反式脂肪酸與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展

邱 斌， 徐同成， 王 青， 劉麗娜，陶海騰， 劉 瑋， 宋 康， 杜方嶺*

（1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品研究所，山東 濟(jì)南 250100；2.山東杏林科技職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250200）

內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過度是內(nèi)皮細(xì)胞損傷的初始環(huán)節(jié)，在動(dòng)脈粥樣硬化的早期扮演了重要角色。目前國內(nèi)外針對TFA對動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病的研究主要集中在內(nèi)皮細(xì)胞凋亡方面，并已有一定的研究基礎(chǔ)。下文就反式脂肪酸與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展作一綜述。

1 反式脂肪酸

由于天然油脂缺乏穩(wěn)定性并且可塑性較差，而且貨架期較短，因此，為了滿足食品工業(yè)對油脂的使用要求，廠家通過采用油脂的氫化工藝來提高油脂的可塑性和穩(wěn)定性等。植物油脂在氫化加工的過程中，其中的不飽和雙鍵轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂I，與此同時(shí)，會(huì)產(chǎn)生部分異構(gòu)化的產(chǎn)物TFA（反式脂肪酸），TFA是一類分子中含有一個(gè)或多個(gè)反式雙鍵的非共軛不飽和脂肪酸[1]。其種類和含量與氫化程度、氫化條件及原料油脂中不飽和脂肪酸的含量等密切相關(guān)。TFA中主要以 tC18∶1（反油酸）為主，質(zhì)量分?jǐn)?shù)約占20%～50%。據(jù)國外研究報(bào)道，人類食物中的反式脂肪酸約90%都是反油酸，反油酸雙鍵位置主要分布于△4～△16 之間， 其中主要以 9t C18∶1、10t C18∶1和11t C18∶1三種形式存在[2]。反式脂肪酸和順式脂肪酸由于其幾何空間結(jié)構(gòu)的不同，因此在脂質(zhì)新陳代謝過程中酶的交叉反應(yīng)也相應(yīng)不同[3]。

研究發(fā)現(xiàn):反式脂肪酸能增加內(nèi)皮損傷過程中的循環(huán)性生物標(biāo)記物[4]，并削弱動(dòng)脈擴(kuò)張依賴物-NO的分泌量[5]。有研究證明，攝入過量的反式脂肪酸導(dǎo)致細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、細(xì)胞內(nèi)黏附分子-1（VCAM-1）、E-選擇素等的表達(dá)升高[6]。 有報(bào)道稱TFA能夠引起血漿總膽固醇、甘油三酯水平及脂蛋白（Lp-α）的升高，而這些因素都是與動(dòng)脈粥樣硬化、血栓和冠心病的形成密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，TFA的攝入量每增加2%，導(dǎo)致患心臟疾病的危險(xiǎn)就會(huì)急劇增加25%，等摩爾的TFA對心臟健康的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過飽和脂肪酸[7]。

2 內(nèi)皮細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡（apoptosis）是正常的組織細(xì)胞在受到生理和（或）病理性刺激后，其自身內(nèi)部機(jī)制激活DNA內(nèi)切酶自發(fā)啟動(dòng)，而導(dǎo)致的一種細(xì)胞自發(fā)性死亡過程，它對于維持多細(xì)胞生物的器官發(fā)育、組織分化的穩(wěn)定存在著重要的意義[8]。

內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量的穩(wěn)定維持和血管功能正常的保持依賴于內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與增殖之間的動(dòng)態(tài)平衡[9]。但是，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過度卻是造成內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的初始環(huán)節(jié)。Haunsteter認(rèn)為，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡在早期的動(dòng)脈粥樣硬化過程中具有非常重要的作用[10]。Hasdai等在用高膽固醇飼養(yǎng)的豬冠狀動(dòng)脈中觀察到了內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡[11]。Tricot等在動(dòng)脈粥樣硬化患者的粥樣斑塊處檢測到凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞[12]。最近的研究結(jié)果表明:內(nèi)皮細(xì)胞的過度凋亡是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的生物學(xué)基礎(chǔ)，同時(shí)也能促發(fā)急性心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛等急性心臟病，而且內(nèi)皮的過度凋亡還能抑制血管再生，妨礙血管功能的恢復(fù)。

