甘青賽莨菪粗提物的殺蟲活性研究

胡冠芳　劉敏艷　余海濤　牛樹君　沈慧敏

摘要：采用蟲體浸漬法和葉碟浸漬法研究了甘青賽莨菪粗提物對粘蟲、菜青蟲和麥長管蚜蟲的殺蟲活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，甘青賽莨菪葉甲醇粗提物對粘蟲5齡幼蟲的觸殺活性最強(qiáng)，其次為莖和根皮甲醇粗提物，稀釋5倍液的校正死亡率分別為28.09%，18.30%和17.07%。葉甲醇粗提物對4齡菜青蟲的觸殺活性最強(qiáng)，其次為莖和根皮甲醇粗提物，稀釋10倍液的校正死亡率分別為66.67%，64.29%和60.00%。葉、莖和根皮甲醇粗提物對4齡菜青蟲的拒食活性均很弱，對麥長管蚜具有一定的觸殺活性，對棉蚜和桃蚜無觸殺活性。

關(guān)鍵詞：甘青賽莨菪；粗提物；粘蟲；菜青蟲；蚜蟲；殺蟲活性

中圖分類號：S 482 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：10095500（2013）01001106

甘青賽莨菪（Anisodus tanguticus）為賽莨菪屬（Anisodus）茄科（Solanaceae）多年生草本植物，為青藏高原的典型高山植物，主要分布于青海、西藏、四川以及甘肅的部分地區(qū)，生長在海撥1 700～4 700 m的山坡、山地林緣、路旁、河灘、草地和灌叢。賽莨菪性溫，味辛、甘，有毒，具活血化瘀、鎮(zhèn)痛解痙、止血生肌、止咳平喘之功效，常用于急性腸炎、潰瘍病、腸道蛔蟲癥、膽石癥以及外傷出血、跌打損傷、紅腫疔毒、惡瘡腫痛等＼[1＼]。我國學(xué)者從賽莨菪中分離出山莨菪堿（Anisodamine）和樟柳堿（Anisodine）＼[2＼]。在甘青賽莨菪的殺蟲活性研究方面，國內(nèi)外報(bào)道甚少，張興等＼[3＼]和張國洲等＼[4＼]研究了丙酮和甲醇粗提物對赤擬谷盜（Tribolium castaneum）種群形成的抑制作用，以及對5齡菜青蟲（菜粉蝶Pieris rapae幼蟲）的拒食活性。粘蟲（Mythimna separate）、菜青蟲、棉蚜（Aphis gossypii）、桃蚜（Myzus persicae）和麥長管蚜（Sitobion avenae）是為害蔬菜、小麥、玉米、棉花等多種農(nóng)作物的重要害蟲。有關(guān)甘青賽莨菪粗提物對粘蟲的觸殺和拒食活性，對菜青蟲的觸殺活性，對棉蚜、桃蚜和麥長管蚜的觸殺活性，國內(nèi)外迄今文獻(xiàn)報(bào)道很少。鑒此研究了賽莨菪粗提物對粘蟲、菜青蟲和蚜蟲的殺蟲活性，旨在為利用賽莨菪研制新型植物源殺蟲劑提供線索和理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 植物樣品處理

甘青賽莨菪根、莖、葉、青果（未成熟果實(shí)）于2010年7月28日采自甘肅省甘南藏族自治州臨潭縣海拔3 420 m的天然草地。根洗凈后分為根皮和木質(zhì)部兩部分，根皮、根木質(zhì)部、莖、葉和青果切碎陰干，粉碎過40目篩，在室溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 植物樣品的提取

采用冷浸漬法提?。躘5＼]。稱取植物樣品50 g，置于棕色廣口瓶中，分別加入500 mL甲醇、乙醇、丙酮、石油醚和乙酸乙酯（化學(xué)純）浸泡72 h，過濾后收集濾液；濾渣繼續(xù)用500 mL相同溶劑第2次浸泡48 h，過濾后收集濾液；濾渣再用500 mL相同溶劑第3次浸泡24 h，過濾后收集濾液，棄除殘?jiān)?，合?次濾液。濾液經(jīng)RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至干為粗提物，稱其重量，計(jì)算產(chǎn)出率。

1.3 供試樣品的配制

粗提物浸膏用甲醇溶解并定溶至50 mL，相當(dāng)于植株干樣品1 000 g/L的質(zhì)量濃度，在冰箱中2℃條件下保存?zhèn)溆?。生物測定前加入1%的表面活性劑JFC（C7～C9烷醇聚氧乙烯醚）。

1.4 供試?yán)ハx

粘蟲采自蘭州市榆中縣良種繁殖場小麥田，用玉米葉或小麥苗連續(xù)飼養(yǎng)供試。菜青幼蟲、桃蚜、棉蚜（瓜蚜）和麥長管蚜采自未施藥的甘藍(lán)菜地或棉花田、小麥田。

