• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    小反芻獸疫診斷技術(shù)及其疫苗研究進(jìn)展

    2013-04-07 13:14:49楊翠玲
    飼料博覽 2013年2期
    關(guān)鍵詞:獸疫山羊敏感性

    楊翠玲

    (濰坊市經(jīng)濟(jì)學(xué)校,山東 諸城 262200)

    小反芻獸疫(PPR)是一種嚴(yán)重的烈性、接觸性傳染病。FAO/OIE規(guī)定PPR為A類烈性傳染病,我國規(guī)定為一類動物疫病。其病原是小反芻獸疫病毒(PPRV),其與牛瘟病毒(RPV)同屬于副黏病毒科麻疹病毒屬,PPRV曾被錯誤的認(rèn)為是RPV的變異株,二者能產(chǎn)生交叉免疫保護(hù)作用,因此常用牛瘟疫苗預(yù)防PPR,直到20世紀(jì)70年代后期才證明PPRV不同于RPV。

    PPRV主要感染小反芻獸,山羊高度易感,不同品種的山羊易感性不同,歐洲品系的山羊更易感,幼齡動物易感性較高,哺乳期的動物抵抗力較強(qiáng);豬和牛也可感染,但通常無臨床癥狀,通過調(diào)查PPR的流行過程,牛、豬及昆蟲在傳播該病過程中未起到作用;瞪羚、努比亞野山羊、東方盤羊及長角羚有死亡的報道;另外證實(shí)PPRV可以克服大型反芻動物的先天抵抗力,感染駱駝、水牛等反芻動物[1-3]。自然感染PPRV后,典型臨床特征是高熱(41℃)、流淚、眼鼻分泌物增多、嚴(yán)重腹瀉、口舌潰瘍、支氣管肺炎,嚴(yán)重感染時發(fā)病率和病死率都可以達(dá)到100%。目前該病主要通過早期診斷和疫苗免疫的方式進(jìn)行控制[4]。

    世界上第一例PPR于1942年發(fā)生在非洲的科特迪瓦,本病曾經(jīng)給非洲、中東等地區(qū)的小反芻動物養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重災(zāi)害。到2006年初,我國周邊國家孟加拉國、尼泊爾、印度、巴基斯坦等先后暴發(fā)PPR疫情,近幾年呈現(xiàn)蔓延趨勢。2007年7月我國首例小反芻獸疫疫情在西藏發(fā)生,并經(jīng)國家外來動物疫病診斷中心確診,作為一種動物外來疫病,該病已嚴(yán)重威脅到我國小反芻獸的健康,因此對該病開展研究具有重要意義[5]。

    1 診斷技術(shù)

    PPR的確診須依賴于實(shí)驗(yàn)室檢測,目前實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要有9種。

    1.1 瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

    瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(AGID)試驗(yàn)在臨床中廣泛應(yīng)用,該方法簡單、便宜,可在基層實(shí)驗(yàn)室甚至野外操作,反應(yīng)18~24 h可獲得結(jié)果。但對于臨床中比較常見的溫和型PPR來講,AGID試驗(yàn)的敏感性不足以檢測到分泌物中含量較低的抗原,故不適用于PPR的早期診斷。

    1.2 對流免疫電泳

    學(xué)者用對流免疫電泳(CIEP)和AGID兩種檢測方法同時檢測PPR病料,CIEP可以檢測到80.3%的陽性率,而AGID的檢測陽性率是42.6%,說明CIEP的敏感性較高。Osman等用CIEP及競爭ELISA(c-ELISA)兩種方法同時檢測519個血清樣本,CIEP的陽性率是59.15%,c-ELISA的陽性率為50.67%,說明CIEP的敏感性高于c-ELISA,但是CIEP試驗(yàn)的缺點(diǎn)是不能區(qū)別RPV感染[6]。鑒于CIEP較高的敏感性,因此在無條件進(jìn)行c-ELISA的地區(qū)或者實(shí)驗(yàn)室,CIEP可作為一種有用的篩選試驗(yàn),用于PPRV的臨床檢測。

    1.3 間接熒光抗體試驗(yàn)

