桑姜感冒膠囊中總黃酮含量的測定

朱坤寧，陳園園，周洋，楊永壽

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

桑姜感冒膠囊中總黃酮含量的測定

朱坤寧，陳園園，周洋，楊永壽*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

目的：建立桑姜感冒膠囊中總黃酮含量的測定方法。方法：采用紫外-可見分光光度法，以蘆丁為對照品，以506 nm作為測量波長進(jìn)行測定。結(jié)果：蘆丁在0.5~3.0 mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 7），平均回收率為96.63%，RSD為1.91%。結(jié)論：該方法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于測定桑姜感冒膠囊中總黃酮的含量。

桑姜感冒膠囊；總黃酮；紫外-可見分光光度法

桑姜感冒膠囊收載于中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)（試行，標(biāo)準(zhǔn)編號：YBZ01242005）中，由桑葉、菊花、紫蘇、連翹、苦杏仁、干姜等藥材制備而成的膠囊制劑，具有散風(fēng)清熱、祛寒止咳等功效，用于風(fēng)熱感冒、咽喉疼痛等并發(fā)癥〔1〕。處方中的桑葉、菊花、紫蘇、連翹等四味藥材均含有大量的黃酮〔2-5〕，黃酮類化合物是該制劑中的主要有效成分之一。研究證明，黃酮類成分具有抗癌防癌、抗病毒的作用〔6-7〕，且對心血管系統(tǒng)有顯著效果〔8〕。但現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并未對桑姜感冒膠囊中的總黃酮進(jìn)行測定，為更好地控制桑姜感冒膠囊的質(zhì)量，確保藥品的療效，本實(shí)驗(yàn)采用紫外-可見分光光度法對該制劑中總黃酮的含量進(jìn)行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器紫外-可見分光光度計(jì)（TU-1901，北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9420A，上海-恒科技有限公司），梅特勒電子天平（AE240，梅特勒-托利多儀器有限公司），超聲波清洗器（SK5200H，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器）。

1.2 試藥蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-2010128），桑姜感冒膠囊（四川好醫(yī)生制藥股份有限公司，批號：110127、112706、110148），水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品25.00 mg置25 mL量瓶中，加60%乙醇適量，超聲溶解，定容、搖勻，即得濃度為1.00 mg/mL的蘆丁對照液備用。

2.2 供試品溶液的制備精密稱取本品內(nèi)容物0.2 g，置圓底燒瓶中，加入60%乙醇25 mL，搖勻，超聲提取30 min，離心，取上清液用0.45 μm的濾膜過濾，即得。

2.3 測量波長的選擇分別精密取“2.1”、“2.2”項(xiàng)的對照品、供試品溶液各2.0 mL，分置25 mL量瓶中，加5%NaNO2溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，再加入10% Al（NO3）3溶液1 mL，搖勻，繼續(xù)靜置6 min，加1mol/L NaOH溶液10mL，搖勻，靜置15min顯色〔9-12〕，取出，放冷，定容至25 mL，搖勻，以顯色后的60%乙醇溶液作空白，在400~700 nm下掃描光譜圖，測得供試品與對照品最大吸收峰均為506 nm〔13-14〕（圖1），故確定本實(shí)驗(yàn)的測定波長為506 nm。

圖1 對照品和供試品的紫外吸收光譜圖

2.4 乙醇濃度考察分別考察了0%、40%、50% 60%、70%、80%、90%、100%的乙醇對總黃酮的提取效率，結(jié)果表明用60%的乙醇在相同時(shí)間內(nèi)提取效率最高，因此采用60%的乙醇作為提取溶劑。

2.5 超聲提取時(shí)間考察分別考察了超聲提?。üβ?50 W，頻率50 KHz）10、20、30、40、50、60 min結(jié)果表明超聲提取30 min供試品中總黃酮即可提取完全，故提取時(shí)間設(shè)定為30 min。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取“2.1”項(xiàng)的蘆丁對照品溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，均加入60%乙醇使成3.0 mL，按“2.3”項(xiàng)的顯色方法顯色在506 nm波長下測定吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.2874X+0.0208，r=0.9997，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：蘆丁對照品在0.5~3.0 mg內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2 精密度試驗(yàn)精密量取“2.1”項(xiàng)下制備的對照品溶液2.5 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色，在506 nm波長處連續(xù)測定6次吸光度值，結(jié)果RSD為0.13%表明儀器精密度良好。

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取“2.2”項(xiàng)所制備的供試品溶液2.5 mL，按“3.1”項(xiàng)方法分別于0、15、30、45 60、75、90、105、120 min顯色，在506 nm波長處分別測定吸光度值。結(jié)果總黃酮含量的RSD為0.41%，表明供試品在2 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。3.4 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批號的（110127）供試品，按“2.2”項(xiàng)平行制備6份供試液，按“2.3”項(xiàng)方法顯色，記錄吸光度值，計(jì)算得總黃酮含量為7.088 9 mg/g，RSD為1.40%，表明方法的重復(fù)性良好。3.5加樣回收取同一批號（110127）已知含量供試品（n=6），按“2.2”項(xiàng)供試品制備方法處理，按表1精密加入對照品1.5 mg。按“2.3”項(xiàng)方法顯色，在506 nm波長下測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)（n=6）