1.5 生物測定方法

1.5.1 粗提物對粘蟲觸殺活性的測定 采用蟲體浸漬法＼[6＼]。供試樣品用水稀釋成5倍液。挑選大小一致的粘蟲5齡初期幼蟲，在藥液中浸漬3～4 s，取出后用濾紙吸去多余藥液，然后，放入直徑12 cm鋪有濾紙保濕的培養(yǎng)皿中，飼喂新鮮玉米葉片。每處理25頭幼蟲，重復(fù)4次。以甲醇+JFC用水稀釋成5倍液浸漬處理作為溶劑對照。在溫度（25±1）℃、濕度60%～80%、光照L∶D=14 h∶10 h條件下飼養(yǎng)，視取食情況及時添加玉米葉片。24 h后調(diào)查死亡數(shù)，計(jì)算校正死亡率。

1.5.2 甲醇粗提物對菜青蟲觸殺活性的測定 供試樣品用水稀釋成10倍液，選用4齡菜青蟲，飼喂新鮮甘藍(lán)葉片。每處理7頭幼蟲，重復(fù)4次。測試方法與粘蟲觸殺活性方法相同。

1.5.3 甲醇粗提物對粘蟲、菜青蟲拒食活性的測定 采用葉碟浸漬法＼[7，8＼]。從田間采集玉米、甘藍(lán)葉片，用圓形打孔器（直徑2 cm）打成葉碟。供試樣品用水稀釋成5倍液，將葉碟在藥液中浸漬3～4 s，取出晾干后放入直徑9 cm鋪有濾紙保濕的培養(yǎng)皿中，每皿放入10張玉米葉碟、2張甘藍(lán)葉碟。挑選粘蟲、菜青蟲4齡幼蟲，饑餓4 h后放入加有葉碟的培養(yǎng)皿中，每皿放入1頭，每組6頭，重復(fù)4次，累計(jì)處理24頭試蟲，以甲醇+JFC稀釋成5倍液浸漬葉碟處理作為對照。在溫度（25±1）℃、濕度60%～80%、光照L∶D=14 h∶10 h條件下飼養(yǎng)，視取食情況及時添加葉碟。48 h后用LI3000型葉面積測定儀測定剩余葉面積，統(tǒng)計(jì)取食量，計(jì)算拒食率。

拒食率（%）=＼[（對照平均取食量-處理平均取食量）/對照平均取食量＼]×100%

1.5.4 甲醇粗提物對桃蚜、棉蚜和麥長管蚜觸殺活性的測定 采用浸葉（穗）浸蟲法＼[9＼]。分別取帶有蚜蟲的甘藍(lán)葉片、棉花葉片和麥穗，剔除其上的若蚜和有翅成蚜、被寄生蚜，只保留無翅成蚜。供試樣品用水稀釋成30倍液，將具蚜葉片或麥穗在藥液中浸漬3 s，取出后用吸水紙吸去多余藥液，放入直徑為12 cm的培養(yǎng)皿中（鋪有濾紙保濕），葉柄或穗柄用濕棉球保濕。每處理試蟲25頭，重復(fù)4次。以甲醇+JFC稀釋成30倍液浸漬處理作為溶劑對照。飼養(yǎng)新鮮玉米葉片。24 h后檢查死亡數(shù)，計(jì)算死亡率和校正死亡率。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS v7.05統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，用LSRDuncan法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘青賽莨菪不同部位、不同極性溶劑粗提物對粘蟲的觸殺活性

甘青賽莨菪莖、葉、根皮、根木質(zhì)部和青果用甲醇、乙醇、丙酮、石油醚和乙酸乙酯5種不同極性溶劑提取，均以甲醇粗提物對粘蟲5齡幼蟲的觸殺活性為最強(qiáng)，其中，葉甲醇粗提物的觸殺活性最強(qiáng)，稀釋5倍液的校正死亡率為28.09%；其次為莖和根皮甲醇粗提物，校正死亡率分別為18.3%和17.07%；根木質(zhì)部和青果甲醇粗提物的觸殺活性較弱，校正死亡率僅為10%和8%（表1）。試驗(yàn)表明，甘青賽莨菪的殺蟲活性成分主要存在于葉、莖和根皮中，根木質(zhì)部和青果的殺蟲活性成分含量較低。

2.2 甘青賽莨菪不同部位甲醇粗提物對菜青蟲的觸殺活性

甘青賽莨菪葉甲醇粗提物對4齡菜青蟲的觸殺活性最強(qiáng)，稀釋10倍液的校正死亡率為66.67%；其次為莖和根皮甲醇粗提物，校正死亡率分別為64.29%和60%；根木質(zhì)部和青果甲醇粗提物的觸殺活性較弱，校正死亡率分別為35.71%和30%（表2）。

試驗(yàn)分析證明甘青賽莨菪的殺蟲活性成分主要存在于葉、莖和根皮中。

2.3 甘青賽莨菪不同部位甲醇粗提物對粘蟲、菜青蟲的拒食活性

甘青賽莨菪莖、葉、根皮、根木質(zhì)部和青果甲醇粗提物對粘蟲4齡幼蟲無拒食活性，稀釋5倍液的拒食率在6.52%；葉、莖和根皮甲醇粗提物對4齡菜青蟲的拒食活性很弱，拒食率分別為14.06%，13.62%和9.71%；根木質(zhì)部和青果甲醇粗提物則無拒食活性（表3）。

