視黃醇結(jié)合蛋白測(cè)定及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展

王清云，陶黎嵐

視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol blinding protein，RBP)為血漿中的一種小分子蛋白質(zhì)，是血中維生素A 的特異轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，1968年由Kanai 等首次分離，1971 年P(guān)eterson 和Beeggard 從尿中將其分離。RBP 具有從肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇至周圍組織的功能，在體內(nèi)維生素A 的代謝中發(fā)揮重要作用，近年來(lái)，視黃醇結(jié)合蛋白檢測(cè)及臨床應(yīng)用日益受到關(guān)注，檢測(cè)血和尿中視黃醇結(jié)合蛋白，對(duì)腎臟、肝臟及營(yíng)養(yǎng)狀況等疾病的診斷和治療有著重要意義。本文對(duì)視黃醇結(jié)合蛋白的理化特性、檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用進(jìn)行闡述。

1 視黃醇結(jié)合蛋白的理化特性和生理功能

RBP 分子是有一條183 個(gè)氨基酸殘基組成的多肽鏈及少部分糖類組成，不含中性糖和氨基己糖。分子量為21 000，沉降系數(shù)為2.13～2.3，等電點(diǎn)為pH4.4～4.8，半衰期為3～12 h，合成率為每天每公斤體重5 mg。RBP 經(jīng)硫酸乙基葡聚糖層析得到A、B 2 個(gè)峰，二乙胺基乙醇葡聚糖層析A、B 2 部分后可獲得A1、A2 和B1、B2 4 部分。免疫擴(kuò)散法顯示RBP 的A1、A2 和B1、B2 4 個(gè)組分抗原性是一致的。RBP 在肝臟合成，受到全反式視黃醇刺激后分泌出來(lái)，釋放入血后與視黃醇、甲狀腺素運(yùn)載蛋白的比例以1:1:1 的比例形成三元復(fù)合物［1-2］。分泌入血的RBP 量受到視黃醇的嚴(yán)格調(diào)控。RBP 受體在不同組織細(xì)胞的分布變化很大，與RBP 結(jié)合力也不一致。當(dāng)RBP 與細(xì)胞表面的RBP 受體結(jié)合時(shí)，視黃醇進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，復(fù)合物解體，游離的RBP 從腎小球?yàn)V出，其中絕大部分被近端腎小管上皮細(xì)胞重吸收并被分解，供組織利用，僅有少量從尿中排除，在肝、脾、腸分布的受體有特殊的結(jié)合力，在視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、胎盤(pán)、腎臟、骨髓其受體有較高的結(jié)合力。不同組織RBP 受體分布于維生素A 在在不同組織的功能、代謝相一致。

2 視黃醇結(jié)合蛋白的檢測(cè)方法

測(cè)定血、尿中RBP 的方法較多，有放射免疫擴(kuò)散、免疫透射比濁法、免疫電泳、酶聯(lián)免疫吸附、放射免疫分析等。靈敏度高、實(shí)用性強(qiáng)的有放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附。現(xiàn)在應(yīng)用于臨床常采用視黃醇結(jié)合蛋白免疫透射比濁法。國(guó)內(nèi)試劑廠家已生產(chǎn)RBP 試劑盒，采用國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最多的免疫透射比濁的測(cè)定原理，即利用RBP 抗原和特異性抗體(羊抗人RBP 抗血清)相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生渾濁，其濁度高低即透光度減少，吸光度增加反應(yīng)樣品中RBP 的含量，可有校正品所作的劑量－相應(yīng)曲線算出。血清RBP 參考值25～70 mg/L，尿液為0.7 mg/L 以下。

