微毛訶子樹皮提取液對大鼠離體子宮影響的研究

賴泳，張梅，李代航，尹品通，劉勇，莽朝永

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

微毛訶子樹皮提取液對大鼠離體子宮影響的研究

賴泳，張梅，李代航，尹品通，劉勇，莽朝永

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

目的：研究微毛訶子樹皮醇提物和水提物對大鼠離體子宮平滑肌活動的影響。方法：觀察微毛訶子樹皮醇提液和水提液對大鼠離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮活動和催產(chǎn)素或組胺作用后子宮的影響。結(jié)果：微毛訶子樹皮醇提液和水提液均可使大鼠自發(fā)及催產(chǎn)素作用后子宮平滑肌收縮頻率減慢，張力減小，活動力下降；水提液還顯著減弱子宮收縮幅度并使組胺作用后的子宮平滑肌張力增大，收縮頻率加快，收縮幅度升高，活動力增強。結(jié)論：微毛訶子樹皮的醇提物和水提物均能抑制大鼠子宮的自發(fā)性以及催產(chǎn)素作用后的子宮的收縮活動，其水提液可以拮抗組胺對大鼠子宮收縮活動的抑制作用。

微毛訶子樹皮；催產(chǎn)素；組胺；大鼠離體子宮

訶子屬于喬木類使君子科植物，國外主產(chǎn)于馬來西亞、印度、緬甸等國，我國云南有分布，主要分布于臨滄市和德宏傣族景頗族自治州〔1〕。文獻報道訶子具有抗菌、強心、抗氧化、抗腫瘤、抗過敏〔2-5〕和抗病毒〔5〕等作用。我國民間訶子主要用于潤肺、澀腸、久咳、久瀉、便血及尿頻等〔6〕。在印度民間訶子樹皮粉用于治療心力衰竭、冠心病、高血脂等疾病取得較好效果〔7〕。臨滄現(xiàn)已有企業(yè)將其開發(fā)成飲料，但迄今為止對其缺少系統(tǒng)藥理學(xué)研究，現(xiàn)有文獻也過多的局限于訶子原種的研究，尚未見對其變種藥理研究。本實驗觀察的是訶子的原種變種微毛訶子（T.chebula Retz.var.tomentella（Kurz.）clarke.1. c.）的醇提物和水提物對大鼠離體子宮自發(fā)性和非自發(fā)性收縮活動的影響，并對其機制進行了初步探討，為其開發(fā)打下理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥品及試劑微毛訶子樹皮（產(chǎn)地：云南省臨滄市孟定鎮(zhèn)，由大理學(xué)院生藥教研室張德全副教授鑒定）；NaCl、KCl、NaHCO3、CaCl2、95%乙醇、葡萄糖均為市售分析純；蒸餾水（自制）；催產(chǎn)素（上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：06405）；組胺（上海麗珠東風(fēng)生物制藥，批號：1703）。

1.2 動物SPF級SD雌性未孕大鼠，體重250～300 g，由大理學(xué)院動物實驗中心提供，合格證號：SCAXK（滇）2009-0006。

1.3 儀器BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟電子有限公司）；HW-400恒溫平滑肌浴槽（成都泰盟電子有限公司）。

2 方法

2.1 提取液的制備①微毛訶子樹皮水提取液：稱取微毛訶子樹皮粗粉50 g，加蒸餾水500 mL浸泡過夜，過濾。在濾渣中加入250 mL蒸餾水，置于60℃水浴中加熱10 min，趁熱過濾，殘渣再加250 mL蒸餾水于60℃水浴中加熱10 min，趁熱過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮至每1 mL相當于生藥量1.700 g。②訶子樹皮酸性乙醇醇提取液：稱取訶子樹皮粗粉40 g，加0.5%的鹽酸乙醇溶液140 mL，置于水浴中回流1 h，趁熱過濾，殘渣再加0.5%的鹽酸乙醇溶液140 mL，置于水浴中回流1 h，趁熱過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮至每1 mL相當于生藥量0.63 g。③按參考文獻〔7-9〕方法配制戴雅隆氏液。

2.2 標本制備實驗用大鼠于實驗前3天每日皮下注射己烯雌酚0.1 mg/kg，人工促情以提高子宮對藥物的敏感性。實驗時擊頭處死大鼠，開腹，迅速剪取子宮置于4℃通有混合氣（95%O2+5%CO2）飽和的戴雅隆氏液中，并剔除子宮外膜脂肪和結(jié)締組織，剪成1.5～2 cm左右，待用〔10〕。

