腦卒中患者血清PARK7水平變化及意義

崔桂萍，劉 萍

(天津市環(huán)湖醫(yī)院，天津300060)

目前，腦卒中的診斷多依賴于影像學檢查(如CT、MRI等)，存在一定的時間局限性。隨著腦卒中生物標志物研究的不斷深入，有研究者發(fā)現人帕金森病蛋白7(PARK7)與腦卒中密切相關，但國內尚少有相關報道。2008年12月～2009年11月，我們觀察了腦卒中患者血清PARK7水平的動態(tài)變化，初步評價該指標在腦卒中患者早期診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 入選條件:①初次發(fā)病的缺血性腦卒中(IS)和出血性腦卒中(ICH)患者;②發(fā)病12 h內及時入院;③符合1995年全國第四屆腦血管病學術會議制定的診斷標準;④均經CT和(或)MRI證實。排除繼發(fā)的IS(包括陳舊性腦梗死)、ICH，以及嚴重的心、肝、腎功能不全者。符合條件的腦卒中患者65例，男40例、女 25例，年齡(60.14±13.02)歲;其中IS37例(IS組)，ICH 28例(ICH組)。ICH組出血量0～20 mL 11例，21～40 mL 8例，41～60 mL 6例，＞60 mL 3例。采用改良愛丁堡—斯堪的納維亞卒中評定量表(MESSS)進行患者神經功能缺損評估，輕度缺損(0～15分)26例，中度缺損(16～30分)19例，重度缺損(30～45分)20例。發(fā)病第14天患者病情穩(wěn)定或出院時，Barthel指數(BI)評定日常生活活動能力，作為預后評估。完全殘疾、生活完全依賴(10～20分)16例，重度功能障礙、生活依賴明顯(20～40分)17例，中度功能障礙、生活需要幫助(40～60分)9例，生活基本自理(60分以上)23例。選擇同期門診體檢健康者30例作為對照組，男18 例、女12 例，年齡(58.24 ±12.09)歲，無心腦血管、出血性疾病及血液系統(tǒng)疾病，未服用任何抗凝藥物。三組年齡、性別比較，P均＞0.05。

1.2 方法

1.2.1 血清PARK7檢測方法 分別于患者入院時(發(fā)病12 h內)及發(fā)病第3、14天取靜脈4 mL，對照組采集靜脈血1次。待血液凝固后，1 000 r/min離心20 min，提取血清－80℃冰箱保存，檢測前室溫預置30 min復溶。采用酶聯免疫吸附法檢測血清PARK7，嚴格按照試劑說明書操作。

1.2.2 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布數據用ˉx±s表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組之間比較采用方差分析;診斷試驗采用受試者工作特征曲線(ROC)，評價檢測指標的敏感度和特異度。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清PARK7水平比較 IS組發(fā)病12 h內及第3、14 天血清 PARK7 分別為(32.79 ±6.94)、(31.23 ±6.04)、(32.71 ±6.34)μg/L，ICH 組分別為(31.61 ±5.06)、(32.05 ±4.29)、(31.48 ±5.94)μg/L，對照組為(14.25 ±2.65)μg/L。IS、ICH 組各時點均高于對照組，P均＜0.01;IS、ICH組同組不同時點間及兩組同時點間比較，P均＞0.05。

2.2 血清PARK7水平對IS、ICH的診斷價值 采用ROC曲線，以20.256μg/L為界值，PARK7診斷IS的靈敏度為97.3%，特異度為96.7%，陽性似然比29.19，陰性似然比0.028，ROC 曲線下面積0.995(P=0.000);診斷ICH的靈敏度為96.4%，特異度為96.7%，陽性似然比 29.21，陰性似然比 0.037，ROC 曲線下面積 =0.965(P=0.000)。

2.3 血清 PARK7水平與MESSS、BI的關系 IS組在12 h內血清PARK7水平與MESSS評分呈正相關(r=0.357，P ＜0.05)，ICH 組在發(fā)病第 14 天血清PARK7 與 BI呈負相關(r= －0.478，P ＜0.05)。

2.4 血清PARK7水平與ICH發(fā)病初期出血量的關系 ICH發(fā)病初期出血量與血清PARK7水平呈正相關(r=0.486，P=0.012)。

3 討論

目前研究表明，動脈粥樣硬化是腦血管疾病的主要病因，氧化應激和炎性反應的作用貫穿了動脈粥樣硬化的始終［1，2］。

PARK7是帕金森病早期發(fā)作的常染色體隱性遺傳相關基因，也稱DJ-1，最初是作為癌蛋白被發(fā)現的。研究表明［3］，PARK7具有分子伴侶或蛋白水解酶以及抗氧化應激功能，與帕金森病密切相關的是它的抗氧化應激功能。有研究發(fā)現，PARK7與腦卒中密切相關，病理機制尚未明確。Yanaqisawa等［4］研究發(fā)現，PARK7對缺血再灌注損傷所致的神經元退行性變具有保護作用。他們制作大鼠大腦中動脈閉塞的腦缺血模型，大腦中動脈閉塞后3 d，紋狀體內所注射的谷胱甘肽S轉移酶標記的PARK7顯著降低梗死面積，并被MRI證實。Mullett等［5］研究發(fā)現，PARK7在人腦梗死區(qū)域有豐富表達，產生免疫反應的PARK7存在于星形膠質細胞內;在腦缺血或再灌注誘導的氧化應激條件下，PARK7在相關梗死區(qū)域白質和灰質星形膠質細胞中大量表達，星形膠質細胞PARK7的表達與腦梗死進展時程有關;與急性腦梗死相比較，亞急性和慢性腦梗死時PARK7表達更豐富。Yanagida等［6］的研究也得出了同樣結論，發(fā)現在缺血半暗帶星形膠質細胞PARK7表達增強。這表明氧化應激誘導星形膠質細胞PARK7蛋白釋放，并通過減少活性氧介導的神經元損傷而發(fā)揮神經保護作用。由此可見，與腦梗死密切相關的應該是PARK7的抗氧化應激功能。

