黃芪注射液聯(lián)合阿苯達(dá)唑?qū)θA支睪吸蟲病患者Th1/Th2細(xì)胞因子的影響研究

袁金富，袁 杰，羅 元，廖云姣

華支睪吸蟲是華支睪吸蟲病的病原體，其成蟲寄居在人體肝臟肝膽管內(nèi)，通過(guò)機(jī)械活動(dòng)、代謝產(chǎn)物造成肝組織的損傷[1]，同時(shí)人體的細(xì)胞免疫和體液免疫均發(fā)生一系列的變化。研究顯示，Th1/Th2細(xì)胞因子的變化在華支睪吸蟲病的發(fā)病及免疫病理?yè)p傷過(guò)程中起到了重要作用[2]。通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子的水平可對(duì)華支睪吸蟲病起到治療作用。本研究觀察華支睪吸蟲病患者體內(nèi)Th1/Th2細(xì)胞因子的變化及黃芪注射液聯(lián)合阿苯達(dá)唑?qū)h1/Th2細(xì)胞因子的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年6月—2011年12月通過(guò)華支睪吸蟲糞檢顯示蟲卵陽(yáng)性且未經(jīng)過(guò)任何治療、除外其他肝病的華支睪吸蟲病患者46例為病例組，其中男27例，女19例；年齡23～56歲，平均(36.7±13.2)歲。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組，每組23例。對(duì)照組男13例，女10例，平均年齡(36.3±14.9)歲；觀察組男14例，女9例，平均年齡(37.1±15.3)歲。同時(shí)選擇同期華支睪吸蟲糞檢蟲卵陰性且除外其他寄生蟲感染或其他各種肝病的體檢健康者23例為正常組，其中男16例，女7例；年齡24～53歲，平均(38.2±14.3)歲。3組受檢者的性別構(gòu)成、年齡具有均衡性。

1.2 治療方法 對(duì)照組予阿苯達(dá)唑治療，400 mg/次，口服，3次/d，連服3 d。觀察組在口服阿苯達(dá)唑的基礎(chǔ)上予5%葡萄糖注射液+40 mg黃芪注射液，靜脈滴注，1次/d，連用14 d。兩組患者均于治療前及治療后4周時(shí)采集清晨空腹靜脈血，分離血清待測(cè)。正常組于研究開始時(shí)采集空腹靜脈血，分離血清，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 肝功能指標(biāo) 采用全自動(dòng)生化分析儀(Olympus-AU2700，日本)檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和總膽紅素(TBIL)水平。

1.3.2 血清白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、干擾素γ(IFN-γ) 采用雙抗體夾心法檢測(cè)血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平。試劑盒由上海藍(lán)基生物有限公司提供，測(cè)定儀器為Bio-Red公司生產(chǎn)的2550-EIA型酶聯(lián)儀。

1.3.3 糞檢蟲卵轉(zhuǎn)陰率 分別于治療前和治療后4周收集患者糞便，用改良加藤厚膜涂片法對(duì)蟲卵進(jìn)行計(jì)數(shù)，根據(jù)蟲卵數(shù)量進(jìn)行感染分度，比較兩組轉(zhuǎn)陰率。根據(jù)每克糞便中蟲卵數(shù)(EPG)分為：EPG≤1 000個(gè)為輕度感染，1 000個(gè)

1.3.4 不良反應(yīng) 觀察患者在用藥過(guò)程中的不良反應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 各組治療前后ALT和TBIL水平比較 治療前3組ALT和TBIL水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中對(duì)照組和觀察組ALT和TBIL水平較正常組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組與觀察組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后觀察組ALT和TBIL水平較對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

Table1 Comparison of levels of ALT and TBIL in each group before and after treatment

組別例數(shù)ALT(U/L)治療前 治療后TBIL(μmol/L)治療前 治療后正常組2346±5 - 7.52±2.11 -對(duì)照組2389±13*64±1042.28±8.24*26.51±6.29觀察組2387±11*51±1043.41±7.34*16.17±7.32F(t)值135.95△31.17214.22△53.10P值0.0000.0000.0000.000

注：ALT=丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，TBIL=總膽紅素；與正常組比較，*P<0.05；-無(wú)此項(xiàng)；△為F值