    學(xué)者通過PPRV的單克隆抗體建立間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT),能特異性地檢測出早期及晚期病料中的PPRV。另外,以重組PPRV F蛋白為抗原,免疫家兔,制備其多克隆抗體,以制備的多克隆抗體為一抗,用于捕獲病料中的抗原,以羊抗兔的IgG作為二抗,通過IFAT能特異性的診斷出PPRV[7]。

    1.4 病毒分離鑒定

    PPRV的培養(yǎng)分離可以選用原代羔羊腎細(xì)胞及非洲綠猴腎細(xì)胞。培養(yǎng)5~6 d后,細(xì)胞變圓、收縮,最終形成合胞體,其細(xì)胞核呈圓形,猶如表盤狀排列;因CPE出現(xiàn)時間較晚,5~6 d后應(yīng)進(jìn)行盲傳繼代,進(jìn)一步鑒定需要借助病毒中和試驗(yàn)(VNT)或電子顯微鏡[8]。由于其試驗(yàn)要求較高,需要大量人力物力,不利于基層實(shí)驗(yàn)室開展檢測工作。

    1.5 中和試驗(yàn)

    在國際貿(mào)易中,中和試驗(yàn)(VNT)是PPR指定診斷方法,該方法靈敏、特異,但是通常需要10~12 d,試驗(yàn)要求較高,不適合大規(guī)模樣品檢測。其轉(zhuǎn)管培養(yǎng)通常在原代羔羊腎細(xì)胞或者非洲綠猴腎細(xì)胞進(jìn)行,通過與RPV進(jìn)行交叉中和試驗(yàn),可以與RPV進(jìn)行鑒別診斷[9]。

    1.6 ELISA

    應(yīng)用ELISA方法監(jiān)測血清的方法已經(jīng)十分成熟,而且有多種試驗(yàn)方法。

    1.6.1 競爭ELISA

    動物感染PPRV后,其血清中抗體一部分是針對PPRV N蛋白和H蛋白的,基于其單克隆抗體建立c-ELISA檢測方法[8]。另外,將RPV碳端可變區(qū)在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),用作c-ELISA抗原,鑒別診斷RPV和PPRV感染。c-ELISA是OIE的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法之一,現(xiàn)已開發(fā)出標(biāo)準(zhǔn)c-ELISA檢測試劑盒,用于檢測血清或者血漿中的PPRV N蛋白抗體。此方法耗時較短,能實(shí)現(xiàn)檢測的大量化,敏感性為94.5%、特異性為99.4%,與經(jīng)典的病毒中和試驗(yàn)具有較高的相關(guān)性,因此得到廣泛應(yīng)用。

    1.6.2 夾心ELISA

    夾心ELISA(S-ELISA)方法的原理是用多克隆抗體捕獲臨床樣品中的PPRV抗原,用針對PPRV N蛋白的單克隆抗體檢測捕獲的抗原。Singh等試驗(yàn)表明,S-ELISA特異性達(dá)92.8%,敏感性達(dá)88.9%,2 h內(nèi)可獲得試驗(yàn)結(jié)果,特別適合臨床樣品的檢測,缺點(diǎn)是不能鑒別診斷RPV;另外由于S-ELISA具有迅速、簡單的特點(diǎn),因此可替代VNT,用于PPR疫苗質(zhì)量控制[10]。

    1.6.3 間接ELISA

    基于血清中的多抗,Balamurugan等建立了間接ELISA(i-ELISA)方法,特異性和敏感性分別達(dá)95.09%及90.81%。Zhang等克隆了在中國西藏爆發(fā)的PPRV N蛋白基因,并在大腸桿菌中表達(dá),以此建立i-ELISA方法,分析697份血清表明,敏感性和特異性分別是96.7%及96.1%[11]。分析比對發(fā)現(xiàn),PPRV NP蛋白的452-472位區(qū)域的多肽序列是PPRV特異的,并且具有較強(qiáng)的免疫原性,其產(chǎn)生的抗體能特異地識別PPRV,因此可以鑒別診斷PPRV及RPV。鑒于其較高特異性及敏感性,因此i-ELISA方法可以取代國外昂貴的試劑盒用于PPR的實(shí)驗(yàn)室診斷。

