骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤診斷中的應(yīng)用①

周明曉

(河南省鄭州市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450006)

神經(jīng)母細(xì)胞瘤是一種常見的兒童惡性實(shí)體腫瘤，在新生兒時(shí)期就可發(fā)病，在發(fā)病早期就可能會(huì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，對(duì)于患病兒童的生命安全具有嚴(yán)重威脅，近年來，臨床上其發(fā)病率表現(xiàn)為逐年增加的趨勢(shì)，分析其臨床特點(diǎn)，其轉(zhuǎn)移部位與原發(fā)灶大小沒有直接關(guān)系，常會(huì)出現(xiàn)皮膚、眼眶、骨髓、淋巴結(jié)、骨等部位的轉(zhuǎn)移，由于其發(fā)病早期存在一定的隱匿性特點(diǎn)，導(dǎo)致其早期診斷工作面臨著較大難度[1]。其中神經(jīng)母細(xì)胞瘤的骨髓轉(zhuǎn)移非常常見，這會(huì)對(duì)其預(yù)后產(chǎn)生嚴(yán)重影響，隨著臨床上強(qiáng)化其治療方法，最終取得的臨床療效也進(jìn)一步提升，很多病例在接受標(biāo)準(zhǔn)化治療之后，骨髓辨病逐漸消失，取得明顯療效，但是還有一些患者雖然在經(jīng)過治療之后骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤已經(jīng)消失，但是最終還是導(dǎo)致骨髓復(fù)發(fā)，這可能是因?yàn)樵\斷及治療過程中的檢測(cè)方法靈敏度不能滿足實(shí)際需求，這也提示，保證神經(jīng)母細(xì)胞瘤診斷方法的準(zhǔn)確性、靈敏度非常必要[2]。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是神經(jīng)母細(xì)胞瘤最為直觀、基礎(chǔ)的檢查方法，是血液病臨床診斷時(shí)不可或缺的診斷方法，但是對(duì)于很小的病灶還是會(huì)存在誤診現(xiàn)象。鑒于此，本文就主要對(duì)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值予以探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取我院2018-02～2018-07收治的神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者40例為觀察組，并選擇同期在我院開展治療的非神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者40例為對(duì)照組。其中對(duì)照組中包含男女患兒各為14例、26例，年齡0.5～12歲，平均(3.2±0.8)歲，所有患兒均為F3抗體陰性；觀察組所選40例患兒均為F3抗體陽性，男女患兒各為16例、24例，年齡0.6～11歲，平均(3.6±0.7)歲。兩組患兒一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

兩組患兒均開展骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)。骨髓細(xì)胞是通過骨髓穿刺的方法獲得，采用淋巴分層液分離細(xì)胞制作血細(xì)胞涂片，并借助于甩片機(jī)甩片。應(yīng)用常規(guī)的瑞氏染色法進(jìn)行檢測(cè)，具體方法為：(1)嚴(yán)格參照骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查質(zhì)量控制要求，選用經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員開展顯微鏡檢，開展染色過程中由陽性、陰性質(zhì)控涂片作為對(duì)照，原始細(xì)胞在油鏡下進(jìn)行觀察，所得結(jié)果要結(jié)合胞質(zhì)中的顏色與顆粒來進(jìn)行劃分；(2)糖原(PAS)染色，應(yīng)用乙醇將新鮮干燥的涂片進(jìn)行10min固定之后水洗處理，待干之后應(yīng)用過碘酸液水洗20min，待干之后應(yīng)用雪夫液染色30min，之后采用亞硫酸液進(jìn)行沖洗，再應(yīng)用水沖洗待干，復(fù)染水洗待干之后實(shí)施鏡檢[3]；(3)堿性磷酸酶(NAP)染色，采用濃度為10%的甲醛甲醇固定液處理30秒之后進(jìn)行水洗，待干之后將涂片浸入到基質(zhì)孵育液當(dāng)中，水洗待干之后實(shí)施鏡檢；(4)過氧化物酶(POX)染色，采用戊二醛-丙酮進(jìn)行固定，水沖之后加入反應(yīng)液，室溫下放置10min，水洗之后再實(shí)施染色，并在水洗干燥之后實(shí)施鏡檢；(5)單克隆抗體與神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞反應(yīng)法，借助于單克隆F3熒光標(biāo)記對(duì)羊抗屬免疫球蛋白實(shí)施免疫熒光染色處理[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

細(xì)胞化學(xué)染色的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為：(1)PAS染色，主要判定標(biāo)準(zhǔn)為油鏡下觀察200個(gè)原始細(xì)胞胞質(zhì)中的顏色與顆粒數(shù)，若顆粒表現(xiàn)為紫紅色塊狀或者是紅色粗大顆粒則為強(qiáng)陽性；若顆粒染色較深表現(xiàn)為紫紅色則為陽性；若顆粒表現(xiàn)為彌散性淺粉色則為弱陽性；若是沒有顆粒則為陰性[5]；(2)NAS染色，若是沒有顆粒則為陰性，若是稍有顆粒則為弱陽性，若是存在略粗密集的顆粒則為陽性，若是存在粗大顆粒且布滿整個(gè)胞質(zhì)當(dāng)中則為強(qiáng)陽性；(3)POX染色，若是沒有顆粒則為陰性，若是存在比較小、分布稀疏的顆粒則為弱陽性；若是存在藍(lán)黑色或者是藍(lán)色顆粒則為陽性[6]。