2.3 對大鼠正常離體子宮平滑肌運動的影響調(diào)整BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)各項參數(shù)，恒溫平滑肌浴槽內(nèi)溫度保持為（37±0.5）℃。將標本放在盛有20 mL戴雅隆氏液的恒溫浴管中，上端連接拉力換能器，下端系于L型鉤上固定，同時通入混合氣60～80個氣泡/min，標本負荷l g，平衡30 min，待標本穩(wěn)定后，開始實驗〔11〕。

①先記錄10 min正常子宮平滑肌收縮曲線，等收縮波形呈穩(wěn)定的正余弦曲線或穩(wěn)定波形后向浴槽中加入微毛訶子樹皮醇提液0.05 mL或水提液0.1 mL，記錄給藥后5 min子宮平滑肌收縮曲線，然后停止實驗，立即用新鮮戴雅隆氏液沖洗3次，重復(fù)實驗。觀察并分別記錄正常、加醇提液或水提液后子宮張力、收縮的幅度和頻率，并用統(tǒng)計學(xué)方法進行給藥前后自身對比分析〔12〕。

②先記錄10 min正常子宮平滑肌收縮曲線，等收縮波形呈穩(wěn)定的正余弦曲線或穩(wěn)定波形后向水浴槽中加入催產(chǎn)素0.1 mL（1 mL∶0.5個單位），3 min后加入訶子樹皮醇提液0.05 mL或水提液0.1 mL，記錄給藥后5 min子宮平滑肌收縮曲線，然后停止實驗，立即用新鮮戴雅隆氏液沖洗3次，重復(fù)實驗。觀察并分別記錄正常、加催產(chǎn)素和加醇提液或水提液后子宮張力、收縮的幅度和頻率，并用統(tǒng)計學(xué)方法進行給藥前后自身對比分析和組間對比分析。

③先描記10 min正常子宮平滑肌收縮曲線，等收縮波形呈穩(wěn)定的正余弦曲線或穩(wěn)定波形后向水浴槽中加入組胺（0.1%）0.2 mL，3 min后加入微毛訶子樹皮水提液0.1 mL，記錄給藥后5 min子宮平滑肌收縮曲線，然后停止實驗，立即用新鮮戴雅隆氏液沖洗3次，重復(fù)實驗。觀察并分別記錄正常、加組胺和加水提液后子宮張力、收縮的幅度和頻率，并用統(tǒng)計學(xué)方法進行給藥前后自身對比分析和組間對比分析。

3 實驗結(jié)果

3.1 微毛訶子樹皮提取液對大鼠離體子宮平滑肌的影響與正常組相比，微毛訶子樹皮醇提液可使大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率減慢（P＜0.05），張力減小（P＜0.05），活動力下降（P＜0.05），對收縮幅度影響較小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組比，微毛訶子樹皮水提物可使大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率減慢（P＜0.05），張力顯著減小（P＜0.01），活動力顯著下降（P＜0.01），收縮幅度顯著減弱（P＜0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

3.2 微毛訶子樹皮醇提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響大鼠離體子宮加入催產(chǎn)素后，子宮平滑肌張力顯著增加（P＜0.01），收縮頻率加快（P＜0.05），活動力顯著上升（P＜0.01），收縮幅度沒有顯著變化；微毛訶子樹皮醇提液可使催產(chǎn)素作用后的子宮平滑肌張力減?。≒＜0.05），收縮頻率顯著減慢（P＜0.01），收縮幅度顯著降低（P＜0.01），活動力顯著下降（P＜0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

3.3 微毛訶子樹皮水提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響大鼠離體子宮加入催產(chǎn)素后，子宮平滑肌張力顯著增加（P＜0.01），收縮頻率顯著加快（P＜0.01），活動力顯著上升（P＜0.01），收縮幅度顯著升高（P＜0.01）；微毛訶子樹皮水提液可使催產(chǎn)素作用后的子宮平滑肌張力顯著減小（P＜0.01），收縮頻率顯著減慢（P＜0.01），收縮幅度降低（P＜0.05），活動力顯著下降（P＜0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

表1 微毛訶子樹皮對大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)收縮活動的影響（±s，n=8）

表1 微毛訶子樹皮對大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)收縮活動的影響（±s，n=8）

注：與正常組比較※P＜0.05；▲P＜0.01。

表2 微毛訶子樹皮醇提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

表2 微毛訶子樹皮醇提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較※P＜0.05；▲P＜0.01；與加催產(chǎn)素組比較■P＜0.05；◆P＜0.01。

3.4 微毛訶子樹皮水提液對組胺作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響大鼠離體子宮加入組胺后，子宮平滑肌張力減?。≒＜0.05），收縮頻率減慢（P＜0.05），活動力下降（P＜0.05），收縮幅度降低（P＜0.05）；微毛訶子樹皮水提液可使組胺作用后的子宮平滑肌張力增大（P＜0.05），收縮頻率顯著加快（P＜0.01），收縮幅度顯著升高（P＜0.05），活動力顯著增強（P＜0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表4。