    1.7 核酸探針雜交試驗(yàn)

    目前已克隆出PPRV各個基因,并建立了核酸探針雜交檢測方法。針對PPRV N蛋白基因的cD?NA探針可以鑒別診斷PPRV及RPV,由于32P的半衰期較短以及放射性元素危害較大等原因,核酸探針雜交試驗(yàn)成為一種常規(guī)診斷方法不太現(xiàn)實(shí)。

    1.8 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

    Balamurugan等建立了針對N、M基因的一步法多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法(RT-PCR),可鑒別診斷RPV[12]?;赑PRV N、H、M蛋白基因,Georg等建立了多重RT-PCR方法,研究證實(shí)M基因的PCR敏感性最高,N、H及F基因依次次之,可以鑒別診斷PPRV和RPV;基于PPRV N蛋白基因,建立了一步法實(shí)時定量RT-PCR法,能夠檢測血液樣本,與常規(guī)RT-PCR相比,具有敏感性更高且減少PCR污染的優(yōu)勢[13]。鑒于PCR快速、特異、靈敏、高通量的優(yōu)勢,PCR檢測方法在PPRV的診斷中將發(fā)揮重大優(yōu)勢。

    1.9 PCR-ELISA

    基于PPRV N基因,Saravana等建立了PCRELISA檢測方法,通過RT-PCR擴(kuò)增地高辛標(biāo)記的336 bp產(chǎn)物,然后通過ELISA檢測,該方法靈敏度比傳統(tǒng)RT-PCR高10 000倍,在對臨床樣本的檢測中,其敏感性高于S-ELISA[14]。因此該方法比S-ELISA更適用于早期感染及感染后期的檢測,同時能進(jìn)行PPRV與RPV的鑒別診斷。

    2 疫苗研究進(jìn)展

    2.1 RPV弱毒疫苗

    RPV弱毒疫苗曾在西非廣泛應(yīng)用于綿羊和山羊的免疫,不但可以控制RP,又可以預(yù)防PPR,免疫保護(hù)效果較好,其原因是PPRV與RPV具有較高的抗原相關(guān)性。但是該疫苗不利于RP的無疫認(rèn)證。Walsh等將綠色熒光蛋白(GFP)基因插入牛瘟弱毒RBOK疫苗株,構(gòu)建成重組病毒RPV?SIG-GFP,免疫接種后,RPV和PPRV的強(qiáng)毒均不能使其感染,其產(chǎn)生的抗GFP抗體可用于區(qū)別自然感染和疫苗免疫動物[15]。

    2.2 PPR弱毒疫苗

    20世紀(jì)80年代末,PPRV毒株在非洲綠猴腎細(xì)胞成功致弱,該株疫苗屬于Ⅰ群,但是交叉保護(hù)作用較強(qiáng),無任何毒副作用,因此廣泛用于PPR的預(yù)防;通過冷凍干燥可極大提高其熱穩(wěn)定性,利于基層運(yùn)輸及使用;免疫后,保護(hù)性抗體可維持12個月,母源抗體較高,可在4月或者5月齡首免;缺點(diǎn)是不能區(qū)分野毒及疫苗毒[16]。另外,Rashid將巴基斯坦當(dāng)?shù)氐腜PRV毒株經(jīng)細(xì)胞致弱后,免疫山羊及綿羊21 d后,采用c-ELISA方法,可以檢測到較高水平的抗體,抗體可以維持1年[17]。

    2.3 PPR滅活疫苗

    同源的PPR滅活疫苗通常使用感染PPRV山羊的病理組織進(jìn)行制備,研究表明,氯仿的滅活效果優(yōu)于甲醛,用氯仿滅活后免疫動物,血清抗體可持續(xù)8個月,但是無法區(qū)分野毒株和疫苗株。