2.2 各組治療前后血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較 治療前3組IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中對(duì)照組和觀察組IL-2、IFN-γ水平較正常組降低，IL-4水平較正常組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組與觀察組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后觀察組IL-2、IFN-γ水平較對(duì)照組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組IL-4水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。

Table2 Comparison of levels of IL-2,IL-4 and IFN-γ in each group before and after treatment

組別例數(shù)IL-2治療前 治療后IL-4治療前 治療后IFN-γ治療前 治療后正常組2395±11 -83±9 -38±9 -對(duì)照組2349±17*69±12107±14*89±1122±8*29±7觀察組2346±15*81±14108±12*86±1121±8*36±8F(t)值75.34△18.1431.83△0.1938.64△31.14P值0.0000.0000.0000.6610.0000.000

注：IL-2=白介素2，IL-4=白介素4，IFN-γ=干擾素γ；與正常組比較，*P<0.05；-無(wú)此項(xiàng)；△為F值

2.3 糞檢蟲卵轉(zhuǎn)陰率 對(duì)照組治療前輕度感染21例，中度感染2例；觀察組治療前輕度感染20例，中度感染3例，兩組均無(wú)重度感染病例。治療后，對(duì)照組中僅2例中度感染者未轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率為91.3%(21/23)；觀察組23例患者全部轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率為100.0%。兩組糞檢轉(zhuǎn)陰率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.091，P>0.05)。

2.4 不良反應(yīng) 治療過(guò)程中對(duì)照組2例患者出現(xiàn)腹痛、惡心等癥狀；觀察組2例患者出現(xiàn)腹痛、惡心，1例患者出現(xiàn)頭暈癥狀，均未做特殊處理，患者可耐受。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率(8.7%與13.0%)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.224，P>0.05)。

3 討論

華支睪吸蟲病患者的肝功能存在不同程度的異常，主要表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶及膽紅素等指標(biāo)的升高[3]，其原因與華支睪吸蟲寄生導(dǎo)致宿主膽管的異常擴(kuò)張，管壁增厚，甚至造成膽管阻塞，膽汁滯留以及合并感染等有關(guān)[4]，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)纖維組織大量增生，肝實(shí)質(zhì)發(fā)生萎縮[5]。而除上述因素外，已有研究表明人體的免疫系統(tǒng)失衡與肝損傷有密切關(guān)系。人體在寄生蟲感染后其機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)生改變，而人體的細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)在寄生蟲感染損傷中起到了重要作用[6]。IL-2、IL-4、IFN-γ是Th1和 Th2 細(xì)胞在抗原或絲裂原刺激下分泌產(chǎn)生的重要細(xì)胞因子，其表達(dá)水平的不同與機(jī)體生理或病理過(guò)程密切相關(guān)[7]。其中，IL-2是人體細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中重要因子之一，可誘導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞增殖分化，并能增強(qiáng)自然殺傷(NK)細(xì)胞殺傷活性，它的正常或異常表達(dá)與機(jī)體生理或病理過(guò)程密切相關(guān)[8]。IL-4是 Th2 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，可單獨(dú)維持Th2細(xì)胞及 B 細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化[9]，而Th2細(xì)胞有重要的抗炎作用，且可通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制抑制Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)而發(fā)揮抗炎作用[10]。IFN-γ由Th1細(xì)胞產(chǎn)生，亦具有多種生物活性，是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分，是維持機(jī)體和細(xì)胞功能自我穩(wěn)定的防御性物質(zhì)，其在體內(nèi)有復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)作用，可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞依賴性免疫反應(yīng)，增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而發(fā)揮潛在的致炎癥作用[11]。

據(jù)此，對(duì)于華支睪吸蟲病患者的治療，除常規(guī)的驅(qū)蟲藥物應(yīng)用外，還需要通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)，抑制機(jī)體的免疫損傷，減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)。阿苯達(dá)唑作為一種高效廣譜驅(qū)蟲新藥，通過(guò)抑制寄生蟲腸壁細(xì)胞胞質(zhì)微管系統(tǒng)聚合和延胡索酸還原酶系統(tǒng)，阻斷蟲體對(duì)多種營(yíng)養(yǎng)和葡萄糖的吸收，阻礙三磷酸腺苷的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致蟲體糖原耗竭，抑制寄生蟲的生存和繁殖[12]。