3 視黃醇結(jié)合蛋白的臨床應(yīng)用

3.1 腎臟疾病中的應(yīng)用 視黃醇結(jié)合蛋白是肝臟合成的蛋白質(zhì)，主要在腎臟中進(jìn)行代謝。近年來(lái)，研究表明RBP 的排出量可作為腎小管損傷的敏感標(biāo)志物，在原發(fā)性腎小管疾病、腎病綜合癥、糖尿病腎病及狼瘡性腎炎等的早期診斷及療效判斷均有重要意義。賴子飛［3］應(yīng)用免疫透射比濁法對(duì)對(duì)照組和不同腎臟病組進(jìn)行尿液視黃醇結(jié)合蛋白測(cè)定，結(jié)果不同。各腎臟病組于對(duì)照組差異較大，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明尿RBP 測(cè)定能反映出腎小管的損害程度，是檢測(cè)腎小管功能損害的敏感指標(biāo)。蔣最明等［4］檢測(cè)了65 例腎炎和繼發(fā)性腎病患者的血RBP、尿素氮、肌酐含量，以探討其在腎病早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果與對(duì)照組比較，腎病患者各組血清中，RBP、尿素氮、肌酐含量均有不同程度的升高，其中RBP 含量升高最為顯著。結(jié)果表明，血清RBP 陽(yáng)性率明顯高于尿素氮、肌酐，能夠更好的反映腎臟受損情況，血清RBP 水平反應(yīng)腎小球的濾過(guò)功能，可以作為腎病早期診斷的較敏感指標(biāo)。腎臟是調(diào)節(jié)血壓的重要器官，也是高血壓常會(huì)累及的臟器。徐慶等［5-6］采用全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)147 例原發(fā)性高血壓組患者及30 例健康對(duì)照組血清胱氨酸蛋白酶抑制劑C(CysC)和RBP 以及尿素氮、肌酐的含量，來(lái)探討CysC、RBP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷原發(fā)性高血壓患者早期腎臟損害的臨床價(jià)值。結(jié)果顯示高血壓組患者血清CysC、RBP 水平明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異。血尿素氮、肌酐水平與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。本研究中尿素氮、肌酐升高的高血壓患者腎小球?yàn)V過(guò)率以明顯降低，表明尿素氮、肌酐作為早期腎臟損傷的診斷指標(biāo)。

3.2 肝臟疾病中應(yīng)用 RBP 有肝臟合成，如果肝臟蛋白質(zhì)合成功能減退，血清中RBP 濃度降低，與ALT、AST 高度負(fù)相關(guān)，RBP［3-4］是反映肝臟合成和儲(chǔ)備能力的指標(biāo)，在各種肝病中都有不同程度的下降，依次為重癥肝炎、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化。肝膽疾病時(shí)血清RBP 濃度降低，在病毒肝炎早期，RBP降低更顯著［7-8］。許茵［9］使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定147 例肝病患者血清RBP 與線粒體型天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(m-AST)水平，探討RBP 及m-AST 在肝病中的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果在肝病診斷中，RBP 與m-AST 的靈敏度優(yōu)于其它肝功能指標(biāo)，表明檢測(cè)并動(dòng)態(tài)觀察肝臟疾病患者的RBP 與m-AST，對(duì)于了解肝臟疾病的病理生理變化，鑒別急慢性肝炎、療效評(píng)價(jià)、判斷肝病預(yù)后有重要意義。文獻(xiàn)報(bào)道血清RBP 同前白蛋白(PA)一樣，是肝臟合成功能不全的敏感指標(biāo)，RBP、PA 下降的幅度與肝臟受損程度一致，肝損傷越重，其減低越明顯，肝炎后肝硬化時(shí)值更低。陸建剛等了解小兒RBP 的含量與肝臟發(fā)育的關(guān)系，采用免疫比濁法測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，個(gè)時(shí)間段小兒視黃醇結(jié)合蛋白含量不同，與小兒肝臟發(fā)育程度呈負(fù)相關(guān)［10］。

3.3 營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)估 文獻(xiàn)報(bào)道，血清PA、RBP 不僅可用于蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的評(píng)價(jià)，還可作為維生素A 營(yíng)養(yǎng)不良的檢測(cè)指標(biāo)，能敏感反應(yīng)機(jī)體的早期和亞臨床型營(yíng)養(yǎng)缺乏。徐杰平等了解學(xué)齡前兒童血清RBP、PA 的正常參考水平，同時(shí)測(cè)定血清總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平，結(jié)果不同年齡組學(xué)齡前兒童血清RBP、PA、TP、ALB 含量隨年齡增加均呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，以血清RBP、PA 的下降趨勢(shì)尤為明顯，各年齡組學(xué)齡前兒童不同性別之間的差異不明顯。表明RBP、PA 在學(xué)齡前兒童營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)估中具有重要意義，且血清RBP 的診斷價(jià)值高于血清PA。

綜上所述，視黃醇結(jié)合蛋白測(cè)定，是一項(xiàng)評(píng)價(jià)腎臟疾病特別是腎小管損傷疾病的良好指標(biāo)，已廣泛應(yīng)用于臨床，此外，對(duì)肝膽系統(tǒng)疾病、營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)估等均具有較高的臨床意義。

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