    2.4 重組亞單位疫苗

    用純化的重組桿狀病毒表達(dá)的HN蛋白具有良好的免疫原性,無需使用佐劑,低劑量免疫山羊后,能產(chǎn)生中和PPRV和RPV的抗體。通過原核表達(dá)PPRV和RPV的NP蛋白,經(jīng)過純化,單劑量、無需佐劑的前提下免疫小鼠即可產(chǎn)生免疫應(yīng)答。Khandelwal等表達(dá)PPRV HN蛋白,其免疫表位具有天然構(gòu)象,綿羊口服后,能產(chǎn)生中和抗體,且能使細(xì)胞介導(dǎo)其免疫反應(yīng)[18]。與PPR弱毒疫苗相比較,重組亞單位疫苗耐熱性能穩(wěn)定,且持續(xù)時間比較長,因此在PPR防控中占有極大優(yōu)勢。

    2.5 嵌合體疫苗

    利用PPRV的F和H、M蛋白基因代替RPV疫苗基因組中的對應(yīng)基因,可以是單獨(dú)代替也可以是同時代替,以此構(gòu)建嵌合體疫苗。研究表明,嵌合體疫苗RPV-PPRFH在組織中繁殖不良,相反的RPV-PPRMFH的繁殖速度得到提升;免疫山羊后,山羊無不良反應(yīng),能產(chǎn)生較高的中和抗體,抵抗PPRV強(qiáng)毒的攻擊[19]。可見RPV-PPRMFH是一個良好的候選嵌合體疫苗。

    2.6 山羊痘活載體疫苗

    預(yù)防羊痘與小反芻獸疫的疫苗均為弱毒疫苗,存在散毒隱患。重組羊痘病毒(rCPV)免疫后既可以抵抗PPR的感染,同時也能預(yù)防CPV的感染。Chen等成功將PPRV的F基因或者H基因插入羊痘病毒的TK基因編碼區(qū),構(gòu)建了重組病毒rCPV-PPRVH及rCPV-PPRVF,研究證實(shí)與rCPVPPRVF相比rCPV-PPRVH能產(chǎn)生更強(qiáng)的誘導(dǎo)免疫,免疫注射1次后,就可以使80%的羊產(chǎn)生抗體,免疫6個月后仍能檢測到中和抗體[20]。因此,重組羊痘疫苗是小反芻獸疫疫苗新的發(fā)展方向。

    2.7 RNA干涉技術(shù)

    通過利用重組腺病毒及桿狀病毒載體表達(dá)小干擾RNA(SiRNA),用于治療PPRV及RPV感染,重組病毒可以抑制>73%的病毒復(fù)制,結(jié)果表明,SiRNA分子在對抗麻疹病毒感染治療中具有潛在價值[21]。因此,RNA干涉技術(shù)可以克服通常疫苗誘導(dǎo)期長的缺點(diǎn),有望作為一種有效的抗病毒治療制劑應(yīng)用于控制PPRV感染。

    3 小結(jié)

    PCR和c-ELISA檢測技術(shù)具有快速、特異、靈敏、高通量性的特性,因此成為OIE規(guī)定的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法,而基因工程疫苗將在控制小反芻獸疫中發(fā)揮重要的作用。

    [1] 印春生,支海兵.小反芻獸疫研究進(jìn)展[J].中國獸藥雜志,2007,41(8):22-27,38.

    [2] Khalafalla A I,Saeed IK,Ali Y H,et al.An outbreak of peste des petits ruminants(PPR)in camels in the Sudan[J].Acta Trop,2010,116(2):161-165.

    [3] 田曉玲.小反芻獸疫基因免疫的研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

    [4] Chauhan H C,Lambade P,Sen S,et al.The use of pathological and histopathological techniques in the diagnosis of peste des pe?tits ruminants in India[J].Veterinaria Italiana,2011,47(1):41-47.

    [5] 王志亮,包靜月,吳曉東,等.我國首例小反芻獸疫診斷報告[J].中國動物檢疫,2007,24(8):24-26.

    [6]Osman N A,Ali A S,Rahman M E,et al.Antibody seroprevalenc?es against Peste des Petits Ruminants(PPR)virus in sheep and goats in Sudan[J].Tropical animal Health and Production,2009,41(7):1 449-1 453.

