紅藤方對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者血清基質(zhì)金屬蛋白水解酶-9、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1水平的影響※

黃彩梅 王勤潔 周 強(qiáng) 張 潔

(上海市普陀區(qū)婦嬰保健院中醫(yī)科，上海 200060)

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見(jiàn)和多發(fā)的婦科疾病，其發(fā)病率在育齡期為10% ～15%，且呈上升趨勢(shì)［1］。研究發(fā)現(xiàn)，異位子宮內(nèi)膜對(duì)卵巢等盆腔器官和腹膜的黏附、侵蝕和分化等類似腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。異位的子宮內(nèi)膜黏附于腹膜及其他結(jié)締組織后進(jìn)一步種植、生長(zhǎng)需要腹膜的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解，而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是降解ECM成分的重要酶類，金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)是MMPs的特異抑制劑［2］。研究表明，血清基質(zhì)金屬蛋白水解酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)是與ECM的生物學(xué)功能密切相關(guān)的蛋白質(zhì)分子，其在子宮內(nèi)膜中ECM的破壞和降解過(guò)程中具有十分重要的作用，促使子宮內(nèi)膜異位癥的形成［3］。本研究通過(guò)觀察紅藤方對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者血清MMP-9、TIMP-1的影響，以探討其可能的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009-06—2012-12我院中醫(yī)婦科門(mén)診患者73例，隨機(jī)分為2組。治療組37例，年齡21～48歲，平均(31.6±6.8)歲;病程 3周 ～8年，平均(12.8±2.9)個(gè)月。對(duì)照組36例，年齡25～46歲，平均(32.9±6.3)歲;病程3周 ～10年，平均(15.2±4.5)個(gè)月。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。同時(shí)選擇正常組40例，年齡20～41歲，平均(29.5±5.1)歲。3組受檢前3個(gè)月內(nèi)均未接受甾體類激素治療。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科專業(yè)委員會(huì)第三屆學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的“子宮內(nèi)膜異位癥、妊娠高血壓綜合征及女性不孕癥的中西醫(yī)結(jié)合診療標(biāo)準(zhǔn)”［4］。①漸進(jìn)性痛經(jīng);②周期性的直腸刺激癥狀進(jìn)行性加劇;③經(jīng)期少腹、腰骶部不適，進(jìn)行性加重;④后穹窿、子宮骶骨韌帶或子宮峽部觸痛性結(jié)節(jié);⑤盆腔包塊;⑥月經(jīng)前后上述包塊有明顯大小之變化。凡有以上①、②、③ 之一和④、⑤、⑥之一，兩點(diǎn)共同存在時(shí)即可確診。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 予紅藤方。藥物組成:大血藤30 g，生蒲黃12 g，丹參12 g，牡蠣15 g。上方頭煎加水300 mL，武火煮開(kāi)后用文火煎30 min，取汁150 mL，二煎加水200 mL，煎30 min后取汁150 mL，二煎相混。日1劑，分早、晚2次服。經(jīng)期停服，連服3個(gè)月為1個(gè)療程。

1.3.2 對(duì)照組 第1次于月經(jīng)第1 d開(kāi)始口服孕三烯酮膠囊(北京紫竹藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H19980020，規(guī)格2.5 mg/粒)1粒，3 d后服用第2次，以后每周相同時(shí)間服用，每周2粒，連續(xù)服用3個(gè)月為1個(gè)療程。

1.3.3 正常組 無(wú)繼發(fā)性痛經(jīng)、性交痛及不孕，查體結(jié)果(包括體檢、盆腔B超檢查)均排除盆腔腫瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的可能。進(jìn)行抽血檢驗(yàn)。

1.4 檢測(cè)方法 治療組、對(duì)照組治療前后及正常組分別空腹抽取靜脈血3～5 mL，離心收集血清，-20℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清MMP-9、TIMP-1，ELISA試劑盒由上海博邁生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