內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)附于血管表面，不僅是血管壁的天然屏障，而且可以分泌多種能夠調(diào)節(jié)血管功能的內(nèi)皮源性細(xì)胞因子[13]。因此，在發(fā)生凋亡的各種血管壁細(xì)胞中，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用尤其重要。許多研究表明，細(xì)胞凋亡是動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要特征之一[14]，凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)物模型和人體動(dòng)脈粥樣硬化病變中均有發(fā)現(xiàn)，而且?guī)缀跛屑褐闹聞?dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因子都能在體外實(shí)驗(yàn)中引起內(nèi)皮凋亡；與之相反，一些抗動(dòng)脈粥樣硬化的因素則可阻止內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生。由此推測，抗AS因素是通過阻止內(nèi)皮細(xì)胞凋亡而發(fā)揮作用的[15]。

研究表明，血管內(nèi)皮損傷、繼發(fā)性單核-巨噬細(xì)胞增多、白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附及單核-巨噬細(xì)胞向內(nèi)皮下遷移，是AS發(fā)生的主要病理機(jī)制之一[16]。內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作為內(nèi)皮損傷的主要形式，會(huì)引發(fā)一系列復(fù)雜而又相互依存的變化，具體特征如下[17]:（1）增加血管通透性，促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞向內(nèi)皮下遷移和造成脂質(zhì)在內(nèi)皮下的堆積；（2）促使單核-巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等向內(nèi)膜下浸潤，使血管壁局部的腫瘤壞死因子 （tumor necrosis factor-α，TNF-α）和集落刺激因子 （colony stimulating factor，CSF）等炎癥因子分泌增加，加劇內(nèi)皮細(xì)胞凋亡并能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子表達(dá)增加，從而進(jìn)一步促進(jìn)炎癥細(xì)胞的激活和趨化；（3）破壞血管內(nèi)膜屏障，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡使下層的血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）直接暴露于各種炎癥刺激因子的環(huán)境下，刺激VSMCs增殖及內(nèi)膜下遷移，最終吞噬脂質(zhì)后形成泡沫細(xì)胞。

3 Caspase家族與凋亡

Caspase是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶，屬于半胱氨酸蛋白酶家族，當(dāng)其被相關(guān)凋亡信號途徑激活后，會(huì)降解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)，使細(xì)胞走向不可逆的死亡。多數(shù)的Caspase與細(xì)胞凋亡有關(guān)，啟動(dòng)型Caspase （initiator Caspase）包括 Caspase-2、-8、-9能介導(dǎo)相應(yīng)凋亡信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)；效應(yīng)型Caspase（effector Caspase） 包括 Caspase-3、-6、-7 等通過裂解細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白以及功能蛋白等使細(xì)胞解體[18]。不同啟動(dòng)型的Caspase介導(dǎo)不同通路的凋亡信號，如Caspase-8介導(dǎo)死亡受體通路的相關(guān)凋亡信號，而Caspase-9則介導(dǎo)細(xì)胞線粒體通路的相關(guān)凋亡信號。在死亡受體通路中，F(xiàn)as（死亡受體）和TNF-α（腫瘤壞死因子-α）可以激活細(xì)胞內(nèi)死亡復(fù)合體相關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白和Caspase前體（procaspase）從而形成死亡復(fù)合體，死亡復(fù)合體接下來會(huì)激活一系列的上游啟動(dòng)性Caspase，如:Caspase-8，這些上游啟動(dòng)性Caspase會(huì)激活下游的Caspase蛋白酶，細(xì)胞的凋亡主要是通過下游的Caspase促使執(zhí)行的。在線粒體通路中，細(xì)胞應(yīng)激可以誘導(dǎo)細(xì)胞色素c從線粒體脫離，脫落的細(xì)胞色素c能夠與凋亡蛋白酶活化因子-1（Apaf-1）結(jié)合形成凋亡小體，進(jìn)而激活Caspase-9，最后由Caspase-9激活相應(yīng)的下游Caspase執(zhí)行酶而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