    [7] 曲林茂.表達(dá)小反芻獸疫病毒H.F蛋白的重組山羊痘病毒的構(gòu)建及免疫原性研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

    [8] 印春生.小反芻獸疫病毒N蛋白抗原表位多肽的合成及競爭ELISA方法的建立[D].北京:中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,2007.

    [9] 李剛,江彥增,晁生玉,等.小反芻獸疫快速診斷技術(shù)及其疫苗的研究進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(5):81-84.

    [10] Saravanan P,Sen A,Balamurugan V,et al.Rapid quality control of a live attenuated Peste des petits ruminants(PPR)vaccine by monoclonal antibody based sandwich ELISA[J].Biologicals,2008,36(1):1-6.

    [11]Zhang G R,Zeng J Y,Zhu Y M,et al.Development of an indirect ELISA with artificially synthesized N protein of PPR virus[J].In?tervirerlogy,2012,55(1):81-84.

    [12] Balamuruqan V,Sen A,Venkatesan G,et al.A rapid and sensi?tive one stepsybr green based semi quantitative real time RT-PCR for the detection of peste des petits ruminants virus in the clinical samples[J].Virologica Sinica,2012,27(1):1-9.

    [13] Batten C A,Banyard A C,King D P,et al.A real time RT-PCR assay for the specific detection of Peste des petits ruminants virus[J].J Virol Methods,2011,171(2):401-404.

    [14] Saravanan P,Singh R P,Balamuruqan V,et al.Development of a N gene-based PCR-ELISA for detection of Peste-des-petits-ru?minants virus in clinical samples[J].Acta Virol,2004,48(4):249-255.

    [15]Walsh E P,Baron M D,Anderson J,et al.Development of a genet?ically marked recombinant rinderpest vaccine expressing green fluorescent protein[J].The Gournal of General Virlogy,2000,81(31):709-718.

    [16] Diallo A.Control of peste des petits ruminants:classical and new generation vaccines[J].Developments in Biologicals,2003(114):113-119.

    [17] Rashid A,Hussain A,Asim M.Evaluation of peste des petits ru?minants cell culture vaccine in sheep and goats in Pakistan[J].Vet Ital,2010,46(3):315-318.

    [18] Khandelwal A,Renukaradhya G J,Rajasekhar M,et al.Immune responses to hemag-glutinin-neuraminidase protein of peste des?petits ruminants virus expressed in transgenic peanut plants in sheep[J].Veterinary Immunology and Immunopathology,2011,140(3-4):291-296.

    [19] Mahapatra M,Parida S,Baron M D,et al.Matrix protein and gly?coproteins F and H of Peste-des-petits-ruminants virus function better as a homologous complex[J].The Goural of Gerneral Virolo?gy,2006,87(7):2 021-2 029.

    [20] Chen W,Hu S,Qu L,et al.A goat poxvirus-vectored peste-despetits-ruminants vaccine induces long-lasting neutralization anti?body to high levels in goats and sheep[J].Vaccine,2010,28(30):42-50.

    [21] Nizamani Z A,Keil G M,Albina E,et al.Potential of adenovirus and baculovirus vectors for the delivery of shRNA against morbil?liviruses[J].Antiviral Res,2011,90(1):98-101.

