結(jié)直腸腺癌中MCM7與p27表達(dá)相關(guān)性的臨床研究

張明明等

【摘要】 目的 檢測結(jié)直腸腺癌組織細(xì)胞中MCM7、p27蛋白的表達(dá)的差異性與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性，以探討其對腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的調(diào)控意義。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測50例結(jié)直腸腺癌組織中MCM7、p27蛋白的表達(dá)，并對比其與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性。結(jié)果 MCM7和p27蛋白在結(jié)直腸腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其臨床表現(xiàn)中分別存在不同的調(diào)控方向，MCM7的高表達(dá)與P27的低表達(dá)與腫瘤的分期及其愈合有直接的相關(guān)性。在P27蛋白表達(dá)陰性的實(shí)驗(yàn)病例而MCM7陽性者共11例。P27蛋白表達(dá)陽性而MCM7表達(dá)陰性的實(shí)驗(yàn)病例共29例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，在結(jié)直腸腺癌中MCM7蛋白的陽性表達(dá)p27的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.4911P<0.01），分化程度越高，MCM7與P27的表達(dá)負(fù)相關(guān)性越大（P<0.05）。結(jié)論 結(jié)腸腺癌細(xì)胞的不同分級往往決定其不同的生物學(xué)特性，并對其預(yù)后起關(guān)鍵作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞復(fù)制準(zhǔn)許因子MCM7蛋白、細(xì)胞周期檢測點(diǎn)負(fù)調(diào)控因子P27蛋白的低表達(dá)可能與其癌細(xì)胞的分化、侵襲性相關(guān)，其中MCM7與P27的負(fù)相關(guān)性的越大，則其預(yù)后越差，其聯(lián)合檢測并行對比可能會為我們提供一種新的判斷病人預(yù)后的參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)直腸腺癌；MCM7；P27；相關(guān)性；免疫組織

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.050 文章編號：1004-7484（2013）-09-4831-02

在結(jié)直腸腺癌中，癌細(xì)胞的失控性增殖是其發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散的基本特征表現(xiàn)，其往往和細(xì)胞周期中的調(diào)控失控有關(guān)。近些年，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)微小染色體維持蛋白[minichromosome maintenance（MCM）proteins]基因其編碼的MCM蛋白家族在DNA起始復(fù)制過程中起著密切相關(guān)的作用，其表達(dá)的蛋白質(zhì)家族共同構(gòu)成DNA的復(fù)制許可因子，啟動DNA的復(fù)制。它主要是通過DNA復(fù)制完成從染色體的脫離，以確保在每個周期中染色體僅復(fù)制一次，保證細(xì)胞復(fù)制的精確性及其準(zhǔn)確性[1]。P27作為細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)控因子，其表達(dá)失?？蓪?dǎo)致細(xì)胞增殖異常。因而對于不同分級的結(jié)直腸腺癌我們采用免疫組化技術(shù)檢測其中MCM7、P27蛋白的表達(dá)情況，對比起表達(dá)的相關(guān)性及臨床意義，以探討其相關(guān)性與不同分級結(jié)直腸腺癌生物特性、預(yù)后的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 病例來源 隨機(jī)選取40例柳州市人民醫(yī)院胃腸外科2000年1月——2012年12月手術(shù)切除的結(jié)直腸腺癌病例材料，結(jié)直腸腺癌的病理診斷、分級和TNM分型按2010年NCCN結(jié)直腸腺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。其中：高分化腺癌7例，中分化腺癌20例，低分化腺癌13例。年齡范圍：36-79歲。按NCCN2010結(jié)腸癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期14病例；Ⅱ期10例，Ⅲ期13例，Ⅳ3例。標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，常規(guī)切片。