過往研究從細胞學及分子生物學分析了PARK7與腦卒中的關系，本研究從血清學進行探討。結果發(fā)現，兩組血清PARK7均高于對照組，表明無論IS還是ICH，PARK7均可作為腦卒中急性期的標志物。研究還發(fā)現，IS組從發(fā)病到第3天，PARK7血清水平下降，第14天時逐漸升高;而ICH組發(fā)病到第3天持續(xù)升高，第14天時逐漸下降。這兩種不同的變化趨勢表明，PARK7在腦梗死和腦出血中的作用機制很可能不盡相同。進一步比較兩組各時點均無統(tǒng)計學意義，說明 PARK7在腦梗死和腦出血中可能存在共同的作用機制，其機制有待進一步考證。

Allard等［7］研究發(fā)現，發(fā)病3 h內腦卒中患者血漿PARK7水平顯著升高，其對IS的診斷敏感度和特異度分別為 53.7%、90.0%，對 ICH分別為43.4%、90.0%，可作為腦卒中早期診斷指標。本研究發(fā)現，PARK7對 IS敏感度為97.3%、特異度為96.7%，對 ICH 分別為 96.4%、96.7%，與 Allard 等研究結果相近。

本研究采用MESSS評分評估患者神經功能缺損程度，患者病情穩(wěn)定或出院時用BI評估預后。結果顯示，IS組血清PARK7水平與MESSS評分在12 h內相關，ICH組在14天出院時PARK7與 BI呈負相關;另外，IS組中10例臨床有神經科癥狀及體征，但發(fā)病12 h內未見影像學變化，驗證了PARK7在腦梗死的診斷上更具敏感性;28例ICH患者中，其出血量與血清PARK7水平呈正相關。上述結果為國內外相關研究的首次報道，病理機制尚不明確，有待于進一步研究探討。

抗氧化是動脈粥樣硬化治療的重要措施之一。Kitamura等［8］建立大鼠的虛擬模型，將PARK7綁定于一種復合制劑成為Compound-23(Comp-23)，作為治療帕金森病和腦梗死的抗氧化劑。結果發(fā)現，Comp-23可防止氧化應激而誘導的SH-SY5Y細胞和中腦腹側主要神經細胞的死亡，起主導作用的是PARK7，且Comp-23還可減小腦梗死面積;由此建議，Comp-23可作為治療帕金森和缺血性神經退行性變疾病治療的主導藥物。還有研究表明［9，10］，腦卒中時星形細胞性PARK7過表達是為了保護星形膠質細胞和神經元，對抗梗死相關的繼發(fā)性損傷機制如氧化應激、興奮毒性、細胞凋亡，且上述機制在體外實驗中得到證實。

PARK7作為帕金森病的相關基因已得到充分證實，上述研究表明其與腦卒中密切相關，說明多種神經系統(tǒng)疾病可能具有共同的病理機制;PARK7血清水平在腦卒中早期顯著升高，表明其具有一定的診斷作用，尤其對IS的超早期診斷，可能比影像學檢查更敏感，可為患者提供一個更好的治療方案，同時可能會成為神經保護治療的目標。但本研究樣本量小，尚需臨床大樣本和基礎研究來支持和驗證PARK7的作用。

［1］Vogiatzi G，Tousoulis D，Stefanadis C.The role of oxidative stress in atherosclerosis［J］.Hellenic J Cardiol，2009，50(5):402-409.

［2］Victor VM，Rocha M，Eva S，et al.Oxidative stress，endothelial dysfunction and atherosclerosis［J］.Current Pharmaceutical Design，2009，15(26):2988-3002.

［3］Taira T，Saito Y，Niki T，et al.DJ-1 has a role in antioxidative stress to prevent cell death［J］.EMBO Rep，2004，5(2):213-218.

［4］Yanaqisawa D，Kitamura Y，Inden M，et al.DJ-1 protects against neurodegeneration caused by focal cerebral ischemia and reperfusion in rats［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2008，28(3):563-578.

［5］Mullett SJ，Hamilton RI，Hinkle DA.DJ-1 immunoreactivity in human brain astrocytes is dependent On infarct presence and infarct age［J］.Neuropathology，2009，29(2):125-131.

［6］Yanagida T，Tsushima J，Kitamura Y，et al.Oxidative stress induction of DJ-1 protein in reactive astrocytes scavenges free radicals and reduces cell injury［J］.Oxid Med Cell Longer，2009，2(1):36-42.

［7］Allard L，Burkhard PR，Lescuyer P，et al.PARK7 and nucleoside diphosphate kinase A as plasma markers for the early diagnosis of stroke［J］.Clinical Chem，2005，51(11):2043-2051.

［8］Kitamura Y，Watanabe S，Taguchi M，et al.Neuroprotective effect of a new DJ-1-binding compound against neurodegeneration in Parkinson's disease and stroke model rats［J］.Mol Neurodegener，2011，6(1):48-67.

［9］Takahashi-Niki K，Niki T，Taira T，et al.Reduced anti-oxidative stress activities of DJ-1 mutants found in Parkinson's disease patients［J］.Biochem Biophys Res Commun，2004，320(2):389-397.

［10］Yokota T，Sugawara K，Ito K，et al.Down regulation of DJ-1 enhances cell death by oxidative stress，ERstress，and proteasome inhibition［J］.Biochem Biophys Res Commun，2003，312(4):1342-1348.