    猜你喜歡
    獸疫山羊敏感性
    夏季如何讓山羊增膘
    釔對Mg-Zn-Y-Zr合金熱裂敏感性影響
    淺析小反芻獸疫免疫失敗的原因及應(yīng)對措施
    山羊受騙
    聰明的山羊
    AH70DB鋼焊接熱影響區(qū)組織及其冷裂敏感性
    焊接(2016年1期)2016-02-27 12:55:37
    小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果分析
    如何培養(yǎng)和提高新聞敏感性
    新聞傳播(2015年8期)2015-07-18 11:08:24
    微小RNA與食管癌放射敏感性的相關(guān)研究
    淺談小反芻獸疫
    91字幕亚洲| 欧美一区二区精品小视频在线| 在线播放国产精品三级| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲色图av天堂| 高清在线国产一区| 欧美日韩福利视频一区二区| 日本免费a在线| 亚洲片人在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 日日夜夜操网爽| 免费在线观看黄色视频的| 国产伦人伦偷精品视频| 久热这里只有精品99| 亚洲精品中文字幕在线视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 丰满迷人的少妇在线观看| 性少妇av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| 村上凉子中文字幕在线| www日本在线高清视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产成人av教育| 欧美日韩乱码在线| 久久天堂一区二区三区四区| 免费看a级黄色片| 亚洲中文字幕日韩| 国产1区2区3区精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 香蕉丝袜av| 岛国视频午夜一区免费看| 97碰自拍视频| 午夜激情av网站| 一级毛片高清免费大全| www.熟女人妻精品国产| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久久久久大精品| 精品乱码久久久久久99久播| 99国产极品粉嫩在线观看| 91字幕亚洲| 午夜激情av网站| 人妻久久中文字幕网| 午夜精品在线福利| 在线天堂中文资源库| 午夜福利一区二区在线看| 午夜视频精品福利| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产av一区在线观看免费| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲视频免费观看视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 夫妻午夜视频| 人人妻人人澡人人看| 最新在线观看一区二区三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲视频免费观看视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 美女午夜性视频免费| 亚洲成人久久性| 色老头精品视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久国产精品人妻蜜桃| 男人的好看免费观看在线视频 | 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产深夜福利视频在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲av熟女| 黄色视频不卡| 国产av在哪里看| 女同久久另类99精品国产91| 欧美人与性动交α欧美软件| 最近最新中文字幕大全电影3 | www国产在线视频色| 麻豆av在线久日| 国产精品日韩av在线免费观看 | 乱人伦中国视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 精品久久久久久成人av| 青草久久国产| 欧美成狂野欧美在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲第一青青草原| 午夜福利欧美成人| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产高清视频在线播放一区| 久久国产精品影院| 国产精品1区2区在线观看.| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美中文日本在线观看视频| 免费在线观看亚洲国产| bbb黄色大片| 成年人黄色毛片网站| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲七黄色美女视频| 女性生殖器流出的白浆| 国产一区二区激情短视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | www.精华液| 精品午夜福利视频在线观看一区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一区在线观看完整版| 男人操女人黄网站| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲国产欧美一区二区综合| 性色av乱码一区二区三区2| 嫩草影院精品99| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲第一青青草原| 岛国视频午夜一区免费看| 久久中文看片网| 国产一卡二卡三卡精品| 午夜影院日韩av| 色在线成人网| 嫩草影视91久久| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品成人在线| 麻豆av在线久日| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本a在线网址| 18禁美女被吸乳视频| 性色av乱码一区二区三区2| 久久人妻熟女aⅴ| 久久中文字幕一级| 极品教师在线免费播放| 男女下面插进去视频免费观看| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品二区激情视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 男女午夜视频在线观看| 午夜91福利影院| 在线观看舔阴道视频| 看黄色毛片网站| 精品久久久精品久久久| av电影中文网址| 男男h啪啪无遮挡| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲国产欧美网| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品国产国语对白av| 99久久99久久久精品蜜桃| 丝袜美足系列| 超碰成人久久| 欧美人与性动交α欧美软件| 岛国在线观看网站| 亚洲一区中文字幕在线| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美成人午夜精品| 999久久久精品免费观看国产| 好男人电影高清在线观看| 最好的美女福利视频网| 国产xxxxx性猛交| 少妇被粗大的猛进出69影院| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲,欧美精品.