中醫(yī)認(rèn)為黃芪具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托瘡排膿、消腫生肌的功能；現(xiàn)代藥理研究表明，黃芪含黃芪苷類、多糖類、黃酮類、氨基酸、微量元素、膽堿、葉酸等多種化學(xué)成分，具有多種藥理作用[13]。黃芪注射液的主要成分是黃芪甲苷，其具有舒張血管、強(qiáng)心利尿、增強(qiáng)組織抗缺氧能力、防止脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制內(nèi)皮素釋放、抑制中性粒細(xì)胞的聚集和活化、減輕肝臟缺血再灌注損傷、增強(qiáng)肝臟耐受藥物毒性等多方面作用。同時(shí)，還可調(diào)整和改善機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫水平，使機(jī)體的免疫失衡恢復(fù)正常水平[14-16]。

本研究結(jié)果顯示，華支睪吸蟲病患者的ALT及TBIL水平均較正常組升高，說(shuō)明存在不同程度的肝損害。治療后，對(duì)照組和觀察組的糞檢轉(zhuǎn)陰率及不良反應(yīng)發(fā)生率均無(wú)差異，單用阿苯達(dá)唑的對(duì)照組患者ALT及TBIL降低程度不及聯(lián)合使用黃芪注射液的患者。而進(jìn)一步觀察血清細(xì)胞因子水平發(fā)現(xiàn)，華支睪吸蟲病患者的IL-2、IFN-γ水平較正常組下降，而IL-4水平升高，說(shuō)明機(jī)體的細(xì)胞免疫功能存在異常，而細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ可能參與了華支睪吸蟲感染引起的肝損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。經(jīng)治療后，IL-2、IFN-γ水平回升，IL-4水平回落，說(shuō)明治療后機(jī)體的免疫功能趨于正常，同時(shí)，觀察組IL-2、IFN-γ改善程度較對(duì)照組明顯。說(shuō)明，在使用阿苯達(dá)唑基礎(chǔ)上聯(lián)合使用黃芪注射液可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能，減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)，從而抑制肝實(shí)質(zhì)纖維化，減輕肝組織損傷，起到保護(hù)肝細(xì)胞的作用，然而其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

1 方悅怡.華支睪吸蟲病防治[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué),2007,33(2):70-72.

2 李妍.華支睪吸蟲感染小鼠模型的建立及其免疫機(jī)制的初步研究[D].徐州醫(yī)學(xué)院,2008.

3 崔巍巍.華支睪吸蟲病血清酶學(xué)肝臟病理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,6(4):15-17.

4 黃文柱.重癥華支睪吸蟲病的臨床特點(diǎn)[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2007,2(14):28-30.

5 楊紹基.寄生蟲性肝硬化的診斷和治療進(jìn)展[J].新醫(yī)學(xué),2001,32(8):493-494.

6 高翔.Th1/Th2細(xì)胞因子對(duì)肝吸蟲致病機(jī)制的影響及黃芪聯(lián)合阿苯噠唑治療的研究[D].哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2006.

7 趙偉.細(xì)胞因子在華支睪吸蟲感染中作用的研究[D].哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2010.

8 高霏,卞濤.白介素2誘導(dǎo)的T細(xì)胞激酶與T細(xì)胞及相關(guān)炎癥免疫性疾病的研究進(jìn)展[J].國(guó)際呼吸雜志,2010,30(3):180-184.

9 劉艷華,程小星.自然殺傷T細(xì)胞在抗感染免疫中的作用研究進(jìn)展[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志,2010,33(3):229-231.

10 王瑜,夏超明.Th1/Th2極化相關(guān)因子在血吸蟲病肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用[J].中國(guó)血吸蟲病防治雜志,2010,22(4):384-387.

11 謝晶日,蔡林宏.抗病毒藥物影響慢性乙型肝炎患者IFN-γ水平的研究進(jìn)展[J].實(shí)用肝臟病雜志,2010,13(4):309-311.

12 陳芳.阿苯達(dá)唑片治療肝吸蟲的臨床療效觀察[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,5(17):81-82.

13 陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社,1993：593.

14 張國(guó)用.中藥黃芪的藥理作用及其臨床應(yīng)用研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20(6)：1059.

15 于亮，段紹斌，居來(lái)提，等.黃芪注射液對(duì)兩次打擊大鼠致多器官功能障礙綜合征中心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，13(3)：967.

16 李憲章.黃芪溫心組方治療慢性心力衰竭患者的療效觀察[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20(3)：437.