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    肺癌組織中NEP、APN的表達(dá)變化及意義

    2013-06-15 03:14:46孫發(fā)政種曉迪
    山東醫(yī)藥 2013年24期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞染色淋巴結(jié)

    孫發(fā)政,種曉迪

    (1棗莊市中區(qū)人民醫(yī)院,山東棗莊277100;2棗莊市立三院)

    中性肽鏈內(nèi)切酶 (NEP)是存在于細(xì)胞膜表面的Ⅱ型膜蛋白,屬含鋅金屬肽酶M13家族中的一員;氨基肽酶N(APN)也是一種是Ⅱ型膜蛋白,因能夠從肽、酰氨和芳酰氨的N端水解氨基酸而得名。既往,這兩種蛋白主要用于急性白血病和惡性淋巴瘤等血液系統(tǒng)腫瘤的診斷與鑒別,現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)非造血系統(tǒng)腫瘤的診斷、鑒別診斷也有重要指導(dǎo)意義。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測NEP、APN在肺癌、肺良性腫瘤及正常肺組織中的表達(dá),并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,為肺癌的診斷、鑒別診斷及預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2004年7月~2010年12月在棗莊市中區(qū)人民醫(yī)院胸科經(jīng)手術(shù)治療、術(shù)前均未行放化療及其他相關(guān)治療、病理診斷明確、病史完整的病例作為研究對(duì)象。肺癌73例,病理分型為鱗癌27例,腺癌30例,小細(xì)胞肺癌16例;TNM分期Ⅰ期15例,Ⅱ期18例,Ⅲ~Ⅳ期40例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。肺良性腫瘤組織26例,取自結(jié)核球11例,炎性假瘤6例,錯(cuò)構(gòu)瘤8例,纖維化結(jié)節(jié)1例。正常肺組織20例,取自距癌腫邊緣5 cm以上的正常肺組織,并經(jīng)病理檢查證實(shí)無癌細(xì)胞。

    1.2 方法

    1.2.1 NEP、APN檢測方法 采用免疫組織化學(xué)染色SP法。根據(jù)病理結(jié)果,選取肺癌組織豐富的石蠟塊,連續(xù)切片,厚度4μm。脫蠟、水化、微波抗原修復(fù);加入過氧化氫,正常非免疫動(dòng)物血清封閉,孵育10 min;滴加一抗,4℃過夜;滴加生物素標(biāo)記二抗,鏈霉菌抗生物素一過氧化物酶溶液,孵育10 min;DAB顯色,蘇木精復(fù)染。NEP、APN陽性細(xì)胞為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒。依據(jù)染色程度及陽性細(xì)胞數(shù)判斷:無陽性染色及陽性細(xì)胞為-,著色淡或陽性細(xì)胞<25%為+,著色適中或陽性細(xì)胞占25%~50%為++,著色深或陽性細(xì)胞≥50%為+++。+~+++者均判為陽性表達(dá)。

    1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。構(gòu)成比或率的比較采用χ2或 Fisher's檢。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 NEP、APN在不同肺組織中的表達(dá) 肺癌組織中NEP、APN陽性表達(dá)率分別為32.88%(24/73)、41.11%(30/73),肺良性腫瘤組織中分別為88.46%(23/26)、15.38%(4/26),正常肺組織中分別為 95.00%(19/20)、5.00%(1/19);肺癌組織中NEP、APN陽性表達(dá)率與肺良性組織、正常肺組織比較,P 均 <0.01。

    2.2 NEP、APN表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系NEP、APN表達(dá)與肺癌的臨床分期、組織分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05),見表1。

    3 討論

    NEP有著廣泛的組織定位和作用底物,通過裂解生物活性肽,間接調(diào)解蛋白質(zhì)代謝,對(duì)細(xì)胞生長、分化、增殖和凋亡具有重要的生理調(diào)節(jié)作用[1]。最新研究認(rèn)為,NEP在不同組織中的表達(dá)及活性變化與某些疾病的發(fā)生和預(yù)后有一定聯(lián)系[2]。NEP減少可以引起神經(jīng)源性肽分泌增加而降解減少,神經(jīng)源性肽是導(dǎo)致肺癌發(fā)病的自分泌/旁分泌生長因子[3]。APN一般均勻地分布在細(xì)胞膜表面,當(dāng)腫瘤細(xì)胞形成克隆時(shí),APN分子自動(dòng)遷移到細(xì)胞與細(xì)胞的接觸部位。腫瘤細(xì)胞通過該蛋白酶對(duì)基底膜成分(基膜和Ⅳ型膠原蛋白)的水解作用,進(jìn)行組織消化穿透;同時(shí)誘導(dǎo)周圍間質(zhì)細(xì)胞的肌纖維母細(xì)胞化,及間質(zhì)中腫瘤血管的增生,促進(jìn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[4]。

    表1 NEP、APN表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

    Shousha等[5]研究發(fā)現(xiàn),在肝硬化發(fā)展中,出現(xiàn)NEP染色方面的變化具有重要臨床意義;隨著肝纖維化加重或廣泛腫瘤轉(zhuǎn)移,NEP染色逐漸下降,其病變機(jī)制尚不明確。而在肺癌患者的血漿及腫瘤中,APN 表達(dá)明顯升高[6,7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),NEP在肺癌組織中的陽性表達(dá)率明顯降低(32.88%),且多為弱陽性;在肺良性腫瘤組織(88.46%)和正常肺組織組織(95.00%)中的表達(dá)率較高,多為強(qiáng)陽性。而APN在肺癌組織中的表達(dá)(41.10%)明顯高于肺良性腫瘤(15.38%)和正常肺組織(5.00%),并且在肺良性腫瘤和正常肺組織中APN的表達(dá)多呈弱陽性。這一結(jié)果提示,NEP和APN表達(dá)及活性變化與肺癌的發(fā)生有一定聯(lián)系,同時(shí)檢測NEP、APN對(duì)于肺惡性腫瘤的診斷及與鑒別診斷有重要價(jià)值。Nahye Myong[8]在相關(guān)研究中,未發(fā)現(xiàn)吸煙和非吸煙人群中NEP表達(dá)存在顯著差異。本組研究發(fā)現(xiàn),NEP、APN在吸煙者和非吸煙者腫瘤組織中的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。筆者認(rèn)為,雖然吸煙是導(dǎo)致肺癌的重要誘因,但尚不能認(rèn)為吸煙是導(dǎo)致NEP、APN在肺癌中表達(dá)降低或缺失的潛在機(jī)制。

    有研究發(fā)現(xiàn),NEP表達(dá)下降可促進(jìn)前列腺癌、腎癌患者術(shù)后的局部復(fù)發(fā)[9],而APN陽性表達(dá)的腫瘤患者往往惡性程度高、預(yù)后差[10],本研究發(fā)現(xiàn),NEP、APN表達(dá)與肺癌臨床分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。即肺癌臨床分期晚、分化程度越低及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,NEP表達(dá)陽性率越低;而APN表達(dá)正好相反,即肺癌臨床分期越晚、分化程度越低及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,APN表達(dá)陽性率越高。這說明NEP、APN肺表達(dá)對(duì)肺癌惡性程度的判斷、預(yù)后評(píng)估及制定下一步治療方案有重要指導(dǎo)意義。

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