| 日本黄色日本黄色录像| 日韩视频一区二区在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一进一出抽搐动态| 国产亚洲欧美98| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 成人影院久久| 国产成人免费无遮挡视频| 热re99久久国产66热| 9191精品国产免费久久| 老司机深夜福利视频在线观看| 黄色成人免费大全| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜视频精品福利| 涩涩av久久男人的天堂| 国产xxxxx性猛交| a级片在线免费高清观看视频| 美女高潮到喷水免费观看| av在线天堂中文字幕 | 男人操女人黄网站| 美女 人体艺术 gogo| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人精品久久久久毛片| 精品欧美一区二区三区在线| 成人亚洲精品av一区二区 | 嫩草影视91久久| 亚洲第一av免费看| 国产成年人精品一区二区 | 国产精品永久免费网站| 精品国内亚洲2022精品成人| 丝袜美足系列| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产成人精品久久二区二区免费| 91在线观看av| 久热爱精品视频在线9| 超碰97精品在线观看| 亚洲全国av大片| 亚洲国产精品sss在线观看 | 极品教师在线免费播放| 一级,二级,三级黄色视频| www.www免费av| 日韩有码中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黑人猛操日本美女一级片| 久久影院123| 亚洲色图综合在线观看| 精品久久久精品久久久| 少妇 在线观看| 国产精品影院久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品一区二区三区四区久久 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 一区二区三区精品91| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩欧美在线二视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 在线观看免费高清a一片| 国产伦一二天堂av在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 妹子高潮喷水视频| 悠悠久久av| 久久欧美精品欧美久久欧美| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲伊人色综图| 久久精品人人爽人人爽视色| 久9热在线精品视频| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品九九99| 交换朋友夫妻互换小说| 99香蕉大伊视频| 女人被狂操c到高潮| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲色图综合在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲专区国产一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| av欧美777| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品 国内视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 法律面前人人平等表现在哪些方面| xxxhd国产人妻xxx| 岛国在线观看网站| 老司机靠b影院| 欧美激情 高清一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 电影成人av| 欧美日韩视频精品一区| 最新在线观看一区二区三区| svipshipincom国产片| 窝窝影院91人妻| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99久久人妻综合| 午夜福利一区二区在线看| 一个人免费在线观看的高清视频| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 成人国语在线视频| 人人澡人人妻人| 又黄又粗又硬又大视频| 在线观看www视频免费| 男女午夜视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 欧美激情高清一区二区三区| 桃红色精品国产亚洲av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产高清国产精品国产三级| 精品国产国语对白av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 9色porny在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲熟女毛片儿| 波多野结衣高清无吗| 另类亚洲欧美激情| а√天堂www在线а√下载| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品第一国产精品| 无限看片的www在线观看| 久久久久久人人人人人| 日韩成人在线观看一区二区三区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久午夜亚洲精品久久| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 91麻豆精品激情在线观看国产 | xxxhd国产人妻xxx| 在线观看66精品国产| 搡老岳熟女国产| 淫秽高清视频在线观看| 一区在线观看完整版| 成人18禁在线播放| 国产精品久久久久成人av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久中文看片网| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 老司机福利观看| 色综合婷婷激情| 午夜视频精品福利| 深夜精品福利| 黄片大片在线免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲少妇的诱惑av| 国产免费现黄频在线看| 国产精品成人在线| 日日夜夜操网爽| 中文亚洲av片在线观看爽| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产有黄有色有爽视频| x7x7x7水蜜桃| 窝窝影院91人妻| 久久久久久免费高清国产稀缺| 宅男免费午夜| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美日韩黄片免| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 在线av久久热| 日韩国内少妇激情av| 无遮挡黄片免费观看| 91av网站免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 色综合婷婷激情| 精品电影一区二区在线| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 看免费av毛片| 在线观看一区二区三区激情| a级毛片在线看网站| 老司机福利观看| 欧美性长视频在线观看| 最好的美女福利视频网| 大型黄色视频在线免费观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 美女高潮到喷水免费观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 脱女人内裤的视频| 亚洲第一av免费看| 久久亚洲真实| 高清av免费在线| 亚洲国产精品合色在线| 美女午夜性视频免费| 亚洲av电影在线进入| 精品国产一区二区久久| 成人精品一区二区免费| 动漫黄色视频在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 午夜精品在线福利| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产看品久久| 欧美日韩乱码在线| 国产成人欧美在线观看| 91在线观看av| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人精品在线电影| 两性夫妻黄色片| 91老司机精品| 国产成人欧美| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜免费鲁丝| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久久国产精品麻豆| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 咕卡用的链子| 国产真人三级小视频在线观看| 91av网站免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品一品国产午夜福利视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 