2.4 甘青賽莨菪不同部位甲醇粗提物對桃蚜，棉蚜和麥長管蚜的觸殺活性

甘青賽莨菪莖、葉和根皮甲醇粗提物對桃蚜和棉蚜無觸殺活性，稀釋30倍液的校正死亡率在8.44%；但對麥長管蚜具有一定的觸殺活性，校正死亡率分別為22.42%，21.55%和17.68%（表4）。

3 討論和結(jié)果

3.1 甘青賽莨菪粗提物的殺蟲抑菌活性

試驗(yàn)結(jié)果表明，甘青賽莨菪葉甲醇粗提物稀釋5倍液對粘蟲5齡幼蟲的校正死亡率可達(dá)28.09%，盡管死亡率不高，但根據(jù)多年從事植物源農(nóng)藥研究掌握的100余種植物粗提物對粘蟲的殺蟲活性數(shù)據(jù)，判斷甘青賽莨菪具有較強(qiáng)的殺蟲活性，而且該植物對菜青蟲具有很強(qiáng)的殺蟲活性。張興等＼[3＼]研究發(fā)現(xiàn)，甘青賽莨菪丙酮粗提物可抑制赤擬谷盜種群的形成。研究發(fā)現(xiàn)，甘青賽莨菪葉、莖和根皮甲醇粗提物對4齡菜青蟲的拒食活性很弱，這與張國洲等＼[4＼]的研究結(jié)果一致。王威等＼[10＼]研究證實(shí)，甘青賽莨菪乙醇粗提物在1 000 mg/kg濃度下對水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae）具有一定的抑制作用。因此，今后注意研究甘青賽莨菪葉、莖和根皮甲醇粗提物對小麥、玉米、辣椒、蘋果、番茄等植物的病原菌的抑制作用，探明其在植物源殺菌劑開發(fā)利用方面的前景。

3.2 賽莨菪屬植物資源的保護(hù)利用

茄科賽莨菪屬植物是提取山莨菪堿和東莨菪堿等托品烷類生物堿的重要植物資源，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由于過度采挖和墾荒，野生資源損失慘重，很多野外地區(qū)面臨逐漸滅絕的境地。甘青賽莨菪全株有毒、根毒較大，但從對昆蟲的毒性研究結(jié)果分析，甘青賽莨菪地上部莖和葉對粘蟲和菜青蟲的觸殺活性高于其根部，這源于莖葉的殺蟲生物堿含量高于根部，抑或莖葉存在與根部不同的其他殺蟲活性成分，尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。從利用賽莨菪研制植物源殺蟲劑而言，可直接采收其地上部莖葉，而無需挖根，這有利于保護(hù)野生資源，避免挖根對生態(tài)環(huán)境造成的嚴(yán)重破壞；對于人工栽培的賽莨菪，利用莖葉可有效延長利用周期，提高經(jīng)濟(jì)效益。

3.3 植物源農(nóng)藥的新用途

與化學(xué)農(nóng)藥相比，植物源生物農(nóng)藥作用速度較慢、價格較高，多用于茶葉、中藥材、保護(hù)地蔬菜、食用菌等附加值較高的作物上，很少用于防治草原病蟲害，王俊梅等＼[11＼]試驗(yàn)結(jié)果表明，植物源殺蟲劑凈葉寶對草原害蟲闊脛瑩葉甲（Palllsiola absintnii）具有極強(qiáng)的殺滅作用；文克儉等＼[12＼]研究了生物殺蟲劑BT對觀賞草坪主要害蟲粘蟲的防效。近年來，高爾夫球場使用化學(xué)農(nóng)藥對人類健康的影響已引起廣泛關(guān)注＼[13＼]，植物源農(nóng)藥低毒、易降解、對環(huán)境友好的特點(diǎn)決定了其在高爾夫球場的病蟲害防治中具有廣闊的應(yīng)用前景。

植物源農(nóng)藥用途的擴(kuò)大必將帶動植物源農(nóng)藥研發(fā)工作的不斷深入，在甘青賽莨菪的研究領(lǐng)域也是如此。

甘青賽莨菪不同部位用不同極性溶劑提取，均以甲醇粗提物對粘蟲5齡幼蟲的觸殺活性為最強(qiáng)，其中，葉甲醇粗提物的觸殺活性最強(qiáng)，稀釋5倍液的校正死亡率為28.09%；其次為莖和根皮甲醇粗提物，校正死亡率分別為18.30%和17.07%。葉甲醇粗提物對4齡菜青蟲的觸殺活性最強(qiáng)，稀釋10倍液的校正死亡率為66.67%；其次為莖和根皮甲醇粗提物，校正死亡率分別為64.29%和60%。莖、葉和根皮甲醇粗提物對麥長管蚜具有一定的觸殺活性，稀釋30倍液的校正死亡率分別為22.42%，21.55%和17.68%。

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