各組治療前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比較見(jiàn)表1。

表1 各組治療前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比較±s

表1 各組治療前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比較±s

與正常組比較，*P＜0.05;與本組治療前比較，△P＜0.05;與對(duì)照組治療后比較，#P＜0.05

治療組(n=37)治療前 治療后 治療前 治療后 正常組(n=40)對(duì)照組(n=36)MMP-9(ng/mL) 345.20±121.16* 268.41±81.43＊△ 332.50±89.26* 303.19±80.48*203.99±48.13 TIMP-1(ng/mL) 277.66±85.55* 378.02±93.02 264.91±80.94* 278.69±67.89* 561.26±121.48 MMP-9/TIMP-1 1.36±0.63* 0.75±0.2＊△# 1.38±0.56* 1.17±0.45*0.39±0.14

由表1可見(jiàn)，治療組、對(duì)照組治療前血清MMP-9高于正常組(P＜0.05)，血清TIMP-1低于正常組(P＜0.05)，MMP-9/TIMP-1水平低于正常組(P＜0.05)。治療組、對(duì)照組治療后血清MMP-9均降低與正常組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);治療后對(duì)照組與正常組血清TIMP-1比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而治療組與正常組血清TIMP-1比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后治療組、對(duì)照組血清MMP-9/TIMP-1與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但治療后治療組更接近于正常組，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療組治療前后MMP-9比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療組治療前后MMP-9/TIMP-1比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對(duì)照組治療前后血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是常見(jiàn)的婦科疾病之一，其發(fā)病機(jī)制不清，最為推崇的是經(jīng)血逆流、內(nèi)膜種植學(xué)說(shuō)及機(jī)體免疫應(yīng)答系統(tǒng)異常理論。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，逆流到腹腔的子宮內(nèi)膜可以在腹腔內(nèi)種植、生長(zhǎng)。經(jīng)血逆流在生育期婦女非常普遍，發(fā)生率可高達(dá)90%，而子宮內(nèi)膜異位癥的患病率僅占20% 左右［5］。子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生一般需要經(jīng)歷3個(gè)關(guān)鍵步驟，即內(nèi)膜細(xì)胞的黏附、侵襲和局部血管形成。

異位內(nèi)膜的進(jìn)展和生長(zhǎng)中關(guān)鍵的一步是ECM的降解破壞。許多酶類可以降解破壞ECM中的大分子蛋白，但MMPs的這種能力最強(qiáng)，是最重要的一種。其中MMP-9作用底物為基膜的主成分Ⅳ型膠原，因而它在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，這種作用在子宮內(nèi)膜異位癥的研究中已經(jīng)得到證實(shí)。大量研究表明，MMP-9蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥有關(guān)系，異位內(nèi)膜的MMP-9表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜，且MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病進(jìn)程中可能起重要作用，它促進(jìn)了異位組織細(xì)胞外基質(zhì)的降解和血管的生成，這也是子宮內(nèi)膜異位癥疾病進(jìn)展的關(guān)鍵所在［6-7］。研究顯示，MMPs存在于子宮內(nèi)膜異位癥的病灶中，可能使初生的異位病灶侵入腹膜和其他結(jié)締組織中，其中MMP-9作用最強(qiáng)，被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜異位癥浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的重要細(xì)胞因子之一［6］。