91大片在线观看| 身体一侧抽搐| 香蕉丝袜av| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲三区欧美一区| av有码第一页| 少妇的丰满在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品偷伦视频观看了| 热re99久久国产66热| 欧美在线黄色| tocl精华| 91在线观看av| 精品一区二区三卡| 超色免费av| 丝袜美足系列| 在线观看一区二区三区| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久久久久中文| 亚洲国产看品久久| 久久精品成人免费网站| 日日爽夜夜爽网站| 丁香欧美五月| 国产色视频综合| 国产熟女xx| 精品国产美女av久久久久小说| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久久久久中文| 亚洲国产看品久久| tocl精华| av电影中文网址| 国产一卡二卡三卡精品| 三级毛片av免费| 国产精品久久久久成人av| 久久天堂一区二区三区四区| 精品国产一区二区久久| 老司机亚洲免费影院| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲欧美激情综合另类| 一级黄色大片毛片| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线播放国产精品三级| 91字幕亚洲| 免费搜索国产男女视频| 免费在线观看日本一区| 在线观看一区二区三区激情| 香蕉国产在线看| 国产熟女xx| 久久精品国产清高在天天线| 操出白浆在线播放| 手机成人av网站| 国产三级黄色录像| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久精品影院6| 大码成人一级视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 99在线视频只有这里精品首页| 午夜91福利影院| 久久中文看片网| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩中文字幕欧美一区二区| 99国产综合亚洲精品| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久中文字幕一级| 国产高清国产精品国产三级| 久久久久国内视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 91成人精品电影| 超色免费av| 中文字幕精品免费在线观看视频| 午夜福利,免费看| 中文字幕色久视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 91大片在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久亚洲真实| 99国产精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久| av片东京热男人的天堂| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 午夜福利在线免费观看网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| aaaaa片日本免费| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产亚洲av高清不卡| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产在线精品亚洲第一网站| 一级a爱片免费观看的视频| 波多野结衣一区麻豆| 手机成人av网站| 亚洲人成77777在线视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 美女大奶头视频| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲专区国产一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 怎么达到女性高潮| 国产主播在线观看一区二区| aaaaa片日本免费| 妹子高潮喷水视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 宅男免费午夜| 成熟少妇高潮喷水视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成年人黄色毛片网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产av精品麻豆| 国产激情欧美一区二区| 国产欧美日韩一区二区三| 久久久久国产一级毛片高清牌| 男女午夜视频在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 手机成人av网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲 欧美一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 波多野结衣高清无吗| 欧美日韩视频精品一区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 91av网站免费观看| 中文字幕高清在线视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 国产在线观看jvid| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 在线观看www视频免费| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 欧美久久黑人一区二区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久午夜亚洲精品久久| 少妇 在线观看| 亚洲av熟女| 国产熟女xx| 国产精品九九99| 黄色怎么调成土黄色| 黄片小视频在线播放| 黑人猛操日本美女一级片| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲精品av麻豆狂野| 岛国视频午夜一区免费看| svipshipincom国产片| 精品久久久久久,| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 又黄又爽又免费观看的视频| 香蕉丝袜av| 色综合婷婷激情| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜免费鲁丝| 国产一区二区在线av高清观看| 黄色a级毛片大全视频| 欧美午夜高清在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产真人三级小视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 高清av免费在线| 国产在线观看jvid| 欧美中文日本在线观看视频| 91成人精品电影| 久久这里只有精品19| 亚洲专区中文字幕在线| 女警被强在线播放| 纯流量卡能插随身wifi吗| av福利片在线| 久久久久久人人人人人| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲熟女毛片儿| 桃红色精品国产亚洲av| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产精品日韩av在线免费观看 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 一进一出好大好爽视频| av天堂久久9| 丰满的人妻完整版| 制服人妻中文乱码| 免费av毛片视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 成人18禁在线播放| 18禁国产床啪视频网站| 9色porny在线观看| 十八禁网站免费在线| 国产99久久九九免费精品| av有码第一页| 亚洲国产欧美网| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 757午夜福利合集在线观看| 男女之事视频高清在线观看|