水產(chǎn)中孔雀石綠殘留量快速檢測(cè)新技術(shù)

目前檢測(cè)孔雀石綠方法有實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)方法及現(xiàn)場(chǎng)快速篩查方法。實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法主要是高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜法，能夠提供較高的靈敏度和回收率，但是色譜法需要昂貴的儀器，費(fèi)時(shí)且檢測(cè)成本高，不適用于大量樣品的篩選，也難在基層檢測(cè)單位以及食品企業(yè)推廣使用，同時(shí)檢測(cè)時(shí)間仍很難滿足企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量安全控制的實(shí)際需求?，F(xiàn)場(chǎng)快速篩查方法快速、經(jīng)濟(jì)但只是起到對(duì)待檢樣品的初步快速篩查，實(shí)驗(yàn)結(jié)果受人為因素影響較大，不能準(zhǔn)確定性、定量和及時(shí)記錄傳輸結(jié)果。

現(xiàn)本方法采用北京六角體科技發(fā)展有公司限研制的便攜干式分析儀，結(jié)合六角體科技研制的孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒-柱凈化點(diǎn)滴板比色法，利用便攜干式分析儀記錄色斑達(dá)到現(xiàn)場(chǎng)定性定量快速準(zhǔn)確檢測(cè)孔雀石綠的目的。水產(chǎn)品中孔雀石綠快速提取樣液經(jīng)過(guò)柱色譜分離凈化及隱色孔雀在線快速衍生轉(zhuǎn)化成有色孔雀石綠，分離衍生樣液并濃縮于聚四氟乙烯點(diǎn)滴板上，采用便攜干式分析儀快速定量檢測(cè)，設(shè)計(jì)了5個(gè)添加水平（1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/kg）6次重復(fù)試驗(yàn)。結(jié)果表明，方法線性范圍為0～20.0μg/ kg；檢測(cè)限均為1.0μg/kg，回收率在70%～85%之間，RSD在3.6%～12.5%之間，在30分鐘內(nèi)完成整個(gè)檢測(cè)過(guò)程。本方法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員素質(zhì)要求不高、可準(zhǔn)確定量檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠含量，并可現(xiàn)場(chǎng)記錄傳輸結(jié)果，可以滿足基層檢測(cè)及執(zhí)法單位的需求。

實(shí)驗(yàn)部分

1.儀器、設(shè)備和試劑

便攜干式分析儀（北京六角體科技發(fā)展有限公司）；

孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒（北京六角體科技發(fā)展有限公司）。

2.實(shí)驗(yàn)方法

（1）檢測(cè)范圍

魚、蝦等水產(chǎn)品肌肉組織。（2）技術(shù)指標(biāo)

檢測(cè)下限：1.0μg/kg。（3）樣品前處理

樣品前處理操作如圖1所示。

結(jié)果與討論

1.干式分析儀快速測(cè)定條件的選擇

在進(jìn)行試驗(yàn)測(cè)試之前，應(yīng)先對(duì)儀器工作條件進(jìn)行選擇設(shè)置工作。首先打開軟件界面，然后對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目設(shè)置及企業(yè)基本信息設(shè)置進(jìn)行填寫，之后對(duì)卡類型進(jìn)行選擇，最后將檢測(cè)卡放入卡槽，點(diǎn)擊開始測(cè)試按鈕進(jìn)行結(jié)果的測(cè)定。其流程如圖2。

（1）檢測(cè)項(xiàng)目設(shè)置

檢測(cè)項(xiàng)目選擇孔雀石綠，食品種類選擇魚肉（蝦肉）。

抽樣時(shí)間的設(shè)置根據(jù)具體抽取樣品的時(shí)間設(shè)置。

稀釋倍數(shù)根據(jù)實(shí)際稀釋情況填寫，如果在試驗(yàn)操作中沒(méi)有對(duì)樣品進(jìn)行稀釋則填寫1，如試驗(yàn)操作過(guò)程中將樣液進(jìn)行了稀釋，則填寫相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，得到的測(cè)試結(jié)果要乘以稀釋倍數(shù)才是最終的試驗(yàn)結(jié)果。

樣品名稱及檢測(cè)單位根據(jù)實(shí)際情況填寫。

（2）企業(yè)基本信息設(shè)置

企業(yè)基本信息設(shè)置里包括生產(chǎn)企業(yè)，被抽檢企業(yè)，食品名稱，產(chǎn)品商標(biāo)，生產(chǎn)批次及產(chǎn)品規(guī)格，對(duì)這些內(nèi)容根據(jù)實(shí)際的樣品信息進(jìn)行填寫。此部分用于對(duì)樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行報(bào)告分析，不會(huì)對(duì)測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生直接影響。

（3）卡類型選擇

卡類型選擇滲濾化學(xué)顯色卡。

2.技術(shù)驗(yàn)證數(shù)據(jù)

（1）方法的線性

對(duì)空白魚肉組織樣品分別添加0、1、2、5、10、20μg/kg孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)前處理過(guò)程得到待測(cè)物質(zhì)，上干式分析儀測(cè)相應(yīng)的灰度值，以濃度為橫坐標(biāo)，灰度值為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3、4、5、6所示。（X為待測(cè)物濃度，Y為灰度值）；線性范圍為0～20μg/kg。標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為Y= -3.9747X+599.67（r=0.9912）；Y= -4.3260X+598.73（r=0.9929）；Y= -4.1417X+595.90（r=0.9814）；Y= -4.1118X+607.87（r=0.9908）；X為待測(cè)物濃度，Y為灰度值；線性范圍為0～20μg/kg。

（2）方法的檢出限、添加回收率及精密度

魚肉及蝦肉組織添加回收樣品，干式分析儀測(cè)定，回收率和精密度結(jié)果如表1。本方法在1、2、5、10、20μg/kg5個(gè)添加水平，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定6次，方法的回收率均在70%～85%之間。從表1中，1μg/kg添加水平符合分析質(zhì)量要求的試驗(yàn)結(jié)果，確定該方法孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的檢出限均為1μg/kg。

（3）方法與國(guó)標(biāo)法實(shí)際樣品檢測(cè)對(duì)照結(jié)果

實(shí)際魚樣經(jīng)國(guó)標(biāo)法GB/T 20361—2006測(cè)定結(jié)果，陽(yáng)性樣品孔雀石綠為5.0μg/kg、隱色孔雀石綠為2.0μg/kg 、結(jié)晶紫為1.0μg/kg、隱色結(jié)晶紫為5.0μg/kg。采用干式分析儀分析魚樣結(jié)果（每個(gè)樣品平行測(cè)定3次），結(jié)果如表2。從表2中可看出，干式分析的方法結(jié)果與國(guó)標(biāo)法檢出的結(jié)果偏差不大，可滿足基層檢測(cè)及執(zhí)法單位的需求。