近年大量研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)天然存在的TIMPs可抑制MMPs活性。TIMP-1是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的MMPs的天然抑制劑，是體內(nèi)細(xì)胞分泌的一種蛋白酶抑制劑，能與MMP-9形成1∶1復(fù)合體。TIMP-1能抑制有活性或無(wú)活性的MMP-9，可產(chǎn)生抑制新生血管形成作用［8］。Lou YH等［9］運(yùn)用免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥組異位癥內(nèi)膜35例、內(nèi)異癥組在位內(nèi)膜22例及正常組在位內(nèi)膜28例，結(jié)果顯示與正常組相比TIMP-1在子宮內(nèi)膜組織中均有顯著下降。因此，推測(cè)TIMP-1在子宮內(nèi)膜組織中的下降，特別是正常內(nèi)膜組織中的下降是導(dǎo)致內(nèi)異癥有強(qiáng)烈侵襲性的重要原因。Gilabert等［10］研究也證明子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中TIMP-1表達(dá)明顯下降。研究還發(fā)現(xiàn)MMPs和其抑制物之間的平衡非常重要，MMPs、TIMPs不僅是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的酶類，而且對(duì)細(xì)胞、血管和組織具有復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用，MMPs/TIMPs比值是維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和細(xì)胞外基質(zhì)完整性的關(guān)鍵因素。近來(lái)研究表明，MMPs和TIMPs在育齡期婦女子宮內(nèi)膜周期性的生長(zhǎng)、分化和崩潰過(guò)程中有重要的作用，也參與了子宮內(nèi)膜異位癥的病理過(guò)程［11-12］。有研究顯示，維持腹腔內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定并非單純依賴MMPs，而是依賴MMPs/TIMPs比值的穩(wěn)定，子宮內(nèi)膜異位癥患者即使無(wú)MMPs表達(dá)升高，但已出現(xiàn)MMPs/TIMPs比例失調(diào)，導(dǎo)致ECM降解、基底膜消失，新生血管生成，促使異位病灶生成、發(fā)展。

因此，眾多研究表明子宮內(nèi)膜異位癥患者異位組織中MMP-9高表達(dá)，TIMP-1水平偏低，MMP-9/TIMP-1比值失調(diào)。

中醫(yī)古代文獻(xiàn)中無(wú)“子宮內(nèi)膜異位癥”病名，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，可歸屬于中醫(yī)學(xué)痛經(jīng)、月經(jīng)過(guò)多、癥瘕、不孕等范疇。瘀血內(nèi)阻已經(jīng)成為本病公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制。1990年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科專業(yè)委員會(huì)第三屆學(xué)術(shù)會(huì)議將子宮內(nèi)膜異位癥中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)修訂為血瘀證。主要證型有:氣滯血瘀證、寒凝血瘀證、痰濕血瘀證、熱郁血瘀證、腎虛血瘀證等［13］，治療應(yīng)以活血化瘀為綱，兼顧補(bǔ)腎、疏肝、健脾等法。大量臨床資料表明，應(yīng)用該治法療效顯著［14-16］。

紅藤方以大血藤為君藥，其性味苦平，歸大腸經(jīng)，長(zhǎng)于清熱解毒，消癰止痛，又有活血散瘀止痛的作用;丹參、生蒲黃為臣藥，丹參性味苦微寒，無(wú)毒，活血化瘀，涼血消癥，生蒲黃味甘，性平，活血祛瘀;牡蠣為佐藥，牡蠣性味咸平，微寒，無(wú)毒，化痰軟堅(jiān)，清熱除濕。全方可清熱活血，化瘀止痛，消除盆腔粘連［17］。研究表明，說(shuō)明紅藤方是臨床用于治療子宮內(nèi)膜異位癥的有效方劑［18］。動(dòng)物研究證實(shí)，紅藤方能顯著抑制大鼠在位及異位內(nèi)膜組織中MMP-2和MMP-9的活性，從而降低了異位內(nèi)膜的種植、侵襲能力，進(jìn)一步闡明了紅藤方活血化瘀藥物能夠通過(guò)抑制異位內(nèi)膜中MMPs的表達(dá)來(lái)控制子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展［19］。

觀察結(jié)果表明，治療組、對(duì)照組治療前MMP-9、MMP-9/TIMP-1均高于正常組(P＜0.05)，TIMP-1均低于正常組(P＜0.05);治療組治療后 MMP-9、MMP-9/TIMP-1均低于本組治療前(P＜0.05);治療組治療后MMP-9/TIMP-1低于對(duì)照組治療后(P＜0.05)。說(shuō)明紅藤方是通過(guò)提高患者血清 TIMP-1水平，降低血清MMP-9的作用，改變了MMP-9/TIMP-1比值，從而抑制了異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)，這可能是紅藤方治療子宮內(nèi)膜異位癥的作用機(jī)制之一，其深入的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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