闊葉木樹皮浸提物的高效液相色譜法分析

許英健 史曉凡

（中國刑警學(xué)院 遼寧 沈陽 110035）

闊葉木樹皮浸提物的高效液相色譜法分析

許英健 史曉凡

（中國刑警學(xué)院 遼寧 沈陽 110035）

木屑是各種刑事案件、交通肇事案件現(xiàn)場中常見的微量物證之一，對木屑檢材與比對樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，可以為偵破案件提供科學(xué)的依據(jù)。研究以甲醇為提取劑，對闊葉木樹皮進(jìn)行了有效的提取，對浸提物進(jìn)行了高效液相色譜分析，根據(jù)樹皮浸提物的外觀顏色、高效液相色譜特征的差異對不同樹種闊葉木樹皮進(jìn)行了有效的鑒別。

闊葉木 樹皮 浸提物 高效液相色譜法

木材是用途極為廣泛的一種物資，不僅在各種建設(shè)上占有重要的地位，而且在人們的日常工作、生活中也是不可缺少的。因此在縱火、盜竊、兇殺、強(qiáng)奸、破壞森林、毀壞果樹等各種刑事案件及交通肇事案件現(xiàn)場上，往往會有微量的木屑?xì)堅z留在犯罪嫌疑人和被害人的遺留物及作案工具上。此時木屑?xì)堅N類的鑒別及木屑檢材與比對樣品異同的鑒定結(jié)論可以為快速、準(zhǔn)確地推斷案件的第一現(xiàn)場、尸源、犯罪嫌疑人的職業(yè)特征等提供依據(jù)，從而為縮小偵察范圍、偵破案件提供有價值的線索。

木材一般分為針葉木材和闊葉木材。闊葉木樹葉寬大呈片狀，大多數(shù)為落葉樹，樹干通直部分較短，密度較大，材質(zhì)較堅硬，國外多稱為硬材(hardwood)，種類較多。近年來，國內(nèi)外法庭科學(xué)工作者在木屑種類鑒別方面進(jìn)行了一些研究，建立了一些分析方法，主要有顯微鏡法、氣相色譜法、氣－質(zhì)聯(lián)用法、傅立葉變換紅外光譜法、高效液相色譜法等。

本文以甲醇為提取劑，對闊葉木樹皮進(jìn)行了有效的提取，浸提物進(jìn)行了高效液相色譜分析，依據(jù)浸提液外觀顏色的異同可對不同樹種樹皮樣品進(jìn)行初步的檢驗，進(jìn)一步依據(jù)色譜圖中特征峰的數(shù)目、保留時間、峰形的差異能夠?qū)Σ煌瑯浞N闊葉木樹皮的種類進(jìn)行鑒別。

1 實驗部分

1.1 樣品

不同樹種的樹皮樣品共67種，詳見表1。

1.2 試劑

甲醇（色譜純），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)）。所有溶液在使用前均經(jīng)過0.45μm濾膜過濾脫氣。

1.3 儀器及條件

日立L-7100液相色譜儀，L-7420 UV-VIS檢測器，L-7300柱溫箱，D-7000型HPLC管理系統(tǒng)；AS5150A超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

色譜柱：ZORBAX SB-C18色譜柱5μm4.6× 150mm；檢測波長：280nm，柱溫：35℃，流動相A：甲醇，流動相B：水，梯度洗脫條件：0～8min，80B；8.1～35min，30%B；35.1～45min，80%B；進(jìn)樣體積：10μl。

1.4 實驗方法

1.4.1 樹皮浸提成分的高效液相色譜分析

用手術(shù)刀分別削取上述67種不同樹種的樹皮樣品少許，放入試管中，加入約0.5ml甲醇，超聲波提取10min，提取液進(jìn)行高效液相色譜分析。

1.4.2 樹皮浸提成分高效液相色譜分析重現(xiàn)性實驗按1.4.1所述方法分別對18號樣品（遼寧沈陽桃樹樹皮）及62號樣品（湖北房縣漆樹樹皮）平行進(jìn)行三次測定。

表1 67種樹皮樣品一覽表

2 結(jié)果和討論

2.1 樹皮浸提成分高效液相色譜分析的理論依據(jù)