1.2 方法 ①免疫組織化學(xué)檢測：SP法，單克隆抗體MCM7（47DC141）和p27（DCS-72.F6）分別購自NeoMarkers公司和福州邁新生物技術(shù)公司，SP試劑盒（Kit-9710）購自福州邁新生物公司。免疫組化染色操作步驟按文獻(xiàn)進(jìn)行[2]。②結(jié)果判斷：MCM7和p27蛋白的表達(dá)主要存在于細(xì)胞核，我們通過檢測細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)志，MCM7、p27染色的判斷參照Bukhlm等[3]提出的標(biāo)準(zhǔn)。對于結(jié)果的判斷通過計(jì)數(shù)500個以上的腫瘤細(xì)胞，分為三個等級，陽性細(xì)胞數(shù)（細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒）<10%為（-），10-30%為（+），30-70%為（++），>70%為（+++）。陽性對照以已知人乳腺癌MCM7和p27陽性切片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對所得數(shù)據(jù)行x2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)和Spearman等級相關(guān)分析，以P<0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸腺癌不同病理分級中MCM7、P27的表達(dá)關(guān)系 結(jié)直腸腺癌不同病理分級組中MCM7與P27表達(dá)的相互關(guān)系見表1，在P27蛋白表達(dá)陰性的實(shí)驗(yàn)病例而MCM7陽性者共11例。P27蛋白表達(dá)陽性而MCM7表達(dá)陰性的實(shí)驗(yàn)病例共29例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，在結(jié)直腸腺癌中MCM7蛋白的陽性表達(dá)p27的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.4911P<0.01）。

MCM7、P27的表達(dá)與結(jié)腸腺癌病理特征的關(guān)系見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)直腸腺癌組中MCM7、P27蛋白表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性（r=-0.4911P<0.01），并且其負(fù)相關(guān)性的大小與組織學(xué)分級明顯相關(guān)，高分化組顯著低于中分化組和低分化組（P<0.05，P<0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05）；與患者年齡、性別、腫瘤大小不明顯相關(guān)性（P>0.05），見表2。

3 討論

近來的科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在正常的細(xì)胞增殖周期中，細(xì)胞核DNA的復(fù)制往往起源于特定的起點(diǎn)，其在一個細(xì)胞周期中起著十分重要的作用，其通過合成相應(yīng)的表達(dá)因子，調(diào)控不同的細(xì)胞增殖方向。其中MCM蛋白家族與此復(fù)制起始點(diǎn)有規(guī)律的結(jié)合與釋放從而調(diào)控DNA的不同復(fù)制。激活的MCM4/6/7結(jié)合cdc45后具有DNA解鏈酶活性，并可促進(jìn)DNA聚合酶（polα）、PRA（replication protein A）、Dpbll 蛋白與復(fù)制起點(diǎn)結(jié)合，啟動DNA的復(fù)制[3]，復(fù)制起始后MCM蛋白有選擇性的破環(huán)，嚴(yán)格限制并確?；蚪M在每一個細(xì)胞周期僅復(fù)制一次[4]，可見，MCM蛋白家族的表達(dá)在細(xì)胞增殖的過程中起著非常重要作用，但腫瘤細(xì)胞的表達(dá)中，我們通過實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，MCM蛋白存在明顯的異常表達(dá)，而MCM蛋白的異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞的復(fù)制起始位點(diǎn)重復(fù)復(fù)制。而p27蛋白的表達(dá)下降往往，則可使DNA損傷的異常變異細(xì)胞無法完成正常的細(xì)胞增殖周期，如果同時存在MCM7蛋白高表達(dá)、p27蛋白的低表達(dá)的狀態(tài)下，異常細(xì)胞可在S、G2、M期等處直接啟動重復(fù)復(fù)制，同時避開細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)等正常的細(xì)胞調(diào)控，從而產(chǎn)生多倍體的形成，進(jìn)一步形成惡性腫瘤細(xì)胞。本組研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)了以上表述，我們知道分級越高的腫瘤細(xì)胞往往侵襲性、復(fù)制能力往往較差，而分化較差、細(xì)胞分級較低的腫瘤細(xì)胞往往復(fù)發(fā)率、侵襲性往往較差，而MCM7、P27的表達(dá)情況與此完全相符。并且MCM7與p27的表達(dá)呈顯著性負(fù)相關(guān)，我們推斷MCM7和p27蛋白在腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展過程中分別調(diào)控不同的腫瘤的不同分化方向，對其聯(lián)合檢測可能會為我們提供一種新的獨(dú)立于病理分期的評價(jià)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的新的客觀生物學(xué)指標(biāo)。

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