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)時(shí)，將200個(gè)細(xì)胞形態(tài)計(jì)數(shù)換算成為百分率，計(jì)算瘤細(xì)胞陽性所占比例，其中細(xì)胞表現(xiàn)為菊花團(tuán)樣、典型成團(tuán)細(xì)胞、砌墻樣排列、條索狀纖維絲樣物質(zhì)都是按陽性計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0處理相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料實(shí)施χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料實(shí)施t檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

比較兩組骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)陽性率：觀察組骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)陽性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；能夠在顯微鏡下看到紫紅色條索狀纖維樣物質(zhì)及瘤細(xì)胞為呈菊花團(tuán)排列。見表1。

表1 兩組骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)陽性率比較[n(%)]

3 討論

在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的篩查當(dāng)中，最為準(zhǔn)確有效的檢驗(yàn)方法就是單克隆F3抗體，其不光檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，還具有很高的特異度與靈敏度，除了單克隆F3抗體檢測(cè)之外，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)也是神經(jīng)母細(xì)胞瘤檢測(cè)中常用的檢測(cè)方法。其中骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)是一種非常重要檢查方法，神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)有別于其他瘤細(xì)胞的一個(gè)典型特點(diǎn)就是其瘤細(xì)胞表現(xiàn)為菊花式、成團(tuán)聚集排列，在為其開展細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查過程中，能夠看到瘤細(xì)胞間存在嗜酸性粉紅色纖維絲狀物，其原粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞都沒有這一特征，并且神經(jīng)母細(xì)胞瘤還存在伴隨有粒系、紅、巨三系不受抑制的特點(diǎn)，在神經(jīng)母細(xì)胞團(tuán)周圍以及散在神經(jīng)母細(xì)胞間能夠看到紫紅色粗細(xì)不等的條索樣纖維物質(zhì)，該形態(tài)特征是區(qū)分神經(jīng)母細(xì)胞瘤與急性粒細(xì)胞白血癥、急性淋巴細(xì)胞白血病的重要依據(jù)，臨床上一旦發(fā)現(xiàn)患者存在疑似神經(jīng)母細(xì)胞瘤癥狀，應(yīng)將骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查作為常規(guī)檢查項(xiàng)目[7]。在細(xì)胞化學(xué)染色檢查中，NAP染色能夠?qū)α＜?xì)胞當(dāng)中的NPA活性予以反應(yīng)，一些腫瘤患者的NAP增高可能與機(jī)體的炎癥反應(yīng)有關(guān)，該種染色方法在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的篩查當(dāng)中并不具備特異性；POX染色主要是對(duì)細(xì)胞當(dāng)中的過氧化物酶活性予以反應(yīng)，這主要是血細(xì)胞當(dāng)中所包含的過氧化物酶，作為粒細(xì)胞當(dāng)中含量最多的一種蛋白質(zhì)本文中兩組檢測(cè)結(jié)果均為陰性，這也可以看出所有瘤細(xì)胞當(dāng)中都沒有包含此酶，那么在實(shí)際應(yīng)用中，就需要保證檢驗(yàn)人員具備豐富的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果予以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)；PAS主要是對(duì)細(xì)胞當(dāng)中的黏蛋白、黏多糖、糖原含量予以準(zhǔn)確反映，結(jié)合胞質(zhì)當(dāng)中糖原含量及種類的不同，表現(xiàn)為粗細(xì)不等的塊狀物質(zhì)、紅色顆?；蛘呤潜憩F(xiàn)為均勻紅色，本文中觀察組中出現(xiàn)1例弱陽性，可能是因?yàn)樗幬?、發(fā)熱或者是機(jī)體感染的影響?？偟膩碚f，本文中所提及幾種化學(xué)染色方法，其靈敏度及特異性最高的為POX，最低的為NAP，臨床上可以將化學(xué)染色作為骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)的輔助診斷方法，以便于進(jìn)一步提升診斷準(zhǔn)確率[8]。

綜上所述，本文研究結(jié)果顯示觀察組骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)陽性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；能夠在顯微鏡下看到紫紅色條索狀纖維樣物質(zhì)及瘤細(xì)胞為呈菊花團(tuán)排列。由此可見，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)應(yīng)用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤的診斷當(dāng)中，具有較高的診斷準(zhǔn)確率，其中一個(gè)非常重要的鑒別方法就是在形態(tài)學(xué)中看到紫紅色條索狀纖維樣物質(zhì)及瘤細(xì)胞為呈菊花團(tuán)排列。