì)，從而使不同狀態(tài)的紅細(xì)胞得以分離，是一種在微柱管中用凝膠介質(zhì)進(jìn)行的改良血凝反應(yīng)。當(dāng)抗原與抗體反應(yīng)時，紅細(xì)胞發(fā)生凝集，離心時紅細(xì)胞不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層或中間，呈陽性反應(yīng)，其靈敏度高，結(jié)果清晰易判讀，不需要顯微鏡觀察，不受人為因素的影響，易于標(biāo)準(zhǔn)化[2]，結(jié)果可長期保存。

本研究顯示，在對6 630 例患者標(biāo)本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查中，用微柱凝膠法檢出35 例，檢出率為0.53%；凝聚胺法檢出26 例，不規(guī)則抗體的檢出率為0.39%。本研究中有9 例患者的不規(guī)則抗體濃度比較低，沒有被凝聚胺法檢出而造成漏檢，雖然不規(guī)則抗體檢出率在2 種方法間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但漏檢會給臨床輸血造成嚴(yán)重的后果，所以也要引高度重視。交叉配血作為臨床輸血前最后一項實(shí)驗(yàn)室檢測，對輸血安全至關(guān)重要。本研究顯示，微柱凝膠法交叉配血不合的檢出率明顯高于凝聚胺法。6 630 例患者采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，檢出配血不合48 例，不合率為0.72%；采用凝聚胺法交叉配血試驗(yàn)，配血不合有30 例，不合率為0.45%。2 種方法間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.18，P＜0.05）。交叉配血不合的患者標(biāo)本中，經(jīng)抗體鑒定，存在不規(guī)則抗體的有35 例，從表2 可以看出，微柱凝膠法交叉配血檢出不合的48 例患者中，由不規(guī)則抗體引起者有34 例，1 例在微柱凝膠法交叉配血檢查時顯示配合的患者標(biāo)本在凝聚胺法交叉配血中出現(xiàn)顯微鏡下凝集（排除假陽性）。凝聚胺法交叉配血不合由不規(guī)則抗體引起的只有24 例，11 例存在不規(guī)則抗體的患者在凝聚胺法交叉配血中顯示配合而漏檢。這11 例標(biāo)本在微柱凝膠法中，凝集顯示弱陽性（±～+）。此外，本研究中還出現(xiàn)了1 例類B 孟買血型，這類患者血清中存在抗H 抗體，因此會出現(xiàn)與所有供血者交叉配血不合[8-9]。本研究中，真正配血不合需謹(jǐn)慎輸血的有49 例，微柱凝膠法提示配血不合48 例，其靈敏度為97.96%；凝聚胺法提示配血不合30 例，其靈敏度為61.22%，微柱凝膠法交叉配血法靈敏度明顯高于凝聚胺法（χ2=20.36，P＜0.05）。

總之，微柱凝膠技術(shù)的靈敏度高，能檢測到弱的抗原抗體反應(yīng)，其結(jié)果清晰準(zhǔn)確、易于判讀，能排除冷凝集等試驗(yàn)影響因素，易于受控，能正確指導(dǎo)臨床選擇合理的輸血治療方案，大大提高臨床輸血的安全性和有效性。但也不可忽視凝聚胺法的優(yōu)勢，由于凝聚胺法快速簡單，檢測所需時間只有微柱凝膠法的三分之一[4]，同時也能檢出IgM 和IgG抗體，具有一定的靈敏度，凝聚胺法雖然不能檢出抗K 抗體，但K 抗原在我國漢族人中的分布頻率幾乎為零[7，10]，所以影響不大。因此，此檢測方法在國內(nèi)被廣泛用于急診搶救的患者。為保證臨床輸血安全，對于常規(guī)輸血的患者應(yīng)采用微柱凝膠法進(jìn)行輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測，微柱凝膠法畢竟對一些低濃度、低頻率的抗體檢出率比凝聚胺法要高。條件允許時，可同時采用2 種方法互為驗(yàn)證，從而正確指導(dǎo)臨床選擇合理的輸血治療方案，提高臨床輸血的安全性和有效性，真正確保臨床用血的安全。

致謝：感謝上海市血液中心血型參比實(shí)驗(yàn)室協(xié)助完成血型不規(guī)則抗體鑒定。