表3 微毛訶子樹皮水提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

表3 微毛訶子樹皮水提物對催產(chǎn)素作用后的大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較▲P＜0.01；與催產(chǎn)素組比較■P＜0.05；◆P＜0.01。

表4 微毛訶子樹皮水提物對組胺作用后大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

表4 微毛訶子樹皮水提物對組胺作用后大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較※P＜0.05；與加組胺組比較■P＜0.05；◆P＜0.01。

4 討論

微毛訶子樹皮提取物對大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮和催產(chǎn)素引起的非自發(fā)性收縮活動均有顯著性抑制作用，微毛訶子樹皮水提液還對組胺引起的大鼠離體子宮平滑肌舒張活動有抑制作用。鄔國棟等報道訶子提取液能明顯抑制兔離體腸平滑肌的自發(fā)性收縮活動，但不知是哪種或哪幾種成分在發(fā)揮作用，還需要進一步分離純化；同時訶子提取液抑制腸平滑肌收縮活動是阻斷M受體，還是抑制鈣離子內(nèi)流或通過其他作用機制發(fā)揮作用，還有待進一步進行深入研究〔11〕。本實驗結(jié)果顯示，微毛訶子樹皮醇提液可使大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率顯著減慢，張力減小，活動力下降，但對收縮幅度影響較??；微毛訶子樹皮水提液可使大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率減慢，張力顯著減小，活動力顯著下降，收縮幅度顯著減弱；催產(chǎn)素可使大鼠離體子宮平滑肌張力顯著增大，收縮頻率加快，活動力顯著上升，收縮幅度顯著增強；微毛訶子樹皮醇提液可使催產(chǎn)素作用后的子宮平滑肌張力減小，收縮頻率顯著減慢，活動力顯著下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，對收縮幅度影響較小，微毛訶子樹皮水提液可使催產(chǎn)素作用后的子宮平滑肌張力顯著減小，收縮頻率顯著減慢，收縮幅度降低，活動力顯著下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；組胺使大鼠離體子宮平滑肌張力減小，收縮頻率減慢，活動力下降，收縮幅度降低；微毛訶子樹皮水提液可使組胺作用后的子宮平滑肌張力增大，收縮頻率顯著加快，收縮幅度顯著升高，活動力顯著增強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

文獻報道干燥訶子具有收斂、止瀉、抗菌、強心、抗氧化以及抗癌抗腫瘤等功效，在我國民間中草藥中有極廣泛的應(yīng)用，在蒙藥、藏藥中占有非常重要的地位〔13〕。但是訶子樹皮和訶子之間的化學(xué)成分差異仍不明確，同時提取液成分復(fù)雜，不知是哪種或哪幾種成分在發(fā)揮作用，仍需要進一步分離提?。槐敬螌嶒灠l(fā)現(xiàn)微毛訶子樹皮水提液對組胺引起的大鼠離體子宮平滑肌舒張活動有抑制作用，所以訶子樹皮提取液對子宮平滑肌收縮活動的抑制可能與H受體有關(guān)，也可能通過其他作用機制發(fā)揮作用，具體還有待進一步進行深入研究，進而為中藥微毛訶子樹皮的臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。

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（責(zé)任編輯 李楊）

Study of the Effect of Myrobalan Bark Extracts on Isolated Rat Uterus

LAI Yong,ZHANG Mei,LI Daihang,YIN Pintong,LIU Yong,MANG Chaoyong
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To research the effect of extracts（water extract and alcohol extract form myrobalan）on isolated rat uterus. Methods:Observe the influence of water extract and alcohol extract from myrobalan on the spontaneous contraction of isolated rat uterus,and the isolated rat uterus after treated with oxytocin or histamine.Results:The contraction frequency,tension and motoricity of isolated rat uterus decreased with water extract and alcohol extract form myrobalan;the contraction frequency of isolated rat uterus significantly reduced with water extract of myrobalan;the water extract of myrobalan could increase the tension,the contraction frequency and the contraction amplitude of isolated rat uterus after the rat was treated with histamine.Conclusion:The extracts (water extract and alcohol extract form myrobalan)can inhibit the spontaneous contraction of isolated rat uterus,and it has the same function after the rat was treated with oxytocin.Water extract of myrobalan can antagonize the contraction of isolated rat uterus after the rat was treated with histamine.

myrobalan bark;oxytocin;histamine;excised uterus of rats

R285.5

A

1672-2345（2013）12-0001-04

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.12.001

2013-08-28

2013-09-17

賴泳，教授，主要從事中藥藥理學(xué)、臨床藥理學(xué)研究.