樹皮浸提成分比木材浸提成分的含量多，種類復(fù)雜。主要有蠟和脂類、萜類和樹脂酸、植物甾醇和毛地黃苷類、色素、黃烷醇類及其聚合物、鞣質(zhì)、木質(zhì)酚類及酚苷類、蛋白質(zhì)和生物堿等。不同樹種樹皮中浸提成分不同，而且同樹種不同產(chǎn)地的樹皮，因生長環(huán)境的不同其浸提成分的種類也可能不同。如扭葉松樹皮中含有雙氫槲皮素、雙氫楊梅皮素、香橙素、短葉松素，而黃松樹皮中則含有槲皮素，松槲皮素、β-甲基槲皮素、松楊梅皮素和雙氫槲皮素。不同樹種樹皮、不同產(chǎn)地同樹種樹皮浸提成分組成上的差異可以通過高效液相色譜特征反映出來，這就是利用高效液相色譜法鑒別樹皮種類的依據(jù)。

2.2 不同樹種闊葉木樹皮浸提物的外觀分析

由于不同樹種樹皮所含浸提物的組成成分不同，特別是其所含色素成分不同，導(dǎo)致其浸提液的外觀顏色不同。據(jù)此可對其進(jìn)行大類的分析，67種樹皮浸提物的顏色分類見表2。

表2 67種樹皮浸提物的顏色分類

2.3 不同樹種樹皮浸提成分的高效液相色譜分析

67種不同樹種樹皮浸提成分的液相色譜譜圖特征是色譜峰集中分布在二個區(qū)域，A區(qū)域為0.00～10.0min，B區(qū)域為10.0～40.0min。根據(jù)67種不同樹種樹皮浸提成分在這二個區(qū)域中色譜峰峰數(shù)、峰形的不同可將其分為五大類，分類情況見表3，色譜圖見圖1。

表3 67種樹皮浸提成分的HPLC數(shù)據(jù)分析

圖1 五類樹皮浸提物的HPLC圖

以第Ⅰ類中的11種樣品為例，根據(jù)11種樹皮樣品浸提成分高效液相色譜圖A區(qū)中色譜峰數(shù)的不同可進(jìn)一步將其分為四類，第Ⅰ-1類和第Ⅰ-4類各只有1種樣品，其浸提成分的液相色譜特征差異明顯，可一一區(qū)別。第Ⅰ-2類、Ⅰ-3類分別有6種、4種樣品，雖然同類樣品之間A區(qū)中色譜峰數(shù)相同，但B區(qū)中色譜峰數(shù)、峰的保留時間及峰形均有差異，可以一一鑒別，具體分類見表4，第Ⅰ類中三種樹皮浸提成分的HPLC圖見圖2。同理，其它四類樣品也可按照A區(qū)中色譜峰數(shù)、B區(qū)中色譜峰數(shù)的差異進(jìn)一步鑒別。

表4 第Ⅰ類11種樹皮浸提成分的HPLC數(shù)據(jù)分析

圖2 第Ⅰ類三種樹皮浸提成分的HPLC圖

2.4 重現(xiàn)性和精密度的考察

樹皮浸提成分三次平行測定所得到的高效液相色譜圖中色譜峰的峰數(shù)、保留時間、峰形相同，峰高比相近。實驗結(jié)果表明，本文建立的樹皮浸提物高效液相色譜分析法，具有較好的重現(xiàn)性，實驗數(shù)據(jù)見表5。

表5 重現(xiàn)性精密度實驗

3 結(jié)論

在確定的高效液相色譜分析條件下，樹皮浸提成分的各組分得到了有效的分離。不同樹種、同樹種不同產(chǎn)地樹皮樣品浸提成分的高效液相色譜圖具有一定的特異性，依據(jù)色譜峰的峰數(shù)、保留時間、峰形等的不同可以對67種樹皮進(jìn)行類別的鑒定。

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注：本文系公安部應(yīng)用創(chuàng)新項目“犯罪現(xiàn)場常見木屑綜合檢測方法的研究”的階段性成果，項目編號：2005YYCXXJXY041。