3.6 供試品測定取批號為110127、112706、110148的桑姜感冒膠囊，照本實(shí)驗(yàn)所建立的方法測定供試品中總黃酮含量，結(jié)果分別為7.088 9、6.958 1、7.484 3 mg/g。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)分別以不同提取時(shí)間、不同乙醇濃度優(yōu)化總黃酮的提取工藝，最終得出60%乙醇超聲提取30 min可將總黃酮提取完全。含量測定結(jié)果顯示，同一生產(chǎn)廠家不同批號的桑姜感冒膠囊中，總黃酮的含量有一定的差異，這可能與不同批號藥材的來源不同有關(guān)，為確保膠囊中總黃酮含量的一致性，建議藥品在生產(chǎn)過程中采購相同產(chǎn)地的藥材。本實(shí)驗(yàn)操作簡單、方便、快捷、重復(fù)性好，能較全面地控制桑姜感冒膠囊的質(zhì)量。

〔1〕國家藥典委員會(huì).YBZ01242005，中國藥品部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥分冊〔S〕.2008：Z6-157.

〔2〕楊虎，馬燮，陳虹，等.分光光度法測定桑葉中總黃酮含量的研究〔J〕.應(yīng)用化工，2006，35（10）：812-813.

〔3〕楊銘，吳志誼，吳川，等.可見光及紫外光分光光度法測定菊花總黃酮含量的研究〔J〕.廣東化工，2007，34（9）：112-114.

〔4〕馬堯，莊云.紫蘇不同部位總黃酮含量測定〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（33）：18775-18776.

〔5〕程力惠，李曉蒙.貫葉連翹葉總黃酮提取工藝的研究〔J〕.中藥材，2008，31（6）：904-907.

〔6〕孔繁晟，嚴(yán)春艷，賁永光，等.紫外分光光度法測定云南紅豆杉枝葉中總黃酮的含量〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20（2）：471-472.

〔7〕李云鵬，黃蕓，魏春娥，等.紫外分光光度法測定黃芩中總黃酮含量〔J〕.河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2007，22（1）：36-37.

〔8〕劉玉芬，夏海濤，楊樹平.紫外分光光度法測定劍麻花中總黃酮的含量〔J〕.食品科學(xué)，2005，26（9）：418-419.

〔9〕李春紅，田吉，何兵，等.紫外分光光度法測定黃芪總黃酮含量〔J〕.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，36（8）：954-956.

〔10〕蘇東林，單楊，李東陽.紫外分光光度法測定柑桔皮中總黃酮的含量〔J〕.食品研究與開發(fā)，2007，28（8）：124-128.

〔11〕朱華，唐桂興，張可鋒，等.基于紫外分光光度法的金花茶葉中總黃酮含量的測定〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（9）：4559-4561.

〔12〕史國舉.紫外-可見分光光度法測定復(fù)方紅景天膠囊中總黃酮含量〔J〕.中國醫(yī)藥科學(xué)，2011，14（1）：45-46.

〔13〕斯琴畢力格，曲長明，李增春.茜草中提取總黃酮實(shí)驗(yàn)微型法與常規(guī)法的比較〔J〕.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，23（3）：270-271.

〔14〕姚倩，郭曉強(qiáng)，張良蕾，等.分光光度法測定蘆丁顆粒劑中總黃酮含量〔J〕.成都大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010 29（1）：23-24.

（責(zé)任編輯 毛本勇）

Quantitative Determination of Total Flavonoids in Sangjiang Ganmao Capsule

ZHU Kunning,CHEN Yuanyuan,ZHOU Yang,YANG Yongshou*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To establish UV spectrophotometry method for the determination total flavonoids in compounds of Sangjiang Ganmao capsule.Methods:The contents of the total flavonoids were determined at 506 nm with rutin as the standard substance by ultraviolet UV-visible method.Results:The calibration curve was linear in the range of 0.5-3.0 mg for rutin,r越0.999 7;the average recovery was 96.63%,RSD越1.91%（n越6）.Conclusion:This method is simple,fast and accurate,and can be used as the determination of the total flavonoids in compound Sangjiang Ganmao capsule.

Sangjiang Ganmao capsule;total flavonoids;UV-visible method

R284

A

1672-2345（2013）03-0003-03

大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項(xiàng)目（KYSX2011071）

2012-11-30

2012-12-20

朱坤寧，2010級藥學(xué)專業(yè)本科生. *通信作者：楊永壽，高級實(shí)驗(yàn)師.