目前，普遍的研究認(rèn)為:被稱為“死亡蛋白酶”的Caspase-3是細(xì)胞凋亡的最終執(zhí)行酶，它是細(xì)胞凋亡Caspase級聯(lián)瀑布反應(yīng)的必經(jīng)之路。當(dāng)由多種刺激因素綜合所誘導(dǎo)啟動(dòng)的信號激活Caspase-3后，存在于胞核、胞質(zhì)及細(xì)胞骨架的一些重要蛋白質(zhì)會(huì)因?yàn)镃aspase-3的存在而降解失活，最終導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。因此，可以說Caspase-3是多細(xì)胞生物細(xì)胞凋亡中的關(guān)鍵酶[19]。

4 內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與Caspase

雖然由各種外界不同的刺激所誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡途徑和分子生物學(xué)機(jī)制各不相同，但是內(nèi)皮細(xì)胞凋亡信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)也存在著一定的共同點(diǎn)。

（1）凋亡觸發(fā)期:當(dāng)促凋亡因素與細(xì)胞膜接觸時(shí)，促死亡分子與其相應(yīng)的受體結(jié)合形成復(fù)合體并激發(fā)相關(guān)死亡途徑，如:[（Fas-Fasl）]-FADD 途徑或{[（TNF-TNFR）-TRADD]}-FADD 途徑。胞漿死亡信號銜接蛋白（FADD蛋白）的N端的死亡效應(yīng)功能區(qū)（DED（與具有同源胞內(nèi)功能區(qū)的Caspase-8前體（procaspase-8（的N端結(jié)合，并誘導(dǎo)Caspase-8前體自身裂解而被激活。雖然Caspase-8能夠直接激活Caspase-3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但主要的誘導(dǎo)凋亡方式是通過線粒體途徑進(jìn)行信號放大，最終激活Caspase-3導(dǎo)致凋亡的發(fā)生[20]。

（2）凋亡決定期:bcl/Bax在正常狀態(tài)下，附著在線粒體膜上通過形成異源二聚體而抑制細(xì)胞凋亡，但當(dāng)?shù)蛲鲂盘栕銐驈?qiáng)，就會(huì)引起此二聚體結(jié)構(gòu)的解離，從二聚體中解離出來的Bax具有通道特性，能增加線粒體膜通透性，導(dǎo)致細(xì)胞色素c和Smac/DIABLO的釋放，細(xì)胞色素c能夠依次激活存在于胞漿中的凋亡蛋白酶活化因子-1（Apaf-1）和Caspase-9 前體（procaspase-9）[21]，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。所以在細(xì)胞凋亡的發(fā)生和發(fā)展過程中，bcl/Bax異源二聚體的形成和解離起到關(guān)鍵作用。

（3）凋亡效應(yīng)期:此階段主要是由Caspase-9激活Caspase級聯(lián)瀑布反應(yīng)。在凋亡過程中，下游執(zhí)行酶Caspase-3起關(guān)鍵作用，它不僅可以直接激活核酸內(nèi)切酶（DNase），而且還可以通過滅活內(nèi)皮細(xì)胞凋亡酶抑制劑 ICAD （inhibitor of caspase activate DNase） 的活性而解除 ICAD對 CAD（caspase activate DNase）的抑制作用而激活DNase。Dnase可以切割DNA的核小體形成具有典型凋亡特征性的DNA “梯形帶”，此外Dnase還能夠裂解細(xì)胞核中PARP（聚腺苷二磷酸核糖多聚酶）、細(xì)胞骨架蛋白、核纖層等DNA修復(fù)蛋白，進(jìn)而最終導(dǎo)致凋亡形態(tài)的改變。

（4）凋亡終末期:雖然細(xì)胞周圍的吞噬細(xì)胞能夠識別和吞噬凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞，但由于無法充分清除凋亡的內(nèi)皮細(xì)胞，因此凋亡過程中會(huì)伴有繼發(fā)性壞死的發(fā)生[22]。

5 TFA與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡

目前，在內(nèi)皮細(xì)胞和其他細(xì)胞系都有報(bào)道FFA（游離脂肪酸）具有促凋亡效應(yīng)。Martina B等發(fā)現(xiàn)花生四烯酸（AA）能夠通過影響磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinases，PI3K）的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和黏附[23]。Salvatore P等發(fā)現(xiàn)高濃度的游離脂肪酸（FFA）能夠通過抑制Akt的磷酸化來誘導(dǎo)HUVEC凋亡[24]。Michaela A等發(fā)現(xiàn)FFA誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡需要Caspase酶的激活[25]。Piro等發(fā)現(xiàn)FFA通過激活Caspase-9來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[26]。Harvey等發(fā)現(xiàn)長鏈飽和脂肪酸能夠誘導(dǎo)人動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[27]。Sweeney等發(fā)現(xiàn)多不飽和脂肪酸能夠誘導(dǎo)新生單核細(xì)胞凋亡[28]。Jiang等發(fā)現(xiàn)棕櫚酸能夠通過p38和JNK通路誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[29]。Kong等發(fā)現(xiàn)γ-亞油酸能夠通過激活Caspase-3而誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞凋亡[30]。Piro等發(fā)現(xiàn)FFA誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與Caspase-9的激活有關(guān)[31]。關(guān)于反式脂肪酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究報(bào)道很少。Kondoh等在9tC18∶1誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞凋亡進(jìn)程中，檢測到有Caspase-3和-8的激活，而Caspase-9的活性則沒有變化[31]。Downar等首次報(bào)道了9tC18∶1具有誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用[32]。在TFA誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡過程中，Caspase首先在哪兒被激活?在細(xì)胞凋亡過程中有多少Caspase酶被激活?TFA通過哪條通路誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡?各種Caspase酶之間是如何協(xié)作的?TFA誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的具體凋亡機(jī)制和相關(guān)信號通路目前仍未見報(bào)道。

6 TFA與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

半胱天冬蛋白家族的Caspase在凋亡過程中起著關(guān)鍵作用，細(xì)胞凋亡是Caspase不可逆有限水解底物的級聯(lián)放大反應(yīng)過程。細(xì)胞凋亡的主要途徑包括:（1）外界刺激因子通過胞外信號激活細(xì)胞內(nèi)的Caspase級聯(lián)反應(yīng)；（2）線粒體損傷后，釋放凋亡酶激活因子激活Caspase引發(fā)級聯(lián)反應(yīng)。這些被激活的Caspase能夠降解細(xì)胞內(nèi)的重要蛋白質(zhì)，最終誘發(fā)細(xì)胞凋亡。

死亡受體通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程如下:當(dāng)細(xì)胞受外界凋亡誘導(dǎo)因素誘導(dǎo)時(shí)，腫瘤壞死因子受體（TNFR）家族成員與相應(yīng)的配體（TNF家族）結(jié)合時(shí)，會(huì)導(dǎo)致受體生成三聚體，然后受體的胞漿部分與接頭蛋白 （adapter protein）Fas-相關(guān)死亡蛋白域（fas-associated protein with death domain，F(xiàn)ADD）和Caspase-8 前體（procaspase-8）發(fā)生聚集，Caspase-8前體通過自身或相互之間的切割從而使Caspase-8激活。當(dāng)Caspases-3被Caspase-8激活后，能夠接著水解 ICAD （Inhibited Caspase Activated Dnase）從而活化 CAD （Caspase Activated Dnase），最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[33]。線粒體信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路行程如下:外界的一些凋亡刺激因素能夠使線粒體膜的通透性轉(zhuǎn)換孔（permeability transition pore，PTP）打開，使線粒體膜電位發(fā)生變化，促使線粒體釋放凋亡啟動(dòng)因子（Cyto-C，AIF，APaf-l）、Smac/DIABLO 和 Caspase-3前體（procaspase-3）進(jìn)入胞漿[34-37]，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

死亡受體通路在激活Caspase-8的同時(shí)，也可以通過激活Bcl-2家族的促凋亡因子Bid（binding interface database）而激活線粒體通路。正常狀態(tài)下，Bid存在于胞漿內(nèi)是沒有活性的，但當(dāng)被Caspase-8激活后，Bid會(huì)被切割成一種截短的Bid（truncatedBid，tBid），tBid 能夠進(jìn)入線粒體并破壞線粒體膜的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞色素c等釋放入胞漿，進(jìn)一步激活Caspase-9，從而強(qiáng)化了Caspases級聯(lián)瀑布反應(yīng)[38-41]。

Caspase的激活在細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中已經(jīng)被證明是必不可少的[42]。在許多生物系統(tǒng)中，當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí)，無論是死亡受體通路還是線粒體通路最終都會(huì)匯集并激活Caspase-3，然后Caspase-3激活脫氧核糖核酸酶，最終導(dǎo)致核凋亡[43]。Caspase-3在細(xì)胞凋亡過程中起到至關(guān)重要的作用，它被認(rèn)為是凋亡的“最終執(zhí)行者”[44-45]。Downar等報(bào)道了反油酸（9tC18∶1）和反亞油酸能夠通過激活Caspase-3誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[46]。Kondoh等發(fā)現(xiàn)9tC18∶1能夠通過激活Caspase-3、Caspase-8來誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡[47]?？梢奣FA在不同的細(xì)胞系內(nèi)能夠誘導(dǎo)不同的Caspase的激活。Bid蛋白是Bcl-2家族中促凋亡類的蛋白質(zhì)。當(dāng)細(xì)胞暴露于外界促凋亡因子如腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）等環(huán)境時(shí)，被激活的上游啟動(dòng)酶Caspase-8將Bid蛋白切割并轉(zhuǎn)化為tBid，隨后tBid的C-端片段進(jìn)入線粒體，誘發(fā)細(xì)胞色素c和Smac/DIABLO的釋放，最終引起細(xì)胞凋亡[48-49]。有研究報(bào)道，Smac/DIABLO通過抑制IAP（細(xì)胞凋亡抑制因子）家族蛋白的表達(dá)來促進(jìn)Caspase的激活[50-51]。Qiu Bin研究發(fā)現(xiàn)不同飽和度TFA（9tC18∶1 和 9t，12tC18∶2）首先激活死亡受體通路的上游酶Caspase-8，然后通過Bid蛋白激活線粒體通路，最終激活Caspase-9和激活Caspase-3[52]。另外，還有很多報(bào)道關(guān)于其他的刺激物通過不同通路激活 Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Haefen等證明，在紫杉醇誘導(dǎo)BJAB（B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞的凋亡過程中，Caspase-8做為線粒體通路的下游放大器起著重要的作用[53]。Lim等報(bào)道，在LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中，通過抑制細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）和絲裂原活化蛋白激酶 p38（p38 MAPK通路），從而抑制Caspases-8，Caspases-9，Caspases-3 的激活[54]。

Martina B等發(fā)現(xiàn)，花生四烯酸（AA（能夠通過影響磷脂酰肌醇-3-激酶 （phosphatidylinositol-3-kinases，PI3K）的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和黏附[17]。Salvatore P等發(fā)現(xiàn)，高濃度的游離脂肪酸（FFA）能夠通過抑制Akt的磷酸化來誘導(dǎo)HUVEC凋亡[18]。Michaela A等發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)FA誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡需要Caspase酶的激活[19]。Piro等發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)FA通過激活Caspase-9來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[20]。Kondoh等發(fā)現(xiàn)9tC18∶1能夠通過激活 Caspase-9和 Caspase-3來誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡[21]。關(guān)于反式脂肪酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究報(bào)道較少，僅Zapolska報(bào)道了TFA能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，但具體的凋亡機(jī)制沒有報(bào)道[22]。

[1]張恒濤，肖韋華，王旭峰，等．食品中反式脂肪酸的研究現(xiàn)狀及其進(jìn)展[J].肉類研究，2006（4）:28-32.ZHANG Hen-tao，XIAO Wei-hua，WANG Xu-feng，et al.Review on studies of trans fatty acids in food stuffs[J].Meat Study，2006（4）:28-32.（in Chinese）

[2]Frédéric D，Maureen D W，F(xiàn)lorent J，et al.Authenticity of milk fat by fast analysis of triacylglycerols:Application to the detection of partially hydrogenated vegetable oils[J].J Chromatogr A，2006，1131:227-234.

[3]Diefenbach R，Heipieper H J，Keweloh H.The conversion of cis into trans unsaturated fatty acids in Pseudomonas putita P8:evidence for a role in the regulation of membrane fluidity[J].Applied Microbiology Biotechnology，1992，38（3）:382-387.

[4]Baer D J，Judd J T，Clevidence B A，et al.Dietary fatty acids affect plasma markers of inflammation in healthy men fed controlled diets:a randomized crossover study[J].Am J Clin Nutr，2004，79:969-973.

[5]de Roos N M，Bots M L，Katan M B.Replacement of dietary saturated fatty acids by trans fatty acids lowers serum HDL cholesterol and impairs endothelial function in healthy men and women[J].Arterioscle Thromb Vasc Biol，2001，21:1233-1237.

[6]Lopez-Garcia E，Schulze M B，Meigs J B，et al.Consumption of trans fatty acids is related to plasma biomarkers of inflammation and endothelial dysfunction[J].Nutr，2005，135:562-566.

[7]Stender S，Dyerberg J.Influence of trans fatty acids on health[J].Ann Nutr Metab，2004，48（2）:61-66.

[8]孔建強(qiáng)，趙琦.細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào)，2002（3）:15-18.KONG Jian-qiang，ZHAO Qi.Advance in mechanism of apoptosis[J].Biotechnology Bull Etin，2002（3）:15-18.（in Chinese）

[9]鄭德先.細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J].中華病理學(xué)雜志，1996，25:50-53.ZHENG De-xian.Advance of Apoptosis[J].Chin J Pathol，1996，25:50-53.（in Chinese）

[10]Haunsteter A，Lzuon S.Apoptosis:basic mechanisms and implication for cardiovascular disease[J].Circ Res，1998，82:1111-1120.

[11]Hasdai D，Saigiogi G，Spagnoli L G，et al.Coronary artery apoptosis in experimental hypercholesterolemia[J].Atherosclerosis，1999，42:317-325.

[12]Tricot O，Mallat Z，Heymes C et al.Relalion between endolhelial cell apoptosis and blood flow direction in human atherosclerotic plaques[J].Circulation，2000，101:2450-2453.

[13]Six D A，Dennis E A.The expanding superafmily of phospholipase A（2） enzymes:classification and characterization[J].Biochim Biophys Acta，2000，1488（l-2）:l-19.

[14]Zeng H S，Liu Z X，Liu X C.Inhibitory effects of Radix ginseng rurbra O12 cadriomyocyte apoptosis induced by ischemia and reperfusion in rarts[J].2004，8（9）:1784-1786.

[15]Rossig L，Dimmeler S，Zeiher A M.Apoptosis in the vaseular wall and Atheroselerosis[J].Basic Research Cardiology，2001，96:11-22.

[16]Mccarthy N J，Bennett M R.The regulation of vascular smooth muscle cell apoptosis[J].Cardiovascular Researh，2000，45:747-755.

[17]Mallat Z，Tedgui A.Apoptosis in the vasculuatre:mechnathisms and functional importance[J].Bitish J Pharmacology，2000，130:947-962.

[18]Koekx M M，Krmapen M W.The role of apoptosis in vascular disease[J].J Pathology，2000，190（3）:267-280.

[19]Ashkenazi A，Dixit V M.Death receptors:signaling and modulation[J].Science，1998，281:1305-1311.

[20]Adams J M，Cory S.The bcl-2 protein family:arbiters of cell survival[J].Science，1998，281:1322-1326.

[21]Dim meler S，Breitschopf K，Haendeler J，et al.Dephos-phorylation targets bcl-2 for ubiquitin-dependent degradation:a link between the apoptosome and the protea-some pathway[J].Exp Med，1999，189:1815-1826.

[22]Adok V A，Bratton D L，F(xiàn)rasch S C，et al.The role of phosphatidylserine in recognition of apoptotic cells by phagocytes[J].Cell Death and Diferentiation，1998（5）:551-562.

[23]Martina B S，Alice W，Tobias F，et al.Fatty acids differentially influence phosphatidylinositol 3-kinase signal transduction in endothelial cells:Impact on adhesion and apoptosis[J].Atherosclerosis，2008，197:630-637.

[24]Salvatore P，Daniela S，Luisa S，et al.Direct apoptotic effects of free fatty acids on human endothelial cells[J].Nutrition，Metabolism&Cardiovascular Diseases，2008，18:96-104.

[25]Michaela A，Andrea L，Veronika S，et al.Different mechanisms of saturated versus polyunsaturated FFA-induced apoptosis in human endothelial cells[J].Journal of Lipid Research，2008，49:2627-2640.

[26]Piro S，Spampinato D，Spadaro L，et al.Direct apoptotic effects of free fatty acids on human endothelial cells[J].Nutr Metab Cardiovas，2008，18:96-104.

[27]Harvey K A，Walker C L，Pavlin T M，et al.Long-chain saturated fatty acids induce pro-inflammatory responses and impact endothelial cell growth[J].Clin Nutr，2009，29:1-9.

[28]Sweeney B，Puri P，Reen D J.Induction and modulation of apoptosis in neonatal monocytes by polyunsaturated fatty acids[J].Journal of Pediatric Surgery，2007，42:620-628.

[29]Jiang H，Liang C，Liu X，et al.Palmitic acid promotes endothelial progenitor cells apoptosis via p38 and JNK mitogen-activated protein kinase pathways[J].Atherosclerosis，2010，210:71-77.

[30]Kong X，Ge H，Hou L，et al.Induction of apoptosis in K562/ADM cells by gamma-linolenic acid involves lipid peroxidation and activation of caspase-3[J].Chemico-Biological Interactions，2006，162:140-148.

[31]Kondoh Y，Kawada T，Urade R.Activation of caspase 3 in HepG2 cells by elaidic acid （t18:1）[J].Biochim Biophys Acta，2007，1771:500-505.

[32]Downar D Z，Kosmider A，Naruszewicz M.Trans fatty acids induce apoptosis in human endothelial cells[J].Physiol Pharmacol，2005，56:611-625.

[33]Dohi T，Altieri D C.Mitochondrial dynamics of survivin and four dimensional control of tumor cell apoptosis[J].Cell Cycle，2005，4（l）:21-23.

[34]Gerl R，Vaux D L.Apoptosis in the development and treatment of cancer[J].Careinogenesis，2005，26（2）:263-270.

[35]van Gurp M，F(xiàn)estjens N，van Loo G，et al.Mitochondria intermembrane proteins in cell death[J].Biochem BioPhys Res Commun，2003，304（3）:487-497.

[36]Deniaud A，Hoebeke J，Briand J P，et al.Peptido-targeting of the mitochondrial transition pore complex for therapeutic apoptosis induction[J].Cur Pharm Des，2006，12（34）:4501-4511.

[37]Kroemer G，Galluzzi L，Brenner C.Mitochondrial membrane permeabilization in cell death[J].Physiol Rev，2007，87（l）:99-163.

[38]Konig H G，Rehm M，Gudorf D，et al.Full length Bid is sufficient to induce apoptosis of cultured rat hippocampal neurons[J].BMC Cell Biol，2007（8）:7-15.

[39]Veresov V G，Davidovskii A I.Monte Carlo simulations of tBid association with the mitochondrial outer membrane[J].Eur Bio Phys J，2007，37（1）:19-33.

[40]Du Pasquier D，Chesneau A，Yrnlahi-Ouazzani Q，et al.tBid mediated activation of the mitochondrial death pathway leads to genetic ablation of the lens in Xenopus laevis[J].Genesis，2007，45（1）:1-10.

[41]Tyurin V A，Tyurina Y Y，Osipov A N，et al.Interactions of cardiolipin and lyso-cardiolipins with cytochrome c and tBid:conflict or assistance in apoptosis[J].Cell Death Differ，2007，14（4）:572-575.

[42]Sylte M J，Leite F P，Kuckleburg C J，et al.Caspase activation during Haemophilus somnus lipooligosaccharide-mediated apoptosis of bovine endothelial cells[J].J Microb Pathog，2003，35:285-291.

[43]Ghobrial I M，Witzig T E，Adjei A A.Targeting apoptosis pathways in cancer therapy[J].CA Cancer J Clin，2005，55:178-194.

[44]Dai Z J，Gao J，Ji Z Z，et al.Matrine induces apoptosis in gastric carcinoma cells via alteration of Fas/FasL and activation of caspase-3[J].J Ethnopharmacol，2009，123:91-97.

[45]Xue L Y，Chiu S M，Oleinick N L.Photodynamic therapy-induced death of MCF-7 human breast cancer cells:a role for caspase-3 in the late steps of apoptosis but not for the critical hethal event[J].Exp Cell Res，2001，263:145-155.

[46]Zapolska D，Kosmider D，Naruszewicz M.Trans fatty acids induce apoptosis in human endothelial cells[J].Physiol Pharmacol，2005，56:611-625.

[47]Kondoh Y，Kawada T，Urade R.Activation of caspase 3 in HepG2 cells by elaidic acid （t18:1）[J].Biochim Biophys Acta，2007，1771:500-513.

[48]Yin X M，Wang K，Gross A，et al.Bid-deficient mice are resistant to Fas-induced hepatocellular apoptosis[J].Nature，1999，400:886-891.

[49]Li S C，Zhao Y ，He X，et al.Relief of extrinsic pathway inhibition by the Bid-dependent mitochondrial release of Smac in Fasmediated hepatocyte apoptosis[J].J Biol Chem，2002，277:26912-26920.

[50]Li H，Zhu H，Xu C J，et al.Cleavage of BID by caspase-8 mediates the mitochondrial damage in the fas pathway of apoptosis[J].Cell，1998，94:491-501.

[51]Luo Xu，Budihardjo I，Zou H，et al.Bid，a Bcl2 interacting protein，mediates cytochrome c release from mitochondria in response to activation of cell surface death receptors[J].Cell，1998，94:481-490.

[52]QIU Bin，HU Jiang-ning，LIU Rong，et al.The caspase pathway of elaidic acid （9t-C18:1）-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells[J].Cell biology international，2012，36:255-260.

[53]Haefen C V，Wieder T，Essmann F，et al.Paclitaxel-induced apoptosis in BJAB cells proceeds via a death receptor-independent，caspases-3/-8-driven mitochondrial amplification loop[J].Oncogene，2003，22:2236-2247.

[54]Lim J H，Woo J S，Shin Y W.Cilostazol protects endothelial cells against lipopolysaccharide-induced apoptosis through ERK1/2-and p38 MAPK-dependent pathways[J].Kor J Intern